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小麦丛矮病毒基因组5′端尾随区的克隆及序列分析 总被引:1,自引:1,他引:0
根据已知的弹状病毒聚合酶L蛋白分子中一段高保守的8个氨基酸顺序EGLRQKGW,合成简并的24核苷酸引物,用锚定PCR方法从小麦丛矮病毒(WRSV)基因组中扩增出包含全长5′尾随(trailer)区和部分L蛋白基因的DNA片段,并克隆到pUC19T载体上,经测序,获得全长的WRSV基因组5′尾随区顺序。 相似文献
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小麦丛矮病毒M蛋白基因的序列测定,表达和鉴定 总被引:2,自引:2,他引:0
从小麦丛矮病毒(WRSV)基因文库含磷蛋白NS基因的质粒中,经亚克隆、测序,得到NS蛋白基因的下游序列,其中含有一读框453nt、编码一分子量约17kD蛋白。用PCR方法获得该读框全长片段并克隆到表达载体pGEX-3X,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以IPTG诱导表达,产物由谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和层析柱纯化后,用蛋白质印迹分析鉴定,结果表明,该读框为编码病毒基质蛋白M的基因。 相似文献
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小麦丛矮病毒NS蛋白基因的克隆及序列分析 总被引:2,自引:2,他引:0
利用与N蛋白mRNA3'末端顺序相同的20寡聚核苷酸引物,通过点杂交、限制性内切酶分析从小麦丛矮病毒(WRSV)cDNA文库中筛选到编码N蛋白基因下游顺序的cDNA克隆。序列分析表明,该cDNA片段含有一编码的40kD蛋白的开放读框。将该读框的全长cDNA经PCR扩增后,克隆到pGEX-3X上,在大肠杆菌DE3中用IPTG诱导表达,经蛋白质印迹鉴定,该基因为小麦丛矮病毒NS蛋白基因。 相似文献
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应用RT-PCR技术从分泌抗人黑色素瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞HB8760中克隆了抗体轻、重链可变区基因,然后用(Gly4Ser)3连接肽基因将VH、VL连接成ScFv基因,并进行了序列测定.计算机分析表明VH,VL均符合小鼠抗体可变区的特征,为功能性重排的抗体可变区基因.VH、VL、linker拼接正确.ScFv基因全长729bp,其中VH基因长360bp,编码120个氨基酸,VL基因长324bp,编码108个氨基酸.在噬菌粒表达载体pCANTAB5E中表达了可溶性的ScFv蛋白,表达产物经流式细胞仪检测可特异地与黑色素瘤细胞结合,不与肝癌、胃癌及良性黑痣细胞结合 相似文献
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利用RT—PCR,DNA序列分析及原核基因表达对我国大豆花叶病毒进行分 … 总被引:1,自引:0,他引:1
大豆花叶病毒(SMV)在大豆(Gklycine max L.)上引起严重病害。利用RT-PCR扩增并克隆了SMV-ZK(一个中国SMV分离株)基因组中全部蛋白质编码区的dDNA,通过对HC-PRO,NIb和CP编码区进行序列测定与分析,发现SMV-ZK与MSV-G2高度同源,从而在分子水平上证明在我国大豆作物中存在SMV-G2类似株系。 相似文献
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大豆花叶病毒(SMV) 在大豆( Glycine max L.) 上引起严重病害。利用RT_PCR 扩增并克隆了SMV_ZK( 一个中国SMV 分离株) 基因组中全部蛋白质编码区的cDNA。通过对HC_PRO、NIb 和CP编码区进行序列测定与分析,发现SMV_ZK 与SMV_G2 高度同源,从而在分子水平上证明在我国大豆作物中存在SMV_G2 类似株系。将SMV_ZKcDNA克隆于细菌表达载体,获得并提纯了6 种cDNA 的表达产物。这项工作将为进一步研究SMV 基因组的功能奠定基础。 相似文献
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绿色荧光蛋白基因在青蒿转基因芽中的表达 总被引:5,自引:1,他引:4
将改良的绿色荧光蛋白(GFP)基因,插入到植物表达载体中,构建双CaMV35S启动子驱动下的植物表达载体pBIGFP,在Kam浓度为20mg/L的筛选培养基上,用含有pBIFP质粒的根癌农杆菌LBA4404感染青蒿叶片,获得5个抗Kan阳性丛生芽系。Southern blotting分析表明,外源GFP基因已整合到青蒿转基因芽G-1系的基因组中。在OLYMPUS-BH2型荧光显微镜下,观察到转基因 相似文献
