棉酚抗生育作用的研究 Ⅰ.附睾结扎的实验分析

为了分析棉酚影响大白鼠精子的作用部位,在灌服棉酚后不同时间作一侧或两侧附睾结扎手术。第Ⅰ组,结扎了19只用药21天的大白鼠的输出管、附睾中段和输精管;第Ⅱ组,在12只用药14天的大白鼠做了同样的手术;第Ⅲ组,结扎了10只用药12天、停药7天的大白鼠附睾中段和输精管;第Ⅳ组是施行类似手术的正常大白鼠,分别作为用药组的对照。各组均在手术后第7天检查分隔在附睾不同部位的精子的活动能力。结果发现:在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组中,附睾中段结扎部位上的精子都死亡;在第Ⅱ组中,8例结扎侧的附睾尾部和输精管里留有很多活动的精子,这种情况在第Ⅰ组中也有少数几例;在第Ⅲ组,附睾头段的精子能够活动但有较多的畸形;对照组的大白鼠附睾中段结扎部位上虽有少数死精子,但大部分精子运动良好,附睾尾部精子保持正常运动和头-头型凝集现象。这一结果表明,棉酚抗生育的作用部位不在附睾而是在睾丸内。对于棉酚影响精子发生后期的可能性进行了讨论。     

棉酚抗生育作用的研究 Ⅱ.对雄性大鼠的抗生育作用

早在1957年刘宝善提出了用“食用生棉油来节制生育”的刍议;但当时未引起人们的重视。此后,在我国一些产棉区因长期食用粗制棉油引起不育或生育力显著降低的启示下,自1971年以来,全国一些单位开展了棉籽仁和棉酚抗生育作用的实验研究(全国男用避孕药协作组1978)。本文以雄大鼠为模型,探讨棉酚抗生育的最低有效剂量,并分析其抗生育作用的起效和恢复时间及其作用方式,以期为临床用药提供资料。     

粗制棉籽粉对雄性小白鼠睾丸中氨基酸代谢作用的初步研究

棉酚的抗生育作用,已见大量的报道。本文应用粗制棉籽粉作为不育剂,进行控制鼠害的探索性研究。结果表明,粗制棉籽粉具有干扰睾丸中氨基酸代谢的作用。     

棉酚抗生育作用的研究——Ⅳ.大白鼠长期服棉酚睾丸退化的观察

选用出生1月龄大白鼠按20毫克/公斤体重/日灌服棉酚,每周5次,连续1个月和2个月取材;性成熟大白鼠每天服棉酚5毫克/只,每周6次,给药3、4、6个月和停药1、2、3个月分别取材,睾丸称重后固定、制片作比较观察。实验结果表明,棉酚对幼龄大白鼠睾丸的发育没有影响,但使发育到变态后期的精子细胞受损伤,附睾中出现断头坏死的精子。长期服抗生育有效剂量棉酚的大白鼠中,有相当一部分出现不同程度的睾丸退化。退化通常在睾网附近最先出现,并和死精子在曲精细管中积聚相关连。第Ⅶ—Ⅷ期生精上皮退化的过程是自上皮游离缘18—19期精子细胞开始渐进地向基膜方向推进,直至上皮完全剥落或仅留以个别精原细胞和较多的媬育细胞。停服棉酚后恢复1—3个月的结果指出,已开始退化的睾丸在停药后有继续退化的趋势。严重退化的睾丸经停药3个月,虽然曲精细管排列较整齐,部分留有精原细胞的曲精细管中精原细胞显示增加数目并有B 型精原细胞,但尚未见进一步发展。对于睾丸退化可能与死精子在曲精细管内积聚有关,而不是由于棉酚对整个生精上皮的损伤问题进行了讨论。     

大鼠及羊精子在附睾成熟过程中ATP酶活力及其对棉酚敏感性的变化

大鼠及羊精子在附睾成熟过程中ATP酶活力发生明显下降,酶活力的变化形式存在着种间差异。大鼠附睾体及附睾尾精子的ATP酶相对活力分别为附睾头的55.7％及59.6％,而羊则为92.1％及59.8％。 大鼠及羊附睾各区域精子的ATP酶对棉酚抑制作用的敏感程度不同。在5μmol/L的低棉酚的浓度下,大鼠附睾头、体及尾部精子的ATP酶活力分别降至对照组的40.8％、62.7％及81.4％;当棉酚浓度增至40μmol/L时,羊附睾头、体、尾部精子的ATP酶活力才分别降至对照组的63.8％、83.7％及90.7％。作者提出如能使药物作用于附睾精子的敏感区域以干扰其成熟,可能是一条有发展前景的抗生育新途径。     

恒定磁场对小鼠精子毒性作用的实验研究

观察不同强度恒定磁场对雄鼠睾丸、附睾重量、精子数量、精子活动度及精子形态的影响. 结果显示睾丸与附睾重量各组无显著差异, 精子数量在实验组与对照组中亦无明显改变. 在 0.12T磁场环境暴露下, 雄鼠精子畸形率增加及活动率下降, 与对照组相比有显著差异. (P< 0.01), 提示磁场对小鼠精子有一定毒性, 并且毒性与其强度有关.     

