人体白细胞转移因子和“免疫”核糖核酸的联合抽提法——Ⅱ.“免疫”核糖核酸

本文继续介绍联合抽提法的第Ⅱ部分“免疫”核糖核酸(iRNA)的抽提。将白细胞匀浆沉淀残渣按Scherrer和Darnell的十二烷基磺酸钠加苯酚的热抽提法抽提。每克白细胞可得iRNA1～2毫克。A_(260)/A_(230)=2.05～2.26,A_(260)/A_(280)=2.03～2.20。RNA含量为48.33±4.72%,DNA含量为4.31±2.53%,蛋白质为2.76±0.32%,糖原含量为42.92±9.92%。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示五条区带,相当于4S、83、9S、15S和20S。冻干的iRNA制剂经动物实验证明无毒性、无热原和无过敏性,但对家兔具有抗原性。制剂经RNase、DNase或pronase处理后与抗血清仍有沉淀反应,但经唾液淀粉酶处理后沉淀线消失。所以认为抗原性系由制剂中所含糖原所引起。溶于肝素溶液的制剂注射于病人,能提高其迟发型皮肤变态反应及细胞免疫反应。     

人体白细胞转移因子和“免疫”核糖核酸的联合抽提法——Ⅰ.转移因子

本文介绍一种制备转移因子(TF)的改进方法。白细胞于冷40%乙醇溶液中被打碎,白细胞匀浆冷冻离心,上清液除去乙醇后再通过超滤薄膜,滤液即为TFu 制剂。此法操作简便,条件严格,可避免细胞内成分的自溶及细菌或热原的污染,又可综合抽提白细胞内的“免疫”核糖核酸,适合于大规模制备TF。每单位TFu 相当于0.5克或4.45±1.35×10~8白细胞的超滤物,含固体6.86±0.72毫克,核糖183.24±26.0微克,多肽797.22±197.07微克,环化腺嘌呤核苷酸58.45±10.70毫微克。E_(250毫微米)=7.86±0.98,E_(260)/E_(280)=2.62±0.12。具有特征性葡聚糖G-25凝胶过滤洗脱图谱。动物实验证明此制剂无毒性、热原、过敏性和抗原性。注射于病人能提高其迟发型皮肤变态反应及细胞免疫反应。讨论了由透析法及本法制备的TF 理化性质差别的原因。     

“免疫”核糖核酸对热处理后的人淋巴细胞恢复花环的作用

正常人外周血T淋巴细胞经46℃处理1小时,失去与绵羊红细胞形成玫瑰花环的能力。这种淋巴细胞用正常人白细胞“免疫”核糖核酸(iRNA)4℃保温1小时,可以部分地恢复与绵羊红细胞形成玫瑰花环的能力。玫瑰花环恢复的程度在一定范围内与所用的白细胞iRNA浓度有关。白细胞iRNA经核糖核酸酶处理后其恢复玫瑰花环的能力明显降低,但脱氧核糖核酸酶或胰蛋白酶处理后对恢复玫瑰花环的作用很少影响,若白细胞iRNA先与绵羊红细胞温育,再以此红细胞与加热处理的淋巴细胞在4℃温育1小时,未见玫瑰花环的恢复作用,提示白细胞iRNA的这种作用是通过淋巴细胞来实现的。对白细胞iRNA恢复加热处理的淋巴细胞的作用机理进行了讨论。     

抗菌免疫核糖核酸组份的分离及其活性测定

<正> 抗菌免疫核糖核酸(iRNA)已用于条件致病菌感染的临床治疗,并对其免疫活性做了全面的研究。现已证实iRNA能够诱导特异性抗体的产生和传递特异性的细胞免疫,并能诱生干扰素和白细胞间素Ⅰ、Ⅱ等淋巴因子和单核因子。但制备的iRNA是含有多种RNA种类的混合物,为明确各组份的免疫学功能,我们对iRNA进行了分离,并测定不同组份的免疫活性。     

棉阿舒囊霉细胞色素C的纯化、结晶和专一性的比较

棉阿舒囊霉(Ashbya gossypii)细胞色素C可用氯化钠抽提法或乙酸乙酯自溶法从菌体中抽出,经阳离子交换树脂Zeroli*226柱层析、硫酸铵分部沉淀及反透析后,可被纯化和结晶。乙酸乙酯自溶法的抽提得率高于氯化钠抽提法。两种方法抽提及纯化的细胞色素C在电泳中都表I见为均一,但氯化钠抽提之细胞色素C的生物活力略高于用乙酸乙酯抽提的细胞色素C。     

