小鼠单个植入前胚胎SSH方法的可行性

为建立一种能够一次性分离任意两个植入前胚胎之间全部的差别表达的基因的方法 ,在已有的单胚胎操作技术的基础之上 ,对单个植入前胚胎抑制性消减杂交 (singlepreimplantationembryosuppressionsubtractivehybridization ,SPE SSH)方法进行了初步的探索 ,分离到OM2和MⅡ d 2的基因片段 ,经GenBank和文献检索发现 ,这两个基因具有在MⅡ期和 2细胞期特异性表达的特点 .利用cDNA阵列所进行的鉴定也获得了同样的结果 ,而且所使用的材料极少 ,说明SPE SSH是一种强有力的分离和识别早期发育相关基因片段的实验技术 .若与单个卵裂球分离技术相结合 ,还可用于分离和识别人类早期分子诊断的标记性基因     

小鼠2-细胞胚胎ATP合成酶6基因特异表达分析及鉴定

合子基因组活化是小鼠胚胎早期发育由细胞质调控向核调控转变的关键 .小鼠合子基因组活化发生在 2 细胞胚胎阶段 ,通过对 2 细胞胚胎阶段特异性表达基因的分析 ,可以从分子水平上揭示早期小鼠胚胎的发育机理 .用DD RTPCR技术 ,从单个小鼠 2 细胞胚胎与成熟卵母细胞 (MII细胞 )中分离了 2个差异片段 ,片段 2同小鼠睾丸中表达的一个未知片段具有高度同源性 .经过cDNA文库构建、筛选 ,分离到其全长cDNA .序列分析结果表明 ,该基因为小鼠ATP合成酶亚单位 6基因 .ATP合成酶亚单位 6基因由线粒体DNA编码 ,与细胞内ATP的合成相关 .小鼠 2 细胞胚胎特异表达的ATP合成酶亚单位 6基因可能与胚胎正常发育相关     

小鼠植入前胚胎紧密化相关基因Crg1的克隆

从已获得的运用抑制消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)分离、克隆和筛选代表8-细胞早期胚胎和紧密化8-细胞胚胎差别表达基因的ESTs片段(GenBank登录号：BQ740263、BQ740251)入手,经比较二者的同源性发现这两个EST末端反向互补,拼接成一个cDNA片段,经分析此序列包含一个完整的阅读框,提交给GenBank,登录号为AY134859。根据此序列设计引物从小鼠8-细胞紧密化胚胎cDNA中经PCR扩增出目的片段,克隆入pUCm—T载体后测序而获得全长cDNA,为小鼠植入前胚胎紧密化相关基因Crg1,分析比较证明Crg1基因与AY134859基本吻合。Crg1基因的cDNA全长为810bp,只有一个外显子,编码由150个氨基酸组成,分子量理论值为17．67kD的蛋白质。与最新的小鼠基因组工作草图进行电子杂交,该基因被定位在小鼠的14号染色体上。RT—PCR实验证明在小鼠植入前各个时期的胚胎、小鼠胚胎干细胞中均有表达,在小鼠胚胎成纤维细胞中没有表达。半定量RT—PCR实验证明Crg1基因在紧密化胚胎中表达较8—细胞胚胎高。采用Northern—blot手段分析Crg1基因在成年小鼠的8种组织中的表达情况,结果表明该基因只在小鼠卵巢中有微弱的表达,转录本大小为1．2kh,而在成年小鼠的脑、心脏、肾、睾丸、肝脏、肺、脾等中没有表达。研究表明,Crg1基因可能与小鼠胚胎紧密化及保持细胞的全能性相关。     

Ywhaz和ATPase6在小鼠植入前胚胎中阶段特异性表达的分析

Ywhaz基因与卵裂球之间的通讯以及细胞通讯系统的建立有关,而ATPase6基因对1-细胞向2-细胞转变是非常关键的并在氧化磷酸化系统的建立中起重要作用。本文报道小鼠2-细胞期胚胎特异表达的基因的表达分析。对mRNA差异显示技术（DDRT-PCR）进行改进,使之在小鼠植入前胚胎发育领域得以应用。通过对感兴趣的差异片段进行回收,亚克隆,序列分析和反向Northern杂交,结果表明：Ywhaz和ATPase6是2-细胞期胚胎特异表达的基因。     