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多角体蛋白的结构多样性和杆状病毒的进化研究 总被引:6,自引:0,他引:6
在测定LsMNPV多角体蛋白基因的全序列并推导出多角体蛋白氨基酸顺序的基础上,与22种杆状病毒多角体蛋白的氨基酸顺序进行比较,以氨基酸变异曲线研究蛋白质一级结构中氨基酸的保守性,并推测一个模式多角体蛋白(MPh)氨基酸顺序;用PROSIS软件对MPh及其它5种代表性病毒的多角体蛋白进行了氨基酸亲水性分析,还对24种多角蛋白的二级结构作出了推测,指出了特征性结构区与氨基酸高变区,亲水区多样性变化的相 相似文献
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以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物的总RNA为模板,通过反转录-PCR扩增获得BNYVVRNA3全长cDNA。将其克隆到pGEM-7Zf(+)上,得到重组质粒pGBY56。序列分析结果表明,内蒙分离物RNA3基因组全长为1775nt,其中包含3个开放阅读框架,分别编码25kD蛋白、4.6kD蛋白和一种由59个氨基酸组成的N蛋白。与法国F2分离物、德国G1分离物和日本S分离物相比,其核苷酸序列的同源性分别为96.4%、96.8%和97.3%。将25kD蛋白编码基因克隆到pJW2上,构建了该基因的原核表达载体。SDS-PAGE和Westernbloting分析结果表明,25kD蛋白基因在E.coliBL21(DE3)中经温度(42℃)诱导后,可特异地表达25kD蛋白 相似文献
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丙型肝炎病毒基因组部份NS5区蛋白基因在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒基因组NS5区A段和部份B段蛋白。NS5A蛋白溶于水,可经过GST亲和层析柱纯化;NS5B蛋白不溶于水,经PBS-Triton X-100洗涤,尿素溶解后,通过离子交换柱纯化。经SDS-PAGE和Westemblot分析,NS5A蛋白除在57kD左右有条带外,还有不同程度的降解产物;NS5B蛋白主要在58kD左右有条带出现。为查明表达蛋白抗体在病人血清中的分布,取9 相似文献
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新型HCV EIA诊断试剂盒的研制 总被引:3,自引:0,他引:3
丙型肝炎病毒(HCV)基因组结构区核壳蛋白(C)区抗原、膜蛋白E1和E2区抗原,以及非结构区NS3-NS5区抗原的区段,已经在原核细胞中获得有效的表达。同时,相应区段中的优势抗原表位肽也经化学合成法大规模地制备。HCV基因组上各区段抗原性的分析发现,由C区和NS3区分别编码的C抗原和C33c抗原是HCV基因组上两个优势抗原区段。其相应的抗体出现早(感染后6周可检出抗C33c抗体),阳转率高(约99%阳性检出率),特异性和重复性均优于其它区段抗原。以中国人HCV的C33c重组蛋白和分支状合成肽MAP-C-19为复合抗原,研制了适合我国抗HCV抗体检测的新型丙型肝炎病毒酶免疫测定(HCVELA)诊断试剂盒。它同当代美国Abbott/UBIHCVELA诊断试剂的符合率约98%,同加拿大YES公司HCVEIA诊断试剂的符合率约97.8%,阳性检出率提高了约2%,3次重复性达100%,表明其特异性、敏感性和重复性均达到了当代第二代JCVELA诊断试剂的水平。我国人群中抗HCV抗体的分布情况为:正常人群的检出率1%-2%;外科类住院病人检出率约28.8%;肝炎患者抗HCV阳性率为34.4%,慢活肝、肝硬化和重症肝炎患者 相似文献
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通过计算机模拟比较十种理论上柔性较好的接头在 5′ I L6 T N FΔ融合蛋白中对 I L 6 和 T N FΔ空间结构的影响情况,从中选择了 S A P G T P接头.以 S A P G T P 作为接头的 5′ I L6 S A P G T P T N FΔ和以 P G 为接头的5′ I L6 P G T N FΔ空间结构预测结果相似. D N A 序列分析两种蛋白的接头序列均与设计的一致.5′ I L6 S A P G T P T N FΔ和 5′ I L6 P G T N FΔ蛋白的大肠杆菌表达产物经初步分离、纯化及鉴定后,生物学活性及对高表达 I L 6 受体肿瘤细胞的杀伤作用比较结果显示:在 L929细胞上,前者的生物学活性是后者的 27 倍;在 U937 细胞上,前者对肿瘤细胞的抑制率是后者的13 倍.它们对高表达 I L 6 受体的 U937 细胞杀伤作用分别是同样突变位点的人 T N Fα衍生物的37 和 29 倍.实验表明, S A P G T P作为接头构建的 5′ I L6 S A P G T P T N FΔ融合蛋白优于以 P G 作为接头构建的 5′ I L6 P G T N FΔ融合蛋白. 相似文献
