体外分化的人体巨噬细胞抑制天然杀伤(NK)细胞的研究

本文继先前工作后,进一步应用正常健康人外周血单个核细胞(PBMNC)经塑料培皿粘附技术把单核细胞分离出来,经培养进一步纯化,随后动态观察培养0,2,4,6和8天的单核-巨噬细胞的形态变化和对新鲜分离同种异基因个体PBMNC中NK活性的影响。实验表明,体外分化6天和8天的巨噬细胞质/核比例和胞浆内空泡显著增加,细胞直径约为0天时的2倍。这些细胞和PBMNC之比为0.5:1时,引起了NK细胞活性的50%以上抑制(4小时~(51)Cr标记K 562肿瘤的同位素释放试验)。这种抑制效应不为过氧化氢酶(Catalase 4000单位/毫升)和前列腺素合成酶的抑制剂(Indom 1×10~(-5)M)所阻断。实验证明,同种异基因个体的NK细胞不能识别巨噬细胞表面抗原,从而排除了巨噬细胞和K562肿瘤抗原竞争的可能性。实验还表明,巨噬细胞对NK活性的抑制是不受HLA约束的。应用高频超声振荡破碎巨噬细胞膜方法和免疫调变技术进一步提示,人体巨噬细胞对NK活性的抑制与巨噬细胞体积无关,而与体外分化所赋有的固有特性和它们分泌的免疫调节分子有关。     

抗肿瘤的细胞静止效应细胞耐放射性研究

此前,我们应用~(125)IUdR 技术证明,带Ehrlich 实体瘤小鼠脾脏细胞在体外对Ehrlich 肿瘤靶细胞的DNA 合成产生明显的细胞静止效应。随着肿瘤的增大,脾脏细胞对肿瘤细胞~(125)IUdR 参入的抑制也愈益增强。这种细胞静止效应是非特异的。在去除胸腺、X-线照射,骨髓重建的带Ehrlich 瘤的小鼠脾脏中也存在着这     

巨噬细胞免疫调变信号——Raf-1,MAPK,cPLA2的激活和IL-12分泌的研究

LPS介导的小鼠腹腔巨噬细胞免疫调变的信号和机理是不清楚的.应用LPS和PMA处理抑制性巨噬细胞后,发现Ras下游信号分子Raf-1,MAPK和cPLA₂均被活化,包括Raf-1的磷酸化,MAPK p44和p42磷酸化以及cPLA_2的活化,使花生四烯酸的释放显著增加,结合新近发现的LPS、PMA能诱导抑制性巨噬细胞PKC-α和PKC-ε同工酶的激活与转位,认为在LPS介导的免疫调变中,PKC信号通路的活化及其与Raf-1/MAPK通路的“连接”是主要信号传导通路.同时调变巨噬细胞也能分泌IL-12.     

p38MAPK信号通路

细胞表面受体到核的信号通路是现代生物学研究的主题之一。细胞外各种刺激通过和膜受体偶联的Ｇ蛋白和酪氨酸激酶介导了一系列丝氨酸／苏氨酸激酶介导的级联反应,即分裂原激活蛋白激酶（ＭＡＰＫ）级联反应。ＭＡＰＫ级联反应把细胞外信号传递到核,并汇总了各种信号通路来的传息,因此研究细胞内ＭＡＰＫ的信号通路是十分重要的．本文简要介绍了ＥＲＫ,ＪＮＫ和ｐ３８三种ＭＡＰＫ途径,着重叙述了ｐ３８ＭＡＰＫ信号途径的性质和功能以及在免疫细胞中的作用和某些疾病的临床关系。     

肿瘤宿主的免疫状态——Ⅱ.小鼠肉瘤180免疫抑制因子的研究

用溶血空斑试验证明,在615小鼠上移植的肉瘤180的无细胞腹水液中存在着高活性的免疫抑制因子。腹水液的免疫抑制作用与剂量相关,且仅在绵羊红血球抗原致敏前注射才能显示。此免疫抑制因子具有部分热不稳定的性质。肉瘤180带瘤小鼠的血清也有强免疫抑制活性。在C57BL小鼠上移植的肝癌和艾氏癌,在津白Ⅰ号小鼠上移植的另一株肉瘤180的腹水液和带瘤动物血清也有类似的免疫抑制作用。肿瘤无细胞腹水液引起的小鼠脾脏病理组织学变化与带瘤动物脾脏所见相类似。     

