重组RA-538及反义c-myc腺病毒对人胃癌、食管癌和bcl-2高表达细胞系的作用及其分子机制的体内外研究

本课题研究RA53 8、反义c ymc重组腺病毒对人胃癌 (SGC790 1 )、食管癌(EC1 0 9、EC871 2 )、正常人胚肺 2BS ( 2BS)及bcl 2高表达细胞系的体内外生物学作用及其分子机制。结果显示Ad RA53 8及Ad ASc myc对SGC790 1细胞体内外均具有明显的生长抑制及凋亡诱导作用 ,并能抑制其c myc、bcl 2、cyclinD1基因的表达及刺激bax基因的表达。对EC1 0 9、EC871 2、2BS及bcl 2基因高表达细胞系均无明显的生长抑制及凋亡诱导作用 ,对这些细胞系中c myc、bcl 2基因的表达均无调节作用。结果表明Ad RA53 8、Ad ASc myc对胃癌细胞具有显著的体内外生长抑制及凋亡诱导作用 ,其作用是c myc、bcl 2、bax、cyclinD1等一系列基因表达变化及其相互作用的结果。对食管癌、2BS及bcl 2高表达细胞系则无类似作用。     

重组腺病毒介导IL-2、TNF-α抗肿瘤实验研究

目的　研究腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a对人肺腺癌细胞系的生物学特性的影响 ,探讨重组腺病毒的体内抗肿瘤作用。方法　将分别携带有hIL 2基因、hTNF a基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2、rAd hTNF a)感染人肺腺癌Anip973细胞系 ,通过细胞生长实验、克隆形成实验等观察其对肿瘤细胞的作用 ;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL 2、TNF a的分泌量 ;通过肿瘤局部注射rAd hIL 2、rAd hTNF a的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果　rAd hIL 2、rAd hTNF a经纯化后 ,滴度可达 10 1 0 PFU ml,当病毒为 30MOI时 ,对Anip973细胞的转染率达 90 %以上。体外转染的肿瘤细胞生长能力、克隆形成率等无明显变化。 2 4h细胞培养上清IL 2的分泌量为 5 0pg 2× 10 5细胞 ,TNF a的分泌量为 2 0pg 2× 10 5细胞。体内实验表明注射rAd LacZ、rAd hIL 2、rAd hTNF a的小鼠肿瘤生长缓慢 ,体积明显小于对照组 (P <0 0 5 ) ,生存期显著延长。结论　腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a转染的肿瘤细胞形态学未见明显变化。转染hIL 2、hTNF a基因的肿瘤细胞可表达IL 2及TNF a。rAd hIL 2、rAd hTNF a重组腺病毒具有抗肿瘤作用     

Ad-IL-24对MG-63人骨肉瘤细胞抑癌效应的体内外实验

本研究旨在分析腺病毒携带的IL-24基因在体内外对人骨肉瘤细胞生长抑制效应及其分子机制。将Ad-IL-24重组腺病毒感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测IL-24在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法、流式细胞技术和Hoechst染色法检测IL-24基因的表达对MG-63细胞的生长抑制和凋亡效应;半定量RT-PCR法检测IL-24基因的表达对MG-63细胞中的bcl-2、bax、caspase-3相关基因表达的影响。用Ad-IL-24重组腺病毒在MG-63骨肉瘤荷瘤裸鼠的瘤体内进行注射治疗,观察肿瘤生长变化,15d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重。并通过免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3等与细胞凋亡相关因子的表达。结果表明Ad-IL-24重组腺病毒感染MG-63细胞后,能明显抑制MG-63细胞增殖,并能通过上调细胞中bax、caspase-3和下调bcl-2基因表达,诱导细胞凋亡,呈现出典型细胞凋亡形态学变化。Ad-IL-24重组腺病毒瘤内注射MG-63裸鼠荷瘤骨肉瘤移植瘤后,能显著抑制肿瘤生长,瘤重的抑制率可达52%,免疫组化结果显示Ad-IL-24重组腺病毒能明显上调与细胞...     