兔单个植入前克隆胚胎cDNA文库的构建

人与小鼠和牛在正常胚胎植入前发育过程中基因活化的研究已经取得了长足的进展 ,但是还没有对同期克隆胚胎相关研究的报道 .利用单个家兔植入前移核重构胚胎成功地构建了MⅡ卵母细胞及发育至 4 、8 细胞期的胚胎和囊胚的特异性cDNA文库 .并用 β肌动蛋白和LAPTM4α证实这类文库是可靠的 .以 8 细胞期移核重构胚cDNA文库为例 ,随机挑取克隆进行测序分析 :其中 2 3的基因EST片段可以在GenBank或EST库中找到同源序列 ,约 1 3的EST片段属于未知的新片段 ,表明这是一类重要的新兴基因资源库 (期特异性EST库 ) .这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法 ,解决了胚胎研究材料受限的问题 ,在时间上更加精确 ,更符合胚胎发育的规律 ,也能够更加准确地反映出一些克隆胚胎的异常表型 ,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎再程序化基因表达的一种有效手段 .     

单个植入前胚胎mRNA差异显示方法的建立

在已有的研究基础上,优化和建立了单个植入前胚胎的mRNA差异显示（single preimplantation embryo differential display polymerase chain raction,SPEDDRT-PCR）.以小鼠单个成熟的卵母细胞和单个的2细胞期胚胎作为起始材料,比较二者之间基因的表达差异.选择在卵母细胞中不表达而在2细胞期表达的差异片段.进行GenBank检索和表达序列标签(EST)库电子克隆.与多胚研究方法一样,由线粒体编码的和2细胞特异表达的NADH脱氢酶亚单位2和ATPase 6证实了SPEDDRT-PCR方法是可行而且可靠的,是一种需要材料极少、应用广泛而有效的基因分离方法.     

小鼠单个植入前胚胎cDNA文库的构建及应用

哺乳动物合子基因组激活和植入前胚胎阶段特异性表达基因的研究一直是发育生物学研究的重点。发现和克隆植入前胚胎阶段特异性表达的基因需要有效的方法,阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种较好的方法。用小鼠单个成熟卵细胞、受精卵、2细胞、4细胞和8细胞胚胎分别构建了cDNA文库。滴度分别为:62×105、83×105、104×106、151×106和162×106。随机挑选了29个克隆并进行了序列分析,结果表明,和已知表达序列标签(ESTs)同源的序列为6552%(1929),未知序列为1379%(429),并发现了2个重复序列。用特异性引物,分别对小鼠持家基因(βactin)和发育特异基因(OCT4)进行PCR扩增,结果表明,所建立的cDNA文库可以反映小鼠胚胎在不同发育阶段整个基因群体的转录活性,为阶段特异性基因的筛选和小鼠早期阶段基因表达模式的研究提供了一种有价值的资源库 。     

兔移核重构胚再程序化相关基因片段的分离与鉴定

用单个植入前胚胎mRNA差别显示方法（Single Preimplantation Embryonic mRNA Differential Display Reverse Polymerase Reaction,SPEDDRTPCR）,以家兔移核重构发育至2细胞、8细胞时期的胚胎及囊胚作为起始材料。研究家兔移核重构胚再程序化相关基因的表达。获得了25个与再程序化相关的基因片段,完成了对所有片段的克隆、序列分析,其中5个反向Northern证实的片段在从MⅡ到囊胚的发育阶段中呈现特异性表达的特点。这项研究为再程序化相关基因全长的分离以及功能研究奠定了良好的基础。     

兔胚胎时期特异性基因相关新片段的克隆

阶段特异性基因的表达是早期胚胎发育过程中的重要事件,对植入前胚胎基因表达模式的研究是进一步研究植入前胚胎发育调控机制的前提。本实验利用mRNA差异显示技术来研究兔(Oryctolagus cuniculus domestica)植入前各期胚胎的基因表达差异。在获得的42个阳性阶段特异性表达的基因中,有5个在NCBI和EMBL数据库中没有同源序列,登录EMBL,申请了登录号。这些新基因片段都是桑葚期特异表达的基因,而且在以后的囊胚期也有表达。兔由母源型调控向合子型调控的过渡是在8～16细胞期开始的,在桑葚期开始表达的这些基因片段应该是兔胚胎时期特异性基因。这些基因的克隆将为进一步研究兔的植入前胚胎发育模式奠定基础。     

用DDRT-PCR技术克隆小鼠早期胚胎发育相关基因

mRNA差异显示 (DDRT PCR)技术在哺乳动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用 ,因获得足够量的早期胚胎材料困难而受到限制 .通过对DDRT PCR技术各种条件参数进行优化组合 ,并对某些环节进行改良 ,以小鼠的MⅡ卵、2 细胞胚胎和 4 细胞胚胎为材料进行差异显示 ,仅以相当于5 0个卵细胞的量为起始材料 ,便得到了理想的差示结果 .从差异条带中挑取感兴趣的差异条带进行回收、阳性鉴定、亚克隆、序列分析、并在反向Northern杂交基础上设计了鉴定实验 .结果发现 ,有一个片段差异显著且是阶段性特异表达 .经GenBank检索 ,发现该片段仅有同源的EST ,其全长及功能尚不清楚 ,是一个功能未知基因 ,将该片段命名为ed1.反向Northern杂交结果表明 ,ed1在 2 细胞期胚胎中有表达 ,而在MⅡ卵及 4 细胞胚胎中均不表达 .     