服棉酚大白鼠血清睾丸酮和LH含量的放射免疫测定

用放射免疫测定法分析了服棉酚雄性大白鼠血清睾丸酮和LH的含量。数据表明,无论是幼龄大白鼠服棉酚2个月和服棉酚2个月停服1个月的,或是性成熟大白鼠服棉酚1个月和停服棉酚1个月的以及服棉酚6个月的血清睾丸酮食量都明显低于同月龄对照大白鼠的或服棉酚前的水平。但血清LH含量没有明显改变。血清睾丸酮含量降低和体重增长以及睾丸生精上皮退化与否都没有明显相关。根据现有的资料可以认为,服棉酚大白鼠血清睾丸酮含量减低,是由于棉酚直接作用于睾丸间质细胞的结果。停服棉酚后睾丸酮含量,除个别动物外均未见明显回升,可能由于棉酚在体内有一定的积累所致。     

棉酚抗生育作用的研究 Ⅲ.大白鼠灌服棉酚后血液和有关脏器中棉酚含量的测定

大白鼠灌服棉酚后,棉酚在血液和有关脏器中的滞留是不等的,肝脏中浓度较高,累积也较快;血清、睾丸与附睾浓度较低,累积也较慢。但是,在较低的剂量条件下,这种累积是有限度的,即使长期灌服棉酚,也不会造成棉酚在体内无限制的累积;已累积的棉酚在体内滞留时间也并不长久,停药一段时间便可消失,大白鼠也逐渐恢复生育能力。剂量增大时,血液或肝脏中的棉酚浓度也在一定范围内成正比地增大。大量棉酚经肝-胆系统随粪排出,而且在一定剂量范围内有多食多排泄、少食少排泄的现象。     

棉酚对鼠类生精细胞LDH-X活性的影响

本文测定了连续饲喂棉酚达6周的大鼠和小鼠的生精细胞的LDH-X活性。结果表明,棉酚能够明显地抑制大鼠成熟精子的LDH-X活性;而对睾丸LDH-X活性的抑制,与对照相比,无显著性差异。在小鼠中,未发现棉酚对成熟精子及睾丸生精细胞中的LDH-X活性产生具统计学意义的抑制作用。本文结合精子发生过程及LDH-X的特殊功能,对棉酚抗生育作用的可能机理进行了讨论。     

长期服用棉酚对个体SCE率的影响

棉酚作为一种男用节育药被发现以来,人 们对其作用原理、药物毒性、药物动力学及其遗 传效应进行了大量的研究。结果表明,服用抗 生育剂量的棉酚或在较小量棉酚存在的条件下 进行细胞培养,都没有引起染色体畸变率的增 加［[3-4I0目前,关于棉酚对长期服药个体SCE率 影响的研究尚未见报道。为了弄清长期服用抗 生育剂量棉酚个体的SCE率有无变化,我们对 14名服药30个月以上的个体和11名同年龄组 对照个体的SCE率进行了比较分析,以便更进 一步探讨棉酚的遗传学效应。     

旋光异构体棉酚对精子脱氢酶的影响

本研究采用组织化学方法,比较了左旋(-)、右旋(+)及消旋(±)棉酚,对人和豚鼠离体精子以及喂服三型棉酚4或8周的大鼠精子五种脱氢酶(乳酸脱氢酶LDH、苹果酸脱氢酶MDH、异柠檬酸脱氢酶ICDH,甘油3-磷酸脱氢酶G3-PDH和α-羟戊酸脱氢酶VDH)的影响。并将酶活性用细胞光度计做了定量测定。体外实验结果表明:相同剂量的(一)棉酚与(+)棉酚相比,前者对酶活性、精子形态及线粒体结构影响更加明显。两种棉酚之间的酶活性改变有统计学意义。在体实验中,比较三型棉酚对动物健康状况、精子数量、活动率和形态变化的影响,发现(+)棉酚不是一种有效的抗生育制剂。 (±)和(一)棉酚在产生抑精效应的同时,(±)棉酚毒性较大,表现为动物体重下降,精子数量甚少。(一)棉酚具有两倍于(±)棉酚的抑精作用,是一种高效低毒的酚类化合物。本文还就线粒体结构损伤与酶活性改变的关系,以及棉酚的作用机理作了讨论。     