重组腺病毒Ad-Mig基因治疗裸鼠肾细胞癌的实验研究

目的:研究腺病毒介导的小鼠Mig基因对BALB/c裸鼠肾细胞癌的抗肿瘤效果,探讨肾细胞癌治疗的新途径.方法:利用786-O肾癌细胞皮下注射BALB/c裸鼠建立肾细胞癌模型,应用携带Mig基因的重组腺病毒(Ad-Mig)直接进行瘤内注射治疗,观察裸鼠皮下肿瘤生长情况和荷瘤裸鼠的生存期;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CTL和NK的杀伤活性.结果:Mig基因能显著抑制荷瘤裸鼠皮下肿瘤的生长,并使鼠生存期明显延长,还能显著增强鼠脾细胞NK和CTL杀伤活性.结论:重组腺病毒Ad-Mig基因对鼠肾细胞癌有显著治疗效果.     

重组p16腺病毒的构建及其对人白血病细胞的抑制作用

为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及野生型 p1 6基因的抗肿瘤特性 ,构建了复制缺陷型重组 p1 6腺病毒 .首先将 p1 6全长 c DNA插入穿梭质粒 p Ad CMV产生重组质粒 p Ad-CMV- p1 6,然后通过脂质体介导与 p JM1 7共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生 E1区缺失的重组腺病毒空斑 .用纯化后的腺病毒感染人白血病细胞株 HL- 60后 ,PCR及 Western blot分析显示在感染细胞中有外源性 p1 6 c DNA存在和 p1 6蛋白表达 ;被感染的 HL- 60细胞的生长受到明显抑制 ,而未感染细胞及对照腺病毒感染的细胞没有受到抑制 .结果表明 ,腺病毒作为一种新型基因转移载体 ,可有效地介导肿瘤抑制基因 p1 6的表达 ,在肿瘤基因治疗方面具有很大的应用前景 .     

hTRT反义基因转染对人结肠癌细胞生长的抑制作用

利用基因重组技术,hTRT基因反向插入真核表达载体pcDNA3．0,获得重组体pcDRTRT,通过脂质体法导入人结肠癌细胞株SW-111C,获得稳定转染细胞系,即反义细胞,该细胞易脱落,出现明显生长抑制现象;失去叠落生长能力;流式细胞仪(FCM)证实导入反义hTRT后,G0/1期细胞增加,G2M和S期细胞减少,增殖指数(PI)降低;且不能在软琼脂中形成集落;并发现反义细胞中hTRT表达水平明显下降。说明反义hTRT基因体外导入结肠在细胞株SW-111C可以明显降低端粒酶活性,抑制结肠癌细胞的生长、增殖且能使其恶性表型发生逆转。     

针对Oct-4和Survivin基因的双靶向shRNA腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞的抑制作用

转录因子Oct-4和Survivin是细胞增殖的关键调控因子,构建针对Oct-4和Survivin基因的双靶向shRNA腺病毒载体Ad5-Dual-shRNA,并研究其对肝癌细胞及移植瘤的生长抑制作用。合成Oct-4和Survivin基因的shRNA序列,插入腺病毒穿梭载体pDC312,含有shRNA的穿梭载体与腺病毒骨架载体pBHGloxdeltaE13Cre共转染HEK293细胞,经Cre/LoxP位点特异性重组获得重组腺病毒Ad5-Dual-shRNA;腺病毒Ad5-Dual-shRNA感染肝癌细胞系EHBH-H1,经Western blotting检测Oct-4和Survivin基因的表达情况,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐染色法(MTT实验)和裸鼠荷瘤实验检测对肿瘤细胞生长的影响。研究结果显示,双靶向重组腺病毒Ad5-Dual-shRNA感染肝癌细胞系EHBH-H1能够有效沉默Oct-4与Survivin基因的表达,并且在MTT实验和裸鼠荷瘤试验中都显示出较单一靶向的shRNA腺病毒载体Ad5-Surv-shRNA、Ad5-Oct4-shRNA具有更为明显的肿瘤细胞生长抑制作用。实验结果表明,特异性双靶向shRNA腺病毒载体Ad5-Dual-shRNA是一种更为高效的靶向肿瘤基因治疗载体。     

