我国小型猪品系资源状况初浅分析

小型猪正逐渐成为生命科学研究中的重要实验动物。我国具有独特和丰富的小型猪资源,我国小型猪品系或资源涉及资源品系、封闭群、近交培育品系等。本文就我国的小型猪品系资源状况进行了介绍和初步分析。     

我国实验小型猪的发展现状及展望

实验动物广泛应用于科学研究领域,实验小型猪在医学研究领域中越来越得到重视。中国小型猪种源丰富,不同种群各具特色,遗传性状稳定。近年来中国实验小型猪的研究处于快速发展阶段,生产和使用均在逐年增加。我国发展实验小型猪具有天然封闭群特性和高度近交等得天独厚的条件,品系化、标准化、规模化和产业化是我国实验用小型猪的主要发展趋势。我国实验用小型猪发展当前面临的问题主要表现在:保护力度小、发展阻力大、育成品系少三个方面。育成中国各具特色的实验用小型猪品系需要增加投入,利用先进的科学技术例如基因编辑和动物克隆技术,加速小型猪的定向化培育进程。     

巴马小型猪与贵州小型香猪遗传多样性的RAPD分析

应用经过筛选的31条引物对巴马小型猪和贵州小型香猪的基因组DNA进行RAPD扩增,分析二品系实验用小型猪的遗传多样性.两品系实验用小型猪品系内及品系间多态性位点的百分数分别为30.9%和25.7%,品系间及品系内的平均遗传距离分别为0.120、0.072和0.067.结果表明,两品系实验用小型猪品系间及品系内遗传多样性贫乏,遗传变异较小.     

三个品系小型猪正常心电图的比较

目的建立清醒状态记录小型猪心电图的方法,并对3个品系小型猪6个导联心电图进行分析比较。方法选用4月龄广西巴马猪7头、5月龄五指山小型猪6头、中国农大小型猪10头,清醒状态下吊床保定,测定Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、aVR、aVL和aVF6个导联的心电图。结果3个品系小型猪心电图的波形与人相似,心率较快,在3个品系之间差别不明显,存在偶发性窦性心率不齐。广西巴马猪、五指山小型猪和中国农大小型猪的P-R间期分别介于0．08—0．10s、0．08—0．11s和0．08—0．11s;QRS波群分别介于0．04—0．06s,0．04—0．07s和0．04～0．05s。3个品系小型猪均有清晰的S-T段,偏移小于1mm。结论本研究获得了3个品系小型猪清醒状态时的心电图基本数据,经比较,3个品系之间无明显差异。     

小型猪葡萄糖转运子4外显子4a的基因多态性分析

目的分析我国特有的3个小型猪品系巴马小型猪、中国农大小型猪、五指山小型猪葡萄糖转运子4基因外显子4a的单核苷酸多态性（SNPs）分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病研究中提供基础资料。方法以3个品系小型猪基因组DNA为模板,应用特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化测序,进行BLAST比对分析。结果在小型猪GLUT-4基因外显子4a上有2个SNP位点：SNP1：GCT→GCC（Ala133 Ala）,3个品系均发生了变化,均为纯合突变,其突变率为（22/22,100%）。SNP2：GGC→GGT（Gly146 Gly）,巴马小型猪突变率为（6/6,100%）,均为纯合突变;五指山小型猪突变率为（6/6,100%）,均为纯合突变;中国农大小型猪突变率为（10/10,100%）,其中包括6例纯合突变（6/10,60%）和4例杂合突变（4/10,40%）。结论SNPs1,在所有测定的小型猪品系中检出,这可能是所测小型猪的共有特征。SNPs2可能是小型猪品系之间的差异。     

贵州小型香猪和广西巴马小型猪微卫星位点的遗传学分析

利用35个微卫星位点对贵州小型香猪,广西巴马小型猪的封闭群进行了遗传检测,计算出两个小型猪品系个体样本微卫星位点的平均杂合度,多态信息含量（PIC）、有效等效基因数及品系间的遗传距离。结果表明两个品系的小型猪平均杂合度和PIC均较低,有效等效基因数与实测等位基因数较接近,也表明两品系均有稳定的遗传;两者的遗传距离表明贵州小型香猪和广西巴马小型猪亲缘关系较近,同时表明两者已分别成为两个猛增的封闭群动物。     

小型猪胰淀素基因的多态性分析

目的探讨我国3个特有的小型猪品系,巴马小型猪,五指山小型猪,中国农大小型猪胰淀素（IAPP）基因多态性分布,为我国小型猪在2型糖尿病及代谢性疾病研究中的应用提供基础资料。方法提取3个品系小型猪血液基因组DNA,针对IAPP基因外显子3~内含子3的部分序列进行PCR扩增,产物鉴定、测序,统计分析基因多态。结果在所扩增的片段中共检测出2个SNPs位点,SNPs1：43G→A,位于外显子上,未引起的氨基酸的改变,突变发生在五指山猪（G/A杂合突变为16.7%,A纯合突变为83.3%）和中国农大猪（G/A杂合突变60%,A纯合突变为20%两个品系中。SNPs2：214C→T,位于内含子上,发生在五指山猪（T/C杂合突变为16.7%,T纯合突变为83.3%）和中国农大猪（T/C杂合突变为20%,T纯合突变为60%）两个品系中。结论在IAPP基因外显子3-内含子3的部分扩增序列中发现了2个SNPs位点,在3个品系小型猪中的分布不同。     

