APOE4通过Calpain/p35-p25/Cdk5增加tau蛋白磷酸化

摘要 目的：探究载脂蛋白APOE4对小鼠海马组织中tau蛋白磷酸化的作用。方法：采用6月龄人载脂蛋白APOE3,APOE4转基因纯合小鼠,用Western Blot检测小鼠海马组织中tau蛋白的磷酸化程度及Calpain蛋白、p35/25、CDK5等蛋白表达水平。使用脑立体定位术向小鼠侧脑室注射Ca²⁺螯合剂EGTA或二甲基亚砜DMSO两次,给药时间间隔4小时,第二次给药结束后两小时内处死小鼠。检测海马中Calpain蛋白、CDK5、p35/25及tau蛋白的磷酸化的变化情况。结果：①与野生型小鼠和APOE3-TR小鼠相比,APOE4-TR小鼠海马中tau蛋白在Ser396,Thr181及Thr231位点的磷酸化均显著性增高,同时Calpain2、p35/25和CDK5的表达水平也增加。②使用Ca²⁺螯合剂EGTA后,与对照DMSO给药组相比,Ca²⁺螯合剂EGTA给药组小鼠海马组织中tau蛋白在Ser396位的磷酸化显著下降,但未检测到tau蛋白在Thr181及Thr231位点的磷酸发生显著性变化,同时Calpain 2蛋白、p35/25和CDK5的表达水平降低。结论：人载脂蛋白APOE4引起小鼠海马tau蛋白磷酸化异常增高,并且可能是通过Calpain/p35-p25/CDK5信号通路调控tau蛋白Ser396位点磷酸化。     

二氯乙酸钠和氯喹联合整合素亚单位的shRNA的协同抗肿瘤作用

目的:探究二氯乙酸钠、氯喹和表达整合素β3、β5亚单位的shRNA的重组病毒协同抗肿瘤作用。方法:探究二氯乙酸钠、氯喹和表达整合素β3、β5亚单位的shRNA的重组病毒对肝癌细胞株HepG2皮下异种移植瘤生长的影响,通过免疫组化试验检测药物对肿瘤血管生成、肿瘤细胞凋亡、增殖的影响。结果:在小鼠HepG2皮下移植瘤体内试验中可见单用氯喹对肿瘤生长抑制作用明显弱于单用二氯乙酸钠或两者合用,两药联合使用对肝癌细胞株HepG2产生的小鼠皮下移植瘤具有良好的抑制生长作用,并且使得小鼠能够很好地耐受氯喹,荷瘤所致的小鼠体重下降也得到缓解。单用表达整合素β3、β5亚单位的shRNA腺病毒对肿瘤抑制作用弱,合用两个化合物和表达整合素β3、β5亚单位的shRNA腺病毒则对小鼠HepG2移植瘤生长产生持续抑制作用,并减少单用表达整合素β3、β5亚单位的shRNA腺病毒对体重的影响。HE染色结果显示,给药后各组细胞结构被破坏,CD31和Ki67染色显示用药各组同步减少,TUNEL染色显示用药后各组细胞凋亡增加,其中二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3 shRNA腺病毒组最为明显,结果表明二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3 shRNA腺病毒联用具有显著的抗肿瘤生长作用,其机制是降低肿瘤的微血管密度、抑制肿瘤细胞的增殖和增加肿瘤细胞凋亡。结论:二氯乙酸钠、氯喹和表达整合素亚单位的shRNA的重组病毒进行组合具有协同抗肿瘤作用,为联合用药的设计及应用提供了参考。