端粒酶RNA亚基模板突变抑制HeLa肿瘤细胞的生长

在端粒酶阳性的肿瘤细胞中引入带突变模板的人端粒酶RNA亚基（MT-hTR）是一种新颖的抑 制肿瘤细胞生长的方法.本研究通过构建MT-hTR真核表达重组体,初步观察其对人宫颈癌He La细胞生长的影响.通过分子克隆技术及PCR介导的定点突变技术构建野生型及突变型hTR表 达重组体,将空载体及重组体分别与质粒pEGFP-C1通过脂质体共转染HeLa细胞,经药物G418的筛选得到稳定表达外源基因的细胞.RT-PCR检测目的基因的表达,TRAP分析细胞的端粒酶活性,并通过MTT法绘制各组细胞的生长曲线.结果发现,重组体在细胞内能成功表达目的基因,并且在Mutant1转染细胞中检测到相应的突变型端粒酶活性.构建的4个MT-hTR重组体中,有3个能使HeLa细胞生长速度减缓.以上结果提示,在HeLa细胞内表达MT-hTR能抑制细胞的生长速度,并且突变模板的设计可能会影响到抑制效应的发挥.     

二氯乙酸钠和氯喹联合整合素亚单位的shRNA的协同抗肿瘤作用

目的:探究二氯乙酸钠、氯喹和表达整合素β3、β5亚单位的shRNA的重组病毒协同抗肿瘤作用。方法:探究二氯乙酸钠、氯喹和表达整合素β3、β5亚单位的shRNA的重组病毒对肝癌细胞株HepG2皮下异种移植瘤生长的影响,通过免疫组化试验检测药物对肿瘤血管生成、肿瘤细胞凋亡、增殖的影响。结果:在小鼠HepG2皮下移植瘤体内试验中可见单用氯喹对肿瘤生长抑制作用明显弱于单用二氯乙酸钠或两者合用,两药联合使用对肝癌细胞株HepG2产生的小鼠皮下移植瘤具有良好的抑制生长作用,并且使得小鼠能够很好地耐受氯喹,荷瘤所致的小鼠体重下降也得到缓解。单用表达整合素β3、β5亚单位的shRNA腺病毒对肿瘤抑制作用弱,合用两个化合物和表达整合素β3、β5亚单位的shRNA腺病毒则对小鼠HepG2移植瘤生长产生持续抑制作用,并减少单用表达整合素β3、β5亚单位的shRNA腺病毒对体重的影响。HE染色结果显示,给药后各组细胞结构被破坏,CD31和Ki67染色显示用药各组同步减少,TUNEL染色显示用药后各组细胞凋亡增加,其中二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3 shRNA腺病毒组最为明显,结果表明二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3 shRNA腺病毒联用具有显著的抗肿瘤生长作用,其机制是降低肿瘤的微血管密度、抑制肿瘤细胞的增殖和增加肿瘤细胞凋亡。结论:二氯乙酸钠、氯喹和表达整合素亚单位的shRNA的重组病毒进行组合具有协同抗肿瘤作用,为联合用药的设计及应用提供了参考。     

TnI-fast基因表达抑制卵巢癌移植瘤生长

为探讨利用TnI-fast 基因进行卵巢癌基因治疗的有效性及其机制, 将TnI-fast基因 cDNA转染人卵巢癌细胞系SKOV3. 采用MTT法和流式细胞技术分别检测TnI-fast基因转染、空载体转染和未转染的SKOV3细胞体外生长状态. 收集3种细胞培养上清液, 检测3种培养上清液对人脐静脉内皮细胞增殖抑制效应. 3种细胞分别接种到裸鼠, 观察肿瘤生长、细胞凋亡、肿瘤血管生成和TnI-fast基因局部表达. 体外试验发现, 与空载体转染和未转染的SKOV3细胞比较, TnI-fast基因表达对肿瘤细胞自身的生长无抑制作用, 但可抑制人脐静脉内皮细胞增殖. 动物实验中, TnI-fast基因表达可显著抑制肿瘤生长, 生长抑制率达73%. 其肿瘤细胞增殖率与对照组相当, 但微血管密度显著降低, 细胞凋亡显著增加. 提示, 肿瘤自身血管生成抑制可显著延缓卵巢癌生长. 利用血管生成特异性抑制基因TnI-fast进行抗肿瘤血管生成基因治疗可作为肿瘤治疗的新策略之一.     