Biofortification of crops with seven mineral elements often lacking in human diets – iron, zinc, copper, calcium, magnesium, selenium and iodine

The diets of over two-thirds of the world's population lack one or more essential mineral elements. This can be remedied through dietary diversification, mineral supplementation, food fortification, or increasing the concentrations and/or bioavailability of mineral elements in produce (biofortification). This article reviews aspects of soil science, plant physiology and genetics underpinning crop biofortification strategies, as well as agronomic and genetic approaches currently taken to biofortify food crops with the mineral elements most commonly lacking in human diets: iron (Fe), zinc (Zn), copper (Cu), calcium (Ca), magnesium (Mg), iodine (I) and selenium (Se). Two complementary approaches have been successfully adopted to increase the concentrations of bioavailable mineral elements in food crops. First, agronomic approaches optimizing the application of mineral fertilizers and/or improving the solubilization and mobilization of mineral elements in the soil have been implemented. Secondly, crops have been developed with: increased abilities to acquire mineral elements and accumulate them in edible tissues; increased concentrations of 'promoter' substances, such as ascorbate, β-carotene and cysteine-rich polypeptides which stimulate the absorption of essential mineral elements by the gut; and reduced concentrations of 'antinutrients', such as oxalate, polyphenolics or phytate, which interfere with their absorption. These approaches are addressing mineral malnutrition in humans globally.     

乙型脑炎患者脑脊液和血浆氨基酸代谢的变化

本文采用气相色谱法对５７例乙型脑炎患者极期和２１例恢复期患者的脑脊液（ＣＳＦ）和血浆１４种游离氨基酸浓度进行分析。结果表明,乙脑极期ＣＳＦ游离氨基酸浓度除苏氨酸、丝氨酸值低于正常值外,其它氨基酸值均增高,其中谷氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、缬氨酸、脯氨酸值上升明显（ａｌｌＰ＜０．０１）,至乙脑恢复期不同幅度下降。乙脑极期血浆游离脯氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、鸟氨酸、谷氨酸浓度高于正常值,而其它８种氨基酸值均下降明显,至乙脑恢复期,多数氨基酸恢复至接近正常水平。实验提示,乙脑病毒能明显影响血浆和ＣＳＦ中氨基酸的含量,而二者具有代谢差异。     

羟基磷灰石／聚乳酸及其共聚物复合生物材料

阐述了羟基磷灰石、聚乳酸和聚乙醇酸各自的结构性能特点;总结了两者通过复合有望得到具有良好力学性能、生物相容性、骨传导性的可降解羟基磷灰石／聚乳酸复合生物材料;最后展望了这类复合生物材料的发展方向。     

Identification of specific binding sites for leukotriene C4 in human fetal lung

Specific leukotriene C₄ (LTC₄) binding sites were identified in membrane preparations from human fetal lung. Specific binding of [³H]-LTC₄ represented 95 percent of total binding, reached steadystate within 10 minutes and was rapidly reversible upon addition of excess unlabeled LTC₄. Binding assays were performed at 4°C under conditions which prevented metabolism of [³H]-LTC₄ (80 mM serineborate, 10 mM cysteine, 10 mM glycine). Under these conditions, greater than 95 percent of the membrane bound radioactivity, as analyzed by high performance liquid chromatography, co-eluted with the LTC₄ standard. Computer-assisted analyses of saturation binding data showed a single class of binding sites with a dissociation constant (K_d) of 26 + 6 nM and a density (B_max) of 84 ± 18 pmol/mg protein. Pharmacological specificity was demonstrated by competition studies in which specific binding of [³H]-LTC₄ was displaced by LTC₄ and its structural analogs with inhibition constants (K_j) of 10 to 30 nM, whereas LTD₄, diastereoisomers of LTD₁, LTE₄ and the end organ antagonist FPL 55712 were 150 to 700 fold less potent competitors than LTC₄. These results provide evidence for specific, reversible, saturable, high affinity binding sites for [³H]-LTC₄ in human fetal lung membranes.     