肿瘤宿主的免疫状态——Ⅰ.几种带瘤小鼠脾脏溶血空斑形成细胞的动态观察

本文应用改良的Jerne氏方法测定小鼠脾脏溶血空斑形成细胞。用此方法测定一株实体瘤(在津白小鼠上移植之肉瘤180)和四株腹水瘤(津白小鼠上移植之肉瘤180,615小鼠上移植之肉瘤180,以及C57BL小鼠上移植之肝癌和艾氏癌)带瘤动物免疫状态的动态变化。结果表明,随着肿瘤进行性生长,小鼠脾脏溶血空斑形成细胞逐渐减少,到晚期几乎不能测得。带瘤小鼠的脾脏普遍增大,病理组织学观察提示带瘤小鼠溶血空斑反应之低下与其脾脏的病理学改变相关。     

肿瘤宿主的免疫状态 Ⅲ.带Ehrlich实体瘤小鼠脾脏细胞在体外对肿瘤细胞的细胞静止效应的动态观察

应用5-~(125)碘-2’-脱氧尿嘧啶核苷(~(125)IUdR)参入抑制试验,证明带Ehrlich实体瘤的C57BL 小鼠脾脏细胞可在体外对同一移植肿瘤细胞的DNA 合成产生显著的抑制。随着肿瘤的增长,带瘤小鼠的脾脏进行性增大,脾细胞对肿瘤细胞的抑制效应也随之增强。这种对肿瘤细胞DNA合成的抑制作用是非特异的。肿瘤切除后,抑制效应也随之下降,到术后21天,细胞静止效应已不能测得。本文还应用~(125)IUdR技术同时测定了带瘤小鼠脾脏的T 杀伤细胞,脾脏淋巴细胞对致分裂原Con A 与PWM 的转化反应的动态变化,实验表明带瘤小鼠脾脏T、B 淋巴细胞的功能是受抑制的。组织病理学观察提示,带瘤动物脾脏的网织细胞和巨噬细胞的增多可能与细胞静止效应的增强有关。     

IFN-g促进LPS对小鼠抑制性巨噬细胞IL-12 p40/p35的表达

IL-12是由p35和p40两个亚基组成的可诱导细胞因子, 其重要的生物学功能是促进Th1细胞分化, 调节细胞免疫的抗病毒和抗肿瘤作用. 用半定量RT-PCR结合银染对LPS, LPS/IFN-γ作用下小鼠抑制性巨噬细胞IL-12 p40 和 p35两个基因mRNA的表达及NF-κB信号与表达的相互关系进行了研究, 发现IFN-γ不仅能显著促进LPS诱导的IL-12 p40 mRNA 的表达, 同样能明显上调IL-12 p35 mRNA水平, 两者表达水平大致相当, 而且IFN-γ 相应地促进了IL-12 p70的分泌. 蛋白酶小体抑制剂PSI显著抑制了LPS, IFN-γ , LPS/IFN-γ 诱导的IL-12 p40, p35mRNA的表达, 并对LPS, LPS/IFN-γ 诱导的Ik Ba 降解也有明显的抑制效应. LPS单独处理可增强NF-κB与小鼠p40基因启动子-146 ～-112区DNA特异序列的结合, 但IFN-gγ并不能加强LPS诱导的NF-k B与DNA的结合, 也不能促进LPS诱导的Ik Ba 降解. 以上结果提示: (ⅰ) IFN-/LPS共同作用, 可促使IL-12 p40和p35 两基因mRNA高水平表达并相互协调. 这种高表达和IL-12 p70的分泌增加相一致. (ⅱ) NF-B是LPS, IFN-g /LPS诱导的IL-12 mRNA表达的基本信号通路. (ⅲ) 蛋白酶小体抑制剂PSI通过抑制Ik Ba 降解, 进而抑制LPS和LPS/IFN-g 诱导的IL-12 p40与p35 mRNA的表达. (ⅳ) IFN-γ 通过非NF-κB信号途径增强LPS诱导的p35/p40 mRNA表达.