MEK5基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对MEK5的表达抑制

目的 构建人MEK5基因的小干扰RNA（siRNA）重组腺病毒表达载体,观察其在胃腺癌SGC7901细胞中对MEK5的表达抑制.方法 设计并合成针对人MEK5基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,将得到的重组穿梭质粒用PmeⅠ线性化后在大肠埃希菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组.将PacⅠ酶切鉴定正确的重组腺病毒质粒经乙醇沉淀后转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒.病毒体外转导人胃腺癌SGC7901细胞,Western印迹法检测其对MEK5表达的抑制.结果 经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误.Western印迹检测结果显示pAd-MEK5-siRNA2可抑制MEK5基因的表达,其有效抑制率达75.5 %.结论本研究成功地构建了针对人MEK5基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步深入研究MEK5基因在人胃腺癌细胞中的作用和功能奠定了基础.     

人胚胎脑组织中低分子肿瘤抑制物的实验研究

人胚胎脑组织提取液可以抑制人白血病细胞系的生长。分析表明:肿瘤抑制活性主要分布在小于10kDa组分,经Sephadex-G25凝胶过滤可初步分离为单一组分。这种低分子肿瘤抑制物具有广谱的抗肿瘤效应,在体外可以抑制人白血病、肝癌、胃癌细胞系和小鼠粒、单核和淋巴系白血病细胞,但对人骨髓CFU-GM和小鼠骨髓CFU-GM的抑制作用较弱,说明人胎脑低分子肿瘤抑制物对肿瘤细胞具有一定的选择性抑制作用。     

一种新的重组腺病毒的构建及其对人肿瘤细胞的影响

腺病毒E1A基因诱导细胞凋亡,E1B19K基因及E1B55K基因抑制细胞凋亡,前者被克隆到腺病毒转移载体pCA13的HCMV IE启动子下游,构建成转移载体pCAE1A.采用lipofectin法将pCAE1A和含腺病毒基因组(E1区、E3区缺失)的质粒pBHG11共转染293细胞,7～10 d后得到重组病毒v5Ad4.用v5Ad4感染人肺腺癌细胞系A549,结果表明v5Ad4有明显杀伤和裂解肿瘤细胞功能.在人胚肺正常二倍体细胞中,v5Ad4没有表现出可见的细胞毒效应.     

3′非翻译区靶向人工微小RNA对PRRSV在猪肺巨噬细胞中复制的抑制作用（英文）北大核心CSCD

【目的】研究重组腺病毒(rAd)传送的3′非翻译区(UTR)靶向amiR3UTR对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪肺巨噬细胞(PAM)中复制的抑制作用。【方法】用表达amiR3UTR或对照amiRcon的腺病毒载体转染AAV-293细胞,获得rAd-amiR3UTR-GFP和rAd-amiRcon-GFP,用定量RT-PCR检测amiR3UTR在rAd转导细胞中的表达,用定量RT-PCR、Western blotting和病毒滴定检测amiR3UTR对PRRSV复制的抑制作用。【结果】原代PAM及其细胞系3D4/163均能被rAd-amiR3UTR-GFP转导,但前者转导效率很低;rAd-amiR3UTR-GFP转导细胞能有效表达amiR3UTR,且表达具有剂量和时间依赖性;rAd表达的amiR3UTR能显著抑制不同毒株PRRSV在PAM细胞中的复制,且抑制作用具有剂量依赖性。【结论】amiR3UTR能抑制不同毒株PRRSV在PAM中的复制,其rAd有望作为抗PRRSV新策略进行深入研究。     