薄荷油对雄性小鼠的抗生育作用研究

目的探讨薄荷油对雄性小鼠的抗生育作用。方法将60只健康的雄性性成熟昆明小鼠随机分成3个试验组和1个对照组,各试验组小鼠灌胃0.135 g/(kg·d),0.27 g/(kg·d)和0.54 g/(kg·d)的薄荷油0.5%羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethylcellulose,CMC)混悬液,对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠溶液,灌胃1周后按雌雄比2∶1合笼,继续对雄鼠灌胃至19 d,采集雄性小鼠的血液并测定血液生化指标,剖检灌胃雌雄小鼠,统计雌性小鼠的怀孕率,测定雄性小鼠睾丸与附睾的脏器系数及附睾精子活力,并固定睾丸和附睾,研究其组织学变化。结果与对照组相比较,雄性小鼠灌胃薄荷油后,导致雌性小鼠的怀孕率降低,睾丸脏器系数和附睾精子活率极显著降低(P<0.01),精子畸形率极显著升高(P<0.01)。光学显微镜下,试验组小鼠睾丸和附睾均有一定程度的损伤,睾丸间质减少,睾丸各级生精细胞排列疏松,曲细精管内有多核巨噬细胞浸润。附睾具正常的管腔结构,但能明显观察到管腔内精子减少。结论薄荷油对雄性小鼠具有抗生育作用,且主要通过影响精子的生成及破坏生精组织而达到,具有实际应用价值,可进一步开发成环境友好型鼠类抗生育药剂。     

合欢皮总皂苷对雄性小鼠的抗生育作用研究

目的探讨合欢皮总皂苷对雄性小鼠的抗生育作用。方法将60只健康的雄性性成熟昆明小鼠随机分成3个试验组和1个对照组,各试验组小鼠灌胃540 mg·(kg·d)-1,270 mg·(kg·d)-1和135 mg·(kg·d)-1的合欢皮总皂苷水溶液,对照组自由饮水,灌胃1周后按雌雄比2∶1合笼,继续对雄鼠灌胃至19 d,采集雄性小鼠的血液并测定血液生化指标,剖检灌胃雌性小鼠,统计雌性小鼠的怀孕率,测定雄性小鼠睾丸与附睾的脏器系数及附睾精子活力,并固定睾丸和附睾,研究其组织学变化。结果与对照组相比较,雄性小鼠灌胃合欢皮总皂苷后,导致雌性小鼠的怀孕率降低,睾丸脏器系数和附睾精子活率极显著降低(P<0.01),精子畸形率极显著升高(P<0.01)。光学显微镜下,试验组小鼠睾丸和附睾均有一定程度的损失,睾丸生精细胞排列疏松,间质减少,可见曲细精管内有多核巨噬细胞浸润,各级生精细胞脱落。附睾具正常的管腔结构,但能明显观察到管腔内精子几乎消失。结论合欢皮总皂苷对雄性小鼠具有抗生育作用,主要通过影响精子的生成及破坏生精组织而达到。     

免不1号和2号治疗免疫性不育雄鼠的组织学和免疫组织化学研究

用中药复方免不1号,免不2号治疗免疫性不育雄鼠,观察睾丸,附睾组织学和免疫组化的变化。用精子抗原免疫昆明种雄性小白鼠,建立免疫性不育动物模型。同时分别饲喂中药复方免不1号,免不2号,醋酸强的松,生理盐水;从组织学和免疫组化等方面观察免疫性不育症的变化。结果显示免疫性不育雄鼠血清,精囊液抗精子抗体高,睾丸间质,睾丸曲细精管界膜,精原细胞,附睾管上皮细胞免疫复合物沉积多,睾丸每曲细精管精子和晚期精子细胞减少,中药免不1号和2号能降低抗精子抗体,清除免疫复合物的沉积,恢复曲细精管精子和晚期精子细胞数。结果表明：免不1号和2号通过调节全身免疫系统,清除循环和局部的抗精子抗体,免疫复合物,提高精子和精子细胞数,从而提高小鼠的受孕率。     

度他雄胺对大鼠附睾精子成熟和生育的影响

目的通过度他雄胺对大鼠附睾精子和生育的影响,探索调节雄性生育的睾丸后作用靶点。方法使用度他雄胺20和40 mg/(kg.d)大鼠灌胃给药,连续2周。给药结束后雄雌鼠按1∶2合笼,计算生殖指数;采用计算机辅助精子分析系统分析精子活力和形态;采用SYBR-14和PI双重荧光染色计算精子存活率;采用Elisa法测定大鼠睾酮(T)和双氢睾酮(DHT)血清浓度;采用HE染色法对各组睾丸、附睾进行组织学分析。结果度他雄胺低、高剂量组双氢睾酮浓度均显著下降,分别为0.54和0.28 nmol/L(P<0.01),精子活力明显降低,分别为39.0%和28.7%(P<0.01),畸形率分别增加为10.3%和15.6%(P<0.05),最后受孕率分别降为62.5%和38.4%。而睾酮水平和交配指数均无明显变化(P>0.05),睾丸和附睾亦无明显病理学改变。结论度他雄胺通过抑制DHT生成,影响附睾精子成熟而导致大鼠不育,为今后男性避孕和不育药物研发提供了新思路。     