我国水稻齿叶矮缩病毒的分离提纯及病毒形态和核酸的研究

应用比较简单的一次四氯化碳澄清,二次聚乙二酵浓缩沉淀,差速离心和20％—50％的蔗糖密度梯度离心,可以获得分离提纯效果较好的水稻齿叶病病毒(RRSV)制剂,在260nm处有最大吸收值,在A_(260)/A_(280)的比值为1.6。用醋酸铀负染方法,可以观察到RRSV为直径54nm—65nm的球状颗粒,具有底部较宽的突起,突起的高度为8—11nm,宽度约为22nm。病毒的核酸为双链RNA,共有十组分散的基因组,这一结果和四方报道的一致,在这一提纯病毒的制剂中,尚发现有其他三种大小不同的球状和线状颗粒,对它们的可能来源进行了讨论。     

不同提取方法对桂花精油品质的影响

用超临界流体萃取法(SCFE)、可食用石油醚和酒精抽提蒸馏三种不同的抽提方法,提取了咸宁桂花品种——银星的花精油;气质联用(GC-MS)分析不同方法提取精油的香气成分及其相对含量。结果表明:SCFE提取的精油得率最高(0.19%),紫罗兰酮、醇类的相对含量高达36.99%;石油醚浸提结果次之(0.13%),酒精抽提法不可取(0.07%)。     

Survivin介导的条件复制型溶瘤腺病毒表达IL-24蛋白对人肝癌细胞PLC作用机制探究

条件复制型溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24对人肝癌细胞株PLC的作用机制尚不清楚。采用流式细胞仪检测PLC经PBS、Ad.sp-E1A_((△24)以及Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24处理48h后细胞周期的变化;利用Western blot检测PLC经PBS、Ad.sp-E1A_((△24)以及Ad.sp-E1A_((△24)IL-24处理24 h、48h后细胞中凋亡信号相关蛋白表达量的变化。实验结果表明:Ad.sp-E1A_((△24)和Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24能将PLC细胞周期阻滞在S期,其值分别为43.74%±6.61%,49.48%±7.60%,两者与未感染病毒的对照组(18.91%±1.83%)进行统计学差异分析,P值均0.05;同时,Western blot检测发现随着处理时间的增加,病毒处理组中CHOP的表达量、caspase 12的剪切水平及STAT3、p38 MAPK的磷酸化水平都有明显提高,尤其以Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24处理组较为明显。SOCS3的表达量病毒处理组与对照组没有显著差异。上述结果表明重组腺病毒Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24能有效阻滞PLC细胞周期在S期,并可能通过内质网压力、STAT3与MAPK信号通路等多种途径诱发PLC细胞凋亡。     

海洋红酵母多糖提取及其对日本蟳血清中部分免疫活性因子的影响

以海洋红酵母为材料, 通过化学抽提法得到多糖, 用经典的Sevag 法进行脱蛋白处理, 经多级沉淀得到纯糖并采用硫酸-蒽酮法测得其中葡萄糖含量; 考马斯亮蓝法分析蛋白质含量。以定量海洋红酵母多糖人工注射日本蟳, 注射等量生理盐水为对照, 定时测定其血清中部分免疫活性因子的活性; 实验表明: 提取多糖为蛋白多糖, 其中葡萄糖含量为3.6%, 蛋白质含量1.9%, 含有多种氨基酸, 其中天冬氨酸含量最多; 注射后12 h 日本蟳血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD) 活力达到最高, 酸性磷酸酶(ACP) 活力在注射后24 h 达到最高, 碱性磷酸酶(AKP) 48 h 达到最高, 过氧化氢酶(CAT) 48 h 达到最高, 溶菌酶(LZM) 12 h 即达到最高, 最高点分别高于对照组24%、43%、25%、35%、95%; 72 h 后都恢复至对照组水平。结论: 海洋红酵母多糖注射48 h 内日本蟳体内免疫活性因子均有不同程度的提高, 对日本蟳有较强免疫刺激作用。     

14型肺炎链球菌荚膜多糖纯化工艺中两种去除蛋白方法的比较

目的苯酚抽提法和脱氧胆酸钠沉淀法去除14型肺炎链球菌荚膜多糖中蛋白质的效果比较。方法将3批次14型肺炎链球菌发酵培养液经超滤、乙醇沉淀等方法初步纯化后,平分成两份,分别采用苯酚抽提法和脱氧胆酸钠沉淀法去除蛋白,通过比较多糖收获量、多糖组分检定结果、多糖分子质量、多糖抗原活性、多糖核磁共振图谱,以此评价这两种蛋白去除方法的效果。结果与苯酚抽提法相比,脱氧胆酸钠沉淀法制备的14型肺炎链球菌纯化荚膜多糖除收获量较高,蛋白和核酸杂质含量较低外,氨基己糖含量、多糖分子质量、抗原活性和多糖核磁共振图谱的检定分析结果无显著性差异(P>0.1)。结论作为14型肺炎链球菌荚膜多糖纯化工艺中的除蛋白方法,脱氧胆酸钠沉淀法优于苯酚抽提法。     