3′非翻译区靶向人工微小RNA对PRRSV在猪肺巨噬细胞中复制的抑制作用（英文）

【目的】研究重组腺病毒(rAd)传送的3′非翻译区(UTR)靶向amiR3UTR对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪肺巨噬细胞(PAM)中复制的抑制作用。【方法】用表达amiR3UTR或对照amiRcon的腺病毒载体转染AAV-293细胞,获得rAd-amiR3UTR-GFP和rAd-amiRcon-GFP,用定量RT-PCR检测amiR3UTR在rAd转导细胞中的表达,用定量RT-PCR、Western blotting和病毒滴定检测amiR3UTR对PRRSV复制的抑制作用。【结果】原代PAM及其细胞系3D4/163均能被rAd-amiR3UTR-GFP转导,但前者转导效率很低;rAd-amiR3UTR-GFP转导细胞能有效表达amiR3UTR,且表达具有剂量和时间依赖性;rAd表达的amiR3UTR能显著抑制不同毒株PRRSV在PAM细胞中的复制,且抑制作用具有剂量依赖性。【结论】amiR3UTR能抑制不同毒株PRRSV在PAM中的复制,其rAd有望作为抗PRRSV新策略进行深入研究。     

人血小板生成素cDNA转导抑制小鼠移植肉瘤(S180)的生长

以小鼠肉瘤S180为模型 ,研究人血小板生成素 (TPO)在肿瘤基因治疗方面的价值 .在小鼠接种瘤细胞前 2周 ,或在接种肿瘤细胞同时 ,给小鼠注射 10 0 μgTPO表达质粒 (pcDNA3 hTPO) ,在 2周和 4周时肿瘤平均重量明显小于单纯质粒 (pcDNA3)注射和生理盐水对照组 (提前转导组P <0 0 5 ,同时转导组P >0 0 5 ) .当肿瘤移植量为 1× 10 6时 ,2周时肿瘤的重量依次分别为 1 75 6g、3 6 37g和 3 92 6g ;当肿瘤移植量为 1× 10 5,2周时肿瘤的重量依次分别为 0 5 76g、5 6 1g和 5 84g .在转导基因 2周时 ,移植 1× 10 5肿瘤细胞组有 4 10受试鼠完全未形成肿瘤或肿瘤的生长被中止在早期阶段 .流式细胞分析发现 ,TPO转导后 ,肉瘤内浸润淋巴细胞从以CD8+为主转变为以CD4 +或CD4 +CD8+为主 .不过 ,TPO转导对瘤细胞在体外的增殖无明显改变 .TPO转导鼠的血清对S180细胞在体外的生长速度也无影响 .推测T淋巴细胞参与了TPO基因转导所产生的抗肿瘤作用     

白细胞介素-18基因肌肉注射产生明显抗肿瘤作用(英文)

 为了探讨人白细胞介素 (h IL ) - 1 8基因转导的抗肿瘤作用 ,构建了 h IL- 1 8c DNA真核表达质粒载体 pc DNA3/h IL- 1 8.将 pc DNA3/h IL- 1 8经脂质体包裹 ,按照 1 0 0μg/只的剂量注射入雄性Balb/c小鼠后肢肌肉 ,在设定时间处死小鼠取注射部位肉提取总 RNA,应用半定量反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)及免疫组化法检测了 h IL- 1 8m RNA及其蛋白质在小鼠肌肉中不同时间点的表达水平 .随后 30只雄性 Balb/c小鼠于基因注射后第 7d腹部皮下 (i.d.)或腹腔内 (i.p.)接种 1×1 0 5个同系小鼠 S- 1 80肉瘤细胞 .观察了 S- 1 80肿瘤细胞在腹腔及皮下的生长情况、小鼠体重、肿瘤重量及存活时间 .结果发现 ,pc DNA3/h IL- 1 8注射后 2 d能检测到 h IL- 1 8m RNA表达 ,第 7d表达量较高 ,第 2 8d仍有 h IL- 1 8m RNA表达 .免疫组化染色显示了注射部位散在有 h IL- 1 8蛋白质颗粒 .h IL- 1 8基因注射组小鼠体重、肿瘤重量均比对照组轻 (P值分别小于 0 .0 0 5、0 .0 5) ,存活时间比对照组延长 .结果显示 ,真核表达系统 pc DNA3/h IL - 1 8经脂质体包裹肌注后能有效表达 ,具有明显的抑制肿瘤生长作用 .     

