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相似文献
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1.
饮食引起小鼠体内病毒突变去年,美国北卡罗莱纳州大学的melindaA.Beck及其同事报道,正常良性的柯萨奇病毒B3(coxsackievirusB3,CVB3)损害了缺硒小鼠的心脏,把这些缺硒小鼠体内的病毒注射到富含硒的健康小鼠中,也会使后者发生心...  相似文献   

2.
钙调素对细胞周期的调节   总被引:6,自引:0,他引:6  
金珊  尹力 《实验生物学报》1995,28(2):121-129
RC3细胞是一种用真核表达载体P^cam转染NIH3T3细胞建成的可调钙调素(Calmodulin,CaM)高表达细胞模型。通过分子杂交及蛋白免疫印迹方法证实在地塞米松(Dexamethasome,DXM)作用下,RC3细胞可高表达CaM.CaM拮抗剂三氟拉嗪(trifluoprazine,TFP)则使G1期细胞增加,S期细胞减少。高表达CaM使细胞分