三品系小型猪35个微卫星基因座的遗传学研究

利用35个微卫星基因座对中国三个品系的小型猪（贵州小型香猪、广西巴马小型猪、版纳小耳猪近交系）进行了遗传检测。计算出三个小型猪品系个体样本在35个微卫星基因座的纯合率,并对其进行t检验。计算出各品系的平均杂合度,多态信息含量（PIC）及品系间的遗传距离,并进行了系统聚类。结果表明三个品系的小型猪其基因纯合率均较高,其中版纳小耳猪近交系的基因纯合率最高;PIC和平均杂合度均较低;贵州小型香猪和广西巴马小型猪亲缘关系较近,并均与版纳小耳猪近交系的亲缘关系略远。 Abstract：The polymorphism of 35 microsatellites in the three miniature pig breeds in China(Guizhou miniature pig, Guangxi Bama miniature pig, Banna miniature pig inbred) was analysed. Rates of homozygote for 35 microsatellite loci in three miniature pig breeds were calculated,and t-test for them were performed. Mean heterozygosity and polymorphism information content(PIC) were calculated for all breeds, and genetic distances between these breeds were estimated. The dendrograms were obtained based on genetic distances. The results suggest that rates of homozygote in the three breeds are all high, and that is the highest in Banna miniature pig inbred. The results also suggest that polymorphism information content and mean heterozygosity in all the three breeds are low, and the genetic relationship between Guizhou miniature pig and Guangxi Bama miniature pig is closer than their relationship with Banna miniature pig inbred.     

中国三种实验用小型猪mtDNA D-l00P多态性分析

分析中国三种实验用小型猪线粒体DNA(mtDNA)D-loop的多态性,建立各品种品系猪的遗传标记,为各品种品系猪的鉴别提供依据.应用PCR对西双版纳近交系小耳猪、广西巴马小型猪、贵州小型香猪和长白猪血液总DNA样品中mtDNA D-loop进行扩增,用23种限制性内切酶消化,观察其酶切多态.PCR扩增其mtDNA D-lcop 5′端227 bp高变区域,应用PCR-SSCP和PCR直接测序分析,观察其单链构象多态和序列多态.结果显示:3种小型猪之间未见酶切长度多态、单链构象多态和序列多态;与长白猪之间表现出单链构象多态和序列多态.本研究认为:3种实验用小型猪之间mtDNA多态性贫乏,证明其在母系起源和进化上的一致性,亲源关系很近,应用PCR-RFLP、PCR-SSCP和PCR直接测序分析,尚不能作为3种实验用小型猪品种品系鉴定的依据,但与长白猪等欧系猪比较有一定差异.     

实时荧光定量检测中国实验用小型猪肝脏CYP3A29 mRNA表达水平

CYP3A29是猪肝脏最重要的药物代谢关键酶。研究中国实验用小型猪肝脏CYP3A29 mRNA的表达特性对于评估其是否适宜于作为人CYP3A4介导的药理学研究动物模型具有一定意义。以b-actin作校正, 利用TaqMan定量技术对巴马香猪、贵州小型香猪肝脏CYP3A29 mRNA表达水平进行检测, 并以荣昌猪作为对照。结果表明, 巴马香猪、贵州小型香猪、荣昌猪肝脏CYP3A29 mRNA表达水平与报道的人肝脏CYP3A4相近; 三品系(种)猪间肝脏CYP3A29 mRNA表达水平较为接近, 但品系(种)内个体间变异较大。提示巴马香猪、贵州小型香猪作为药物评价的实验动物具有一定可行性。     

猪前列腺素内过氧化物酶2(PTGS2)基因的遗传变异及其与繁殖性状相关性研究

前列腺素内过氧化物酶2是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶,在包括排卵、受精、着床、分娩等一系列生殖过程中起着重要作用,因而编码该酶的基因是影响繁殖性状的重要候选基因。通过PCR—RFLP分析前列腺索内过氧化物酶2基因在15个中外不同繁殖性能猪种中的遗传变异,结果表明,不同类型中国地方猪种和外来商业猪种往此摹因位点上存在丰富的多态性,繁殖性能相埘较好的江海型、华北型和华中型猪种中A等位基因表现为优势等位基因,卡方检验显示其基因频率分布与西方商业猪种及繁殖性能较低的高原型藏猪和华南型猪种差异均极为显著（P〈0．001）。利用二花脸x杜洛克资源家系F2群体分析该基因与繁殖性状的相关性,在180头F2代母猪群体中,未能进一步证实该基凶位点对总产仔数、产活仔数和死胎数3个繁殖性状存在显著影响（P〉0．05）,但携带优势等位基因4的个体趋向于拥有较高的总产仔数、产活仔数和偏低的死胎数,鉴于该基因的重要作用,基于全基因序列的SNP扫描和大样本群体的相关性分析仍很有必要。     

藏猪种质资源细胞遗传学研究

藏猪是我国宝贵的地方品种资源,也是我国国家级重点保护品种中唯一的高原性猪种.通过细胞遗传学方法,对藏猪以及长白猪的普通核型、G-带染色体以及C-带染色体进行对比研究,发现藏猪特有的染色体带型.这为分析鉴别藏猪种质资源提供了细胞遗传学证据.     