还原型谷胱甘肽高产菌株的初筛及其提取工艺优化

目的:筛选还原型谷胱甘肽(GSH)高产菌株并优化其提取工艺.方法:从中科院沈阳应用生态研究所菌种保藏室的酵母菌库中筛选GSH高产的酵母菌,改进培养基组分,提高胞内GSH含量,并优化热水抽提和乙醇提取两种方法,提高提取液中GSH含量.结果:筛选获得一株酿酒酵母Y,其胞内GSH含量9.60 mg/g,培养基改良后,胞内GSH含量又提高了34.8%.通过单因素和正交试验确定热水抽提法最优提取条件为:料液比1∶3,pH 2.0,在90℃水浴中,抽提10min,GSH的产量可达14.27mg/g干菌体.结论:添加氨基酸和葡萄糖都有利于酵母菌体的生长和GSH合成.热水抽提法较乙醇提取法相比,提取效果好、无污染、操作简单,为后续的分离纯化工作奠定基础.     

异种“免疫”核糖核酸介导人肝癌细胞的免疫细胞溶解

从人肝癌细胞(BEL-7402)高度免疫过的绵羊的淋巴器官中抽提的肝癌“免疫”RNA,和正常人外周血淋巴细胞温育后,在体外能介导肝癌细胞的免疫细胞溶解。用5-~(125)碘-2′-脱氧尿嘧啶核苷标记人肝癌靶细胞的微量细胞毒性试验进行测定时观察到,正常人淋巴细胞经肝癌“免疫”RNA处理后,其细胞毒性指数在16次实验中有10次有显著增高,但是,在与对照RNA温育后其细胞毒性指数(除一次实验外)均未出现有显著意义的变化。肝癌“免疫”RNA在用RNA酶降解后,传递细胞毒性免疫反应的活性即消失,而用DNA酶或灰链霉菌蛋白酶处理,却仍保持这种传递能力。由此证明,异种“免疫”RNA能够把针对人肝癌细胞表面抗原的细胞免疫性传递给正常人淋巴细胞。     

可溶性核糖核酸的研究 Ⅲ.酵母可溶性核糖核酸中抗碱二核苷酸的分离与鉴定

利用Tomlinson和Tener的DEAE-纤维素柱层析方法,我们从酵母SRNA的碱水解产物分得抗碱二核苷酸的层析峰。将抗碱二核苷酸混合物用大肠杆菌碱性磷酸单酯酶处理后,纸层析分离可得到四个部分,分别称A_1,A_2,A_3及A_4。经鉴定A_1为2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷(G'pG),A_2主要为2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷(C'pG,纯度约为87%),A_3则至少合2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷(C'pA)和2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷(G'pA),A_4较为复杂,未最后鉴定。因此酵母SRNA中至少含有下列四种抗碱二核苷酸:2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷酸(G'pGp),2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷酸(C'pGp),2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷酸(C'pAp)及2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷酸(G'pAp)。除此以外,还得到核苷二磷酸的层析峰,其中主要为鸟便嘌呤核苷-2′(3′),5′-二磷酸,只有少量的腺嘌呤核苷-2′(3′),5′-二磷酸。     

钝顶螺旋藻藻胆蛋白的分离,纯化及其理化特性

钝顶螺旋藻(Spirulina Platensis var.nanjingensis)一变异株的水溶性色素精提物,经固体硫酸铵沉淀,羟基磷灰石(HA)和Sephadex G-100柱层析后可分离、纯化出藻蓝蛋白(C-PC)和别藻蛋白(APC)。它们的纯度可分别达到AS 620/A_(277)=4.71;A_(650)/A_(270)=5.62。纯化后的C—PC和APC在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中仅见一条色带,其最大吸收峰分别在620nm和050nm。经12％的十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE),以及高效液相色谱(HPLC)分离,C—PC和APC均可分为α和β两个亚单位。两者的亚单位分子量分别为:C—PC—α,15000;C—PC—β,14500;APC—α,15000;APC—β,13500。依此推算,该藻的C—PC和APC的最小分子量应为29.5kD和28.5kD。经等电电泳法测定,其C—PC和APC的等电点分别在4.8和4.9。氨基酸组成和含量分析结果表明,除色氨酸(Try)未测外,c—PC含有14种氨基酸,APC含有15种氨基酸,两者都缺乏组氨酸(His)和脯氨酸(Pro),C—PC还缺少蛋氨酸(Met)。     