人血管内皮细胞生长抑制因子在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

血管内皮细胞生长抑制因子抑制肿瘤部位新生血管的形成,切断肿瘤细胞营养供应及废物排泄通道,抑制肿瘤细胞恶性增殖。将编码成熟的人血管内皮细胞生长抑制因子基因克隆到表达载体pPICZα中,电转化P.pastorisGS115菌株,抗生素ZeocinTM浓度梯度筛选高抗性转化子,PCR筛选阳性重组菌株。经表型鉴定后,用甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹杂交结果证实了表达产物为重组人血管内皮细胞生长抑制因子-his6融合蛋白,表达量约为5mg/L。经细胞毒性试验测定,表达产物对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖具有较明显的抑制作用。     

与CIK细胞结合的肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV400的构建

为了构建能与CIK细胞(Cytokine induced killer cell,CIK)结合的肿瘤特异性增殖腺病毒,我们用化学合成的35型腺病毒(Ad35)纤毛基因替换5型腺病毒(Ad5)骨架质粒的纤毛基因,获得5/35嵌合型腺病毒骨架质粒,然后与携带肿瘤特异性启动子hTERT(端粒酶逆转录酶基因启动子)和HRE(缺氧反应元件启动子)的穿梭质粒在HEK293细胞中同源重组,获得能与CIK细胞结合的肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV400。分离人外周血单个核细胞,诱导培养成CIK细胞,与KGHV400共培养获得荷载KGHV400的CIK细胞。建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,经尾静脉注射荷载KGHV400的CIK细胞,在注射后第1d、2d、3d、5d、7d、14d解剖实验鼠,用免疫组化技术检测腺病毒六邻体蛋白在移植瘤、心、肝、脾、肾组织的表达。结果显示,构建的重组腺病毒KGHV400能高效率感染CIK细胞;荷瘤鼠尾静脉注射荷载KGHV400的CIK细胞后第1d,肿瘤细胞中即有腺病毒六邻体蛋白表达,之后表达逐渐增多,第14d仍有表达;脾脏在第1~14d检测到少量淋巴细胞中存在腺病毒六邻体蛋白;心、肝、肾组织未检测到该蛋白。对照组(尾静脉注射KGHV400)在注射后第1d、2d、3d、5d,肝、脾、肾组织中检测到存在腺病毒六邻体蛋白,但第7d后为转阴性;肿瘤细胞和心肌细胞未检测到腺病毒六邻体蛋白。我们的研究结果表明,重组腺病毒KGHV400是一种有用的肿瘤基因治疗载体。     

小鼠FAM3C基因重组腺病毒载体的构建及其在肾系膜细胞中的表达

目的:利用Ad Easy TMsystem构建携带小鼠FAM3C基因的重组腺病毒,转染至人胚肾细胞系HEK293细胞,检测外源FAM3C在细胞中的表达。方法:取小鼠肾脏提取RNA,创建c DNA文库,用PCR的方法扩增FAM3C基因,将其克隆到p EASY-1载体中,T3连接酶连接。经Bgl II单酶切后,接入p Ad Tra Ck-CMV穿梭载体,T4连接酶连接,构建重组腺病毒的穿梭质粒p Ad Tra Ck-CMV-FAM3C。将经Pme I线性化的p Ad Track-CMFAM3C电穿孔共转化入BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒Ad-FAM3C,再将经Pac I线性化的Ad-FAM3C重组病毒骨架质粒转染人胚胎肾细胞系HEK293细胞,包装并扩增病毒。用Ad-FAM3C感染小鼠肾系膜细胞,Western blot法检测FAM3C在小鼠肾系膜细胞中的表达。结果:DNA序列分析和琼脂糖凝胶电泳结果表明,已构建表达FAM3C基因的重组腺病毒,该腺病毒在体外能有效感染小鼠肾系膜细胞,且高表达FAM3C蛋白。结论:成功地构建了携带小鼠FAM3C基因的重组腺病毒,为进一步阐明FAM3C的功能及作用机制奠定实验基础。