用RACE技术快速扩增五指山猪来源的猪内源性反转录病毒3＇LTR

测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3'LTR,以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3'端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号;其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致,同源性分析表明其与PERV-MSL的3'LTR具有81%的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆。     

Genetic Diversity of Chinese Native Pigs Inferred from Protein Electrophoresis

We examined protein polymorphism of 20 nativepig breeds in China and 3 introduced pig breeds. Thirtyloci have been investigated, among which six loci werefound to be polymorphic. Especially, the polymorphismof malate dehydrogenase (MDH), adenylate kinase(AK), and two new alleles of adenosine deaminase (ADA)had not been reported in domestic pigs and wild pigs.The percentage of polymorphic loci (P), the meanheterozygosity (H), and the mean number ofalleles (A) are 0.200, 0.065, and 1.300, respectively.The degree of genetic variability of Chinese pigs as awhole was higher than that of goats, lower than thatof cattle and horses, and similar to that ofsheep. Using the gene frequencies of the 30 loci, Nei'sgenetic distance among the 20 native breeds in China and3 introduced pig breeds was calculated by theformula of Nei. The program NEIGHBOR in PHYLIP3.5c was chosen to construct an UPGMA tree and a NJtree. Our results show that, of the total geneticvariation found in the native pig breeds in China, 31%(0.31) is ascribable to genetic differencesamong breeds. About 69% of the total genetic variationis found within breeds. Most breeds are in linkagedisequilibrium. The patterns of genetic similaritiesbetween the Chinese native pig breeds were notin agreement with the proposed pig type classification.     

云南地方猪种随机群体与选育群的遗传差异(英文)

为估计随机群体与选育群间的遗传差异,测定了云南地方猪种102个个体438bp的线粒体DNA D-loop片段,涉及4个随机群体、1个保种群和1个核心群。检测的16个多态位点界定了20个单倍型,撒坝猪核心群和版纳微型猪保种群的单倍型数量仅为3个和1个,而4个随机群体的单倍型数量都在6个以上,4个随机群体的单倍型多态度极显著高于这两个选育群(h=0.732对0.425和0.000,exact test,P≤0.0036)。结果发现,选育会导致遗传多样性过低, 尽管在随机群体中有较高的遗传多样性,基于此,及早干预和合理的育种计划将会有效地阻止核心群和选育群的遗传多样性下降。否则,选育甚至会在短短几年内使遗传多样性程度急剧下降, 表明育种、保种与遗传多样性保存之间存在着尖锐冲突。该文还讨论了几个群体的遗传关系。     

Seroprevalence and risk factors for Toxoplasma gondii infection on pig farms in central China

Toxoplasma gondii is a protozoan parasite that causes severe diseases in mammals, including humans, around the world. In China, pork is the main meat source; accordingly, T. gondii in pigs is considered an important source for human toxoplasmosis. Understanding the epidemiology of toxoplasmosis in pig farms is thus important for control of the disease in humans. The purpose of the present study was to investigate the epizootiology of T. gondii infections in pig farms in central China by assessing the seroprevalence and risk factors of this disease. In the present study, 3,558 sera samples were collected from pigs in 37 large-scale pig farms in this region and tested by AG-ELISA. The total seroprevalence was 24.5%, with the greatest prevalence in breeding pigs. The risk factors for toxoplasmosis suggest that high frequency of the contact of pigs with cats (P ≤ 0.01; IC 95%), high density of pig breeding (P ≤ 0.01; IC 95%), the presence of mosquitoes and flies (P ≤ 0.01; IC 95%), semi-patency pens (P ≤ 0.05; IC 95%), and low frequency of scavenging (P ≤ 0.01; IC 95%) were all associated with seroprevalence. In addition, the use of sulfonamides (P ≤ 0.01; IC 95%) significantly decreased seroprevalence. This is the first report of anti- T. gondii antibodies in pigs on large-scale pig farms in central China. The findings will provide useful information for designing control strategies of toxoplasmasis in pig farms.     

中国主要地方品种猪血液蛋白遗传多样性研究

实验采用水平板淀粉凝胶电泳技术,对中国地方猪五大类型９个品种,１个引入品种共２０１个个体进行了遗传多样性分析。共分析遗传座痊３０个,其中只有ＭＤＨ、ＰＥＰＢ、Ａ从位具有多在记民生。中国主要地方猪品种的多态座位百分比Ｐ＝０．２００,平均杂２合度Ｈ＝０．０６５,平均等位基因数Ａ＝１．３００。根据基因频率采用ＰＨＹＬＩＰ３．５ｃ民计算Ｎｅｉ氏遗传距离,然后用“ＮＥＩＧＨＢＯＲ”程序分别构建Ｎｅｉｇｈｂｏ