野生大黑蚁中抗菌肽类物质的分离纯化及其耐热性

以野生大黑蚁为原料,采用索氏抽提法除脂后,经乙醇浸提法粗提,再利用透析法分离纯化,得到对细菌具有抑制作用的抗菌肽类物质,并对该抗菌肽类物质进行氨基酸分析和耐热性检测。结果表明：分离得到的抗菌肽类物质对枯草芽胞杆菌具有抑制作用,其抑菌圈直径为24 mm;结合索氏抽提除脂,乙醇浸提和透析法所得到的粗提物氨基酸含量较高;蚂蚁抗菌肽类物质表现出较高的热稳定性,80 ℃下加热50 min后抑菌活性下降。     

药用植物艾纳香基因组DNA提取方法研究

以药用植物艾纳香为研究对象,以-20℃保存、4℃保存、室温自然干燥和硅胶干燥四种样品保存方式,并采用SDS法、CTAB法、SDS-CTAB法和改良CTAB法4种不同的基因组DNA提取方法进行了对比试验,以期建立艾纳香的较好的样品保存方法和基因组DNA提取方法。结果表明,-20℃保存是艾纳香的较理想的样品保存方式;改良CTAB法是艾纳香基因组DNA提取较适宜的方法,该方法提取的DNA经紫外检测,其A_(260)/A_(280)为1.8左右,明显优于SDS法(1.1～1.5)、CTAB法(1.2～1.5)和SDS-CTAB法(1.4～1.6),琼脂糖凝胶电泳、酶切检测和PCR扩增也得出了同样的结论。     

棘托竹荪凝集素的纯化及其生化特性

棘托竹荪(Dictyophora echinovolvata Zang, Zheng et Hu)子实体经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose和Sephadex G-100柱层析纯化得到棘托竹荪凝集素(DEL).经PAGE显示单一条带,相对分子质量为38 000, 其亚基相对分子质量为18 900; 不含中性糖,IEF-PAGE测得其等电点为4.21.该凝集素对供试的4种血型人血和6种动物血的红细胞具有凝集作用,也能凝集小鼠淋巴细胞和小鼠S180肉瘤细胞,对兔红细胞的凝集作用可被乳糖和果糖所抑制.DEL含有15种氨基酸,其中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和缬氨酸含量较高; N-末端为丙氨酸.DEL对热不稳定,经50℃处理10 min,活性明显降低; 在pH 4.00～pH 10.14范围内较稳定; 其凝血活性依赖于Mn2 和Ca2 ,Mg2 和Zn2 则无影响.DEL对小鼠腹腔注射的半致死量为1 180 mg·kg-1.     

香蕉束顶病毒的纯化及理化特性

从具有典型香蕉束顶病(BBTD)症状的香蕉病组织中提纯了香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)。电镜下可观察到直径为18nm的球形病毒颗粒。最高紫外吸收在255nm,最低紫外吸收在240nm,A_(260)/A_(280)为1.30。用标准BBTV抗体通过ECL-Western转印法测定其外壳蛋白分子量为21kDa。其核酸经DNaseI、RNaseA和Mung Bean Nuclease分析,表明是约1kb的ssDNA。结果与国外文献报道一致。     

醇沉条件和干燥方式对毛头鬼伞子实体多糖品质的影响

为改善毛头鬼伞子实体多糖的性状,以粗多糖得率、多糖含量、吸潮性及色素含量为指标,对乙醇沉淀制备多糖的参数进行了优化。结果表明:子实体经提取后浓缩至浓缩比为1∶2,即m(物料干质量/g)∶V(提取液/m L)=1∶2时以60%乙醇沉淀,再以60%乙醇洗涤1次,经冷冻干燥所得粗多糖产品多糖含量较高、色浅,且吸潮性降低,性状得到明显改善。     

小菜蛾蛋白质提取方法的比较

建立适用于小菜蛾蛋白质组学研究的样品前处理方法。应用SDS-PAGE电泳比较分析了TCA-丙酮沉淀,Tris-饱和酚抽提,RIPA Lysis Buffer和I-PER Reagent直接裂解4种方法对小菜蛾幼虫总蛋白的抽提质量。结果显示:4种方法对小菜蛾全蛋白的提取率差异比较显著,其中RIPA Lysis Buffer和I-PER Reagent两种直接裂解法蛋白提取率最高,分别为52.06 mg/g和46.16 mg/g;TCA-丙酮沉淀法提取率适中,为34.58 mg/g;Tris-饱和酚抽提法提取率最低,为27.39 mg/g。SDS-PAGE电泳分析表明,Tris-饱和酚抽提法蛋白谱条带分辨率最高,蛋白条带最多,为32条,在17.0 k Da-245 k Da的范围内分布均匀;TCA-丙酮沉淀法蛋白谱带数目为30条,条带清晰,分辨率较高,但缺失部分蛋白;RIPA Lysis Buffer和I-PER Reagent两种直接裂解法蛋白谱条带数目较少,小分子蛋白条带丢失或不明显。根据蛋白提取率和条带的数量综合分析,TCA-丙酮沉淀法适用于小菜蛾蛋白质组学的样品前处理。