《细胞生物学》课堂教学模式改革的探索与实践

为了更好地培养学生的能力,必须对传统的教学模式进行改革。针对传统教学模式下生物工程专业细胞生物学教学中学生积极性和主动性不强、缺少综合能力训练内容、作业抄袭、新知识与新进展反映不理想等问题,通过设定合理题目、规定格式和内容、单独报告、择优讲演等方式,利用学生的好胜心理、竞争性和成就感等,提出了新的教学模式。教学实践证明,新的教学模式能够充分调动学生学习的积极性和主动性,提高学生对专业知识的综合与归纳能力、表达演讲能力和电脑使用技能,同时也避免了作业抄袭现象的发生,强化了学生的自信心。另外,也对新模式中存在的问题进行了思考与建议。     

中国被毛孢分生孢子形成过程显微结构的研究

分生孢子是中国被毛孢(H sinensis)生活史中极为重要的一个环节,其在冬虫夏草侵染和形成过程中有着十分关键的作用.本实验以中国被毛孢纯培养菌种为实验材料,采用显微镜观察了其菌丝体经营养生长产分生孢子过程中显微结构变化,结果表明:中国被毛孢在固体培养条件下,可以形成分生孢子,其形态和产生方式与微循环产孢过程中形成的分生孢子一致,同时,在产孢过程中,还存在瓶梗结构纵裂形成对生分生孢子的现象.     

猪内源性反转录病毒5′端非编码区的克隆及结构分析

通过五指山猪内源性反转录病毒5′端非编码区(5′UTR)cDNA的克隆,分析其一级结构和调控元件,为进一步研究其在PERV复制、转录中的调控机制奠定基础。本研究采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得全长约1035bp的PERV 5′UTR。通过NCBI公共数据库BLASTn序列进行同源性分析,并应用KEGG数据库对该转录调控区进行顺式作用元件定位分析,结果发现PERV 5′UTR与GenBank公布的部分PERV 5′UTR相比较,同源性在82.6~94.8%之间。一级结构分析发现PERV 5′UTR由U3、R、U5区、引物结合区(PBS)及前导序列组成,可能的核心启动子序列与具有增强子作用的39bp重复序列分别位于U3区的-67~ 1与-97~-59区段。在5′UTR转录调控区(-428~ 507)鉴定出31个有效的顺式作用元件位点,其中NF-Y、TBP、Oct-1、HSF、GATA-1和GATA-2等与PERV的转录、调控密切相关。     

冬虫夏草菌实时荧光定量PCR内参基因的筛选

以冬虫夏草单子囊孢子分离得到的菌株TZ8-1的3种菌丝形态为实验材料,提取RNA,经反转录获取cDNA,选择了11个持家基因为候选内参基因（18S rRNA、APRTase、β-TUB、RPL2、EF1-α、PGI、PGM、H⁺-ATPase、ACT1、UBQ和GAPDH）,根据该菌基因组注释结果来设计引物,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术进行定量扩增,利用geNorm、NormFinder和BestKeeper算法程序进行表达稳定性评估,并用RefFinder对评估结果进行综合排比,最终筛选得到了最适内参基因。结果表明,所选取的11个候选内参基因均可作为冬虫夏草菌菌丝体时期的内参基因,稳定性最好的3个内参基因分别是UBQ、PGE和ACT1,稳定性较差的3个内参基因分别是GAPDH、RPL2和β-TUB。     

自噬在肝脏蛋白质和脂质代谢中的作用

自噬是一个通过降解细胞组分如细胞器和蛋白质等以维持细胞存活和功能的重要的溶酶体途径。肝脏作为新陈代谢的中枢器官,肝脏高度依赖于自噬以发挥正常功能并防止疾病发展。肝细胞自噬的改变参与肝损伤,脂肪肝等肝病的病理变化,以自噬为靶点寻求治疗各种肝病的方法已成为热点研究领域,但自噬在肝脏蛋白质和脂质代谢中的作用极其机制尚不清楚。本文对自噬在肝脏蛋白质和脂质代谢中的作用的最新进展进行综述。     

三种提取冬虫夏草菌丝体基因组DNA方法的比较

采用改良氯化苄法、CTAB法、蛋白酶K裂解法这三种方法,对冬虫夏草菌丝体基因组DNA进行提取,将提取的基因组DNA经过紫外分光光度计检测纯度和计算浓度、琼脂糖凝胶电泳分析及PCR扩增,结果表明,3种方法均能提取到符合分子生物学的DNA,其中蛋白酶K裂解法纯度最高,含蛋白质少,改良氯化苄法、CTAB法次之。而浓度则是改良氯化苄法最高,CTAB法、蛋白酶K裂解法次之。3种方法所提取的DNA均能扩增出理想条带。     

用RACE技术快速扩增五指山猪来源的猪内源性反转录病毒3＇LTR

测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3'LTR,以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3'端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号;其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致,同源性分析表明其与PERV-MSL的3'LTR具有81%的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆。     

恒温和变温培养对羊肚菌菌丝生长及菌核形成影响的比较研究

为了探究恒温和变温培养对羊肚菌菌丝生长和菌核形成的影响,设置-9℃-30℃的7个恒温处理,3个变温处理,通过观察和记录在两种不同培养方式下菌丝的长势、生长速度、菌落干重、产核时间、菌核数量等内容,从而比较出恒温和变温培养对羊肚菌菌丝生长和菌核形成的影响效果。结果表明,在恒温条件下羊肚菌菌丝生长和菌核发育比变温好,20℃最适宜菌丝生长,菌丝生长速度较快,菌落干重最大;25℃最适宜菌核生长发育,产核最早。菌核数量最多。     

甘肃省冬虫夏草遗传多样性的ISSR分析

对采自甘肃省3个冬虫夏草主产区域6个具有代表性地方的18个样本进行ISSR分析。15条ISSR引物共扩增得到条带清晰并呈多态性的95条谱带,每一引物扩增获得的ISSR条带数在3－9条之间,扩增片段集中在300－3,000bp。基于遗传相似性系数（GS）、不加权成对群算术平均法（UPGMA）构建的系统树分析,可以看出：分离自同一株虫草上不同部位的样本无显著遗传差异;同一地点样本间的遗传分化较小;不同地域的样本间存在着较大的遗传分化,遗传多样性较丰富。同时6个地方的冬虫夏草明显地分为3个区域,而在同一区域不同     

用RACE技术快速扩增五指山猪来源的猪内源性反转录病毒3''LTR

测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3'LTR,以便于PERV全基因的克隆和分析.用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-T easy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析.测序结果显示该克隆3'端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号;其R区与PERV-MSL的R区(约64 bp)基本一致,同源性分析表明其与PERV-MSL的3'LTR具有81%的序列同源性.说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆.