SH－SY5Y细胞胞内钙库特性研究

运用单细胞显微荧光测量技术测量了单个ＳＨ—ＳＹ５Ｙ细胞内游离钙离子浓度的变化。首次报道了ＳＨ—ＳＹ５Ｙ细胞内存在毒蕈碱敏感而非咖啡因敏感的钙库,并研究了它的动力学特征。Ｎ￣￣Ｃ￣ｈｅｔｗＭａｄＵｇｈ＊ＴＯｗｈｏｍＣｂ￣ｐｏｎｄｅｎｅｅｓｈｏｕｌｄｂｅ￣．     

SH-SY5Y细胞上的钙库及钙振荡机理研究

使用显微荧光测量的方法,对未分化和分化的ＳＨ－ＳＹ５Ｙ神经杂交瘤细胞上进行的实验,发现存在着毒蕈碱受体激动剂Ｃａｒｂａｃｈｏｌ激发的钙振荡,并展示了几种类型的钙振荡模式。它是由于毒蕈碱受体Ｍ３引起的,其机理与细胞的钙库和钙通道有关。在用钙通道阻滞剂Ｖｅｒａｐａｍｉｌ和ＣｄＣｌ２抑制钙通道的情况下,钙振荡仍能继续。但在胞外完全无钙时,振荡很大程度上被抑制。另外,振荡的频率也与刺激物浓度及胞外钙浓度有关。最后并讨论了振荡可能的发生机制。     

用突起切断法分析MPP+对于多巴胺能神经细胞的损伤

对神经细胞在电压钳制方式下进行膜片钳记录受到胞体和突起空间钳位不一致的限制。本文尝试用突起切断方法区分胞体与突起的电压门控型钙电流,并据此对ＭＰＰ＋引起的钙电流变化进行分析。实验结果表明,突起上的电压门控钙通道的最大激活电压约为＋３０ｍＶ,而胞体的则为－１０～１０ｍＶ左右;ＭＰＰ＋损伤多巴胺能神经细胞后可导致电压门控型钙电流的抑制,这一抑制的Ｉ－Ｖ特性与突起钙电流Ｉ－Ｖ非常相近。由此提示,ＭＰＰ＋对于多巴胺能神经细胞的损伤更集中于其突起纤维。     

α—LTX毒素和细胞分泌过程

α－latrotoxin(α-LTX)是一种突前毒素,在细胞膜上它有两种受体,细胞内分泌过程是神经突触传递的必要步骤之一,与细胞内游离钙离子喾度密切相关,α－LTX可以钙依赖性不依赖性两种方式来影响细胞的分泌过程,对于研究分泌的分子机制和钙不依赖分泌的重要作用。     

线粒体和细胞内钙自稳平衡

线粒体对胞浆钙信号调节作用的研究已经历较长时间.近年,随着研究方法和技术的不断改进,发现在绝大多数生理条件下,线粒体都能参与胞内钙通信过程.线粒体可感受其周围钙微区的存在从而摄取钙,又可以通过钠-钙交换和大分子孔道将钙释放出来,因此可以调节胞浆钙信号的时空特性,影响相关的细胞功能.但是,由于技术上的局限性,目前的研究仍然存在模糊不清和自相矛盾之处,有待于进一步研究.     

羟墓自由基引起神经细胞［Ca~（2＋）］i增高的机制和Ebselen的抑制作用

用Ｆｕｒａ－２显微荧光测量技术研究了羟基自由基对单个皮层神经细胞内游离钙离子浓度（Ｃａ＾２＋）ｉ影响和硒化合物Ｅｂｅｌｅｎ对（Ｃａ＾２＋）ｉ的抑制作用,结果表明羟基自由基的作用首先引起胞内（Ｃａ＾２＋）ｉ以时间常数τ＝３８９５．４±５０７．２Ｓ速度缓慢增加,然后加入了以τ＝４２０．６＋１２２．０Ｓ的外钙大量涌入,钙通道阻断剂,疏基还原剂,疏基还原剂和自由基清除剂对羟基自由基损伤作用的影响提示外钙的     

膜片钳技术与电生理研究——历史与现状

一、膜片钳技术 生命的基本单元是细胞,例如人体大约由50万亿个细胞所组成。直径约5～50微米的单个细胞依靠其极薄的外壳—细胞与其他细胞隔离。细胞间与细胞内信号传导的重要途径,则是通过镶嵌在细胞膜上的称为“离子通道”的蛋白质分子进行的,德国埃尔温·内尔(Erwin Neher)和贝尔特·萨克曼(Bert Sakmann)两位细胞生物学家,所共同开创的膜片钳技术(Patch Clamp Technique),用一     

大鼠肾上腺单个嗜铬细胞分泌儿茶酚胺的电化学检测

报道以直径７μｍ的碳纤丝制作碳纤电极,在原代培养的大鼠肾上腺单个嗜铬细胞上检测诱发的儿茶酚胺激素分泌。当用微管向细胞吹加１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酰胆碱或６０ｍｍｏｌ／Ｌ氯化钾时,２－５ｓ延迟后记录到数目不等的峰形信号。峰信号上升快（约１ｍｓ）;衰减则较慢,呈指数形状。峰信号的检测要求电极上所加氧化电压足够大。实验表明,以高钾刺激时,该峰信号依赖于外钙（２ｍｍｏｌ／Ｌ）的存在。根据峰信号对应于嗜铬细胞内单个囊泡的儿茶酚胺量子化释放的事实,我们推算每次量子化释放的儿茶酚胺约为１０－２０—１０－１８ｍｏｌ量级。     

应用膜片钳技术研究细胞分泌

介绍了应用膜片钳技术研究细胞分泌机制的新进展,简述了时间分辨法在分泌研究中的基本原理与方法以及用此法研究获得的细胞分泌机制的新成果。     

重复膜片钳法研究MPP+对神经元钙电流作用

细胞膜片钳技术是研究膜离子通道的有效方法.在单个细胞上反复形成多次全细胞构型从而在同一细胞上观察某些药物的长时间作用对于通道膜电流的影响.利用全细胞构型下胞浆与电极内液的连通可以方便地向胞内引入药物.以此法研究MPP⁺多巴胺能神经瘤细胞(MN9D)的毒性作用表明MPP⁺导致细胞电压依赖性钙电流(I_Ca)显著下降;MPP⁺作用1 h以内高去极化电压较低去极化电压诱发的钙电流先受MPP⁺影响而下降; MPP⁺对未分化细胞的钙电流无显著作用(n=3).