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通过逆转录-聚合酶链反应从我国河南省2例重叠感染HCV或HBV/HDV的献血啼中,分离到HBVNS5区的部分cDNA,对其进行序列分析比较,结果表明,河南株HGVNS5工核苷酸与两中国HGV主同源性高于国外代表株(88.5-90.6%),但由核苷酸推导的氨基酸的同源性都无明显的地区性区别。HGVNS5区氨基酸序列较保守,缺乏明显高变区,中国4株HGV在7384位发生了由C→T的变异,从而导致一个人 相似文献
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斜纹夜蛾核多角体病毒基因组全序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
已完成斜纹夜蛾核多角体病毒 (Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)基因组全序列测定。SpltMNPV基因组全长 1 39341bp ,碱基组成中G C含量为 42 .7% ,与已发表的Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhedrovirus (SeMNPV) (44 % )和Bombyxmorinucleopolyhedrovirus (BmNPV) (40 % )相似 ,而与Lymantriadisparmulti capsi… 相似文献
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鸡减蛋综合征病毒(EDSV)主要蛋白的结构分析 总被引:1,自引:0,他引:1
鸡减蛋综合征病毒(EDSV)中国株AA-2基因组全长为32838bp,其编码病毒主要结构蛋白(52/55K、Ⅲa、五邻体、pⅦ、pⅥ、六邻体、100k、pⅧ以及纤维蛋白等)的基因依次排列在基因组的中部,E2区编码DNA结合蛋白、DNA多聚酶、末端前体蛋白及IVaⅡ的基因也分别排列在EDSV基因的负链上。对这些蛋白的氨基酸序列进行同源性比较后发现,EDSV的主要蛋白与羊腺病毒(OAV)同类物存在不同 相似文献
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近年发展起来的昆虫细胞-杆状病毒基因工程系统具有良好的优越性:(1)表达产量高,(2)产物的免疫原性、功能性类似于天然产物,(3)适用于悬浮及无血清培养。本实验中,将外源基因hGH克隆至质粒pVL1393,形成转移载体pVL1393/hGH(Fig.1&2)。与昆虫核多角体病毒AcNPV基因组DNA共转染秋粘虫细胞Sf9(Fig.3),pVL1393/hGH与AcNPV基因组DNA发生同源重组,取代多角体蛋白基因。经空斑分析纯化得到不含多角体,单一表达的重组病毒rAcVhGH(Fig.4),感染滴度达到2.03x108PUF/mL。经反复实验,105细胞/mL感染6~7天后收获培养上清液,可得到表达量为40μg/mL的hGH蛋白(Fig.5,6&7)。 相似文献
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对蜀伯毒蛾核型多角体病毒(Parocneria orienta Nuclear polyhedrovirus,简称PaorNPV)形态结构、结构多肽、限制内切酶图谱等特性进行了研究。采用不连续系统垂直板SDS-PAGE分析了PaorNPV的多角体蛋白、病毒粒子结构多肽。应用5种限制性内切酶对PaorNPV基因组DNA进行了酶切分析。结果表明:经热处理的多角体蛋白仅有一条带,分子量为31.5kD,不 相似文献
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将马铃薯Y病毒普通系(PVY0)的外壳蛋白基因克隆到表达质粒pMALc2中,构建这一基因在大肠杆菌中的表达载体pMALc2PVY0CP。SDSPAGE及Westernbloting检测结果表明,这一表达栽体在E.coliDH5α中经IPTG诱导可表达分子量为71.8kDa的特异性融合蛋白。以amyloseresin亲合柱层析纯化这一融合蛋白为抗原,免疫家兔制备了效价为1∶1024的特异性抗血清。用该抗血清可通过对流免疫电泳、免疫双扩散及Westernbloting对PVY进行检测 相似文献