用放射免疫测定法研究性类固醇激素和棉酚对大白鼠垂体LH分泌的影响

用兔抗羊 LH 血清和放射性碘标记的羊 LH 建立了大白鼠血清中 LH 的双抗体放射免疫测定法。在这异源的系统中羊 LH 和大鼠 LH 的剂量反应曲线是平行的。当用羊LH_(2-2-1)作参考标准时测量的灵敏度为0.1ng/管。当用大鼠 LH-RP-1作参考标准时测量的灵敏度为10ng/管。大鼠的 FSH 没有交叉反应,所以 FSH 不会干扰血清 LH 的测定。用这个系统我们研究了去卵巢以及去卵巢后给予孕酮和巳烯雌酚以后大鼠血清中LH 水平的变化。结果表明性类固醇激素对大鼠垂体 LH 的分泌具有一个负反馈的调节机制。本文中还研究了棉酚对大鼠 LH 分泌的影响。我们发现成年雄鼠服用棉酚以后血浆 LH 的水平以及垂体对 LRH 的反应均无显著的变化。结果表明新的男性抗生育药物——棉酚似乎不影响垂体的 LH 分泌功能。     

以人精子抗原消化道免疫后的体液免疫反应

在Balb/c、C57和昆明鼠的消化道不同部位以人精子抗原免疫后,取其脾、肠系膜淋巴结、Peyer氏淋巴小结及子宫或附睾中的淋巴细胞进行培养。以ELISA法测定了这些部位的淋巴细胞所分泌的以及免疫小鼠肠道冲洗液和血清中的抗精子抗体。结果提示,Balb/c和昆明鼠抗精子免疫反应较强,而且雌性强于雄性。免疫部位以小肠及Peyer氏淋巴小结内注射的免疫效果较好,不仅可引起消化道局部免疫反应,而且子宫、附睾等生殖道组织也有淋巴细胞分泌抗精子抗体。     

无色素腺棉籽蛋白粉与棉子油的制备

低棉酚棉籽为高蛋白含油的植物资源,适宜于水溶法制备油及蛋白粉,出油率一般可达９５％。     

在体和离体的大白鼠肝细胞经棉酚处理后的观察

性成熟的雄性Wistar大白鼠经小剂量棉酚持续处理半年,肝细胞的超微结构,无论是细胞器或是细胞内含物都和对照大白鼠的相似;但大剂量棉酚短期处理,即可引起肝细胞呈“空泡”样变。在离体条件下,棉酚对大鼠肝细胞的损伤作用,与在体肝细胞经大剂量棉酚短期处理的结果相同,受损伤的程度与棉酚浓度和处理时间成正相关。表明离体肝细胞对棉酚比在体肝细胞敏感,但和生精细胞相比,这些体细胞则是相对不敏感的。小剂量长期用药组及其对照组中部分大白鼠的肝细胞线粒体出现类晶体样内含物,可能提示肝细胞在超微结构水平受损伤,但与灌服棉酚没有必然联系。     

大仓鼠在繁殖期的行为关系及交配行为

在Ｙ型迷宫中进行气味选择测定时,被试大仓鼠偏好异性的气味,证明身体气味有性吸引和性识别作用。在Ｙ型迷宫进行性别选择测定时,在雌雄靶鼠个体之间,被试大仓鼠不表现出性别偏好,这是攻击行为和交配行为共同影响的结果;与空白相比较,被试鼠都选择靶鼠,说明独居大仓鼠之间存在频繁的探究行为。通过观察箱内对两鼠间的行为关系的观察发现,异性之间主要有攻击行为和交配行为;同性之间主要发生攻击行为,同时胜鼠或优势鼠的胁腺标记行为显著多于从属鼠,说明胁腺标记可以表明优势地位;雄鼠与非性接受状态的雌鼠相遇时,攻击行为很少,但无友好行为,只有简单的雄鼠爬跨雌鼠的行为;任何陌生的雄鼠与性接受状态的雌鼠相遇发生交配行为,交配结束又相互攻击;交配行为表现为多次爬跨多次射精;雄鼠有库利奇（Ｃｏｏｌｉｄｇｅ）效应,雌鼠可以连续接受几只雄鼠的交配,表明大仓鼠为多配制的婚配制度。从行为关系和交配行为看大仓鼠在繁殖期独居,无固定的配偶