转铁蛋白受体单链抗体与BDNF融合蛋白的表达及活性鉴定

脑源性神经营养因子（BDNF）对中枢神经系统的多种神经元具有营养,修复和保护功能,但因无法通过血脑屏障限制了其应用。本文利用抗转铁蛋白受体（TfR）的单链抗体（ox26-scFv）作为脑转运载体,分别扩增单链抗体和BDNF基因,插入pTIG-Trx载体,构建融合基因表达载体pTIG-Trx/scFv-BDNF,在大肠杆菌BL21（DE3）中实现了高效表达。经Ni-NTA金属鏊合层析柱纯化后,在41Kd处可见目的纯化条带。大鼠GH3细胞免疫酶染色显示,ScFv-BDNF融合蛋白能与转铁蛋白受体特异性结合。同时能够促进鸡胚背根节神经突起的生长,具备了BDNF的生物学活性。为使BDNF能够跨越血脑屏障成为中枢神经系统的治疗药物打下了实验基础。     

我国现有的金鱼品种的分类及其系统发育的探讨1)

一、引言 金鱼是我国广大人民乐于饲养的一种家养观赏鱼类。它是由野生红黄色鲫鱼演变而来的。明朝李时珍在《本草纲目》中记载:金鱼“述异记载晋桓冲游庐山,见湖中有赤鳞鱼,即此也。”他还写道:“自宋始有畜者,今则处处家养玩矣。”因此可以认为金鱼起源于我国晋朝(公元265—420年间)。至今已有一千多年的历史了。 李璞(1959)报道了我国的金鱼品种已有二十余个。徐金声等(1980)报道有143个之多。耶么迄今为止我国的金鱼品种究竟有多少呢?为了弄清我国的金鱼品种资源,作者曾在北京等十七个省市的各大公园和花木公司所属鱼场作了调查。在调查过程中,我们     

平阳霉素对鸡胚绒毛尿囊膜血管内皮细胞生长的影响

利用鸡胚绒毛尿囊膜研究平阳霉素对血管内皮细胞移动和增殖的影响.(1)内皮细胞移动采用组织学切片、常规H-E染色,通过观察不同胚龄鸡胚CAM的组织学结构即可判定毛细血管EC移动.发现鸡胚在第8、10、12天胚龄时CAM EC都位于外胚层绒毛膜上皮之下,随胚龄增大,EC逐渐由中胚层移向外胚层.而孵育至第14天后(16、18天)CAM毛细血管EC大都移至外胚层上皮之上,紧贴壳膜.PY可明显抑制EC移动,使第18天胚龄时早已该移至外胚层之上的毛细血管EC仍停留在外胚层上皮之下.(2)内皮细胞增殖用放射自显影技术对第10天胚龄的鸡胚CAM EC进行3H-TdR标记,标记率即反映EC增殖的程度.同时用血管生长抑制剂PY对比研究对EC增殖的影响.对照组和实验组EC 3H-TdR标记率分别为41.5±3.4%和20.3±1.5%,PY可使CAM EC的DNA合成减少,即抑制EC增殖.鸡胚CAM可作为研究EC移动和增殖的体内模型,用于血管生成刺激因子和抑制因子的筛选和研究.     

维生素E对三氯乙烯急性染毒大鼠肝脏脂质过氧化与抗氧化酶的影响

本文观察了用抗氧化剂维生素E预处理后,三氯乙烯(3000mg/kg B-W-) 一次性经口染毒24h 大鼠肝脏的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶活力及丙二醛含量的变化,结果表明三氯乙烯染毒组肝脏中丙二醛含量、超氧化物歧化酶活力及血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力均高于对照组(P< 0-01) ;而维生素E干预组的丙二醛含量、超氧化物歧化酶活力及血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力均分别低于三氯乙烯染毒组(P< 0-01) ,说明三氯乙烯急性染毒可引起肝脏脂质过氧化反应及肝损害,肝脏超氧化物歧化酶活力升高可能是机体受自由基及脂质过氧化反应刺激而诱导产生的一种适应性反应,维生素E对三氯乙烯所致的肝损害有一定的保护作用。     

An updated angiosperm classification

DAHLGREN, C, 1989. An updated angiosperm classification. A new two-dimensional diagram, reflecting the system of classification of the angiosperms, is presented. It combines the dicotyledon diagram in G. Dahlgren (1989) and an adapted monocotyledon diagram after that in Dahlgren (1985) in a single diagram. An updated monocotyledon taxonomy is presented and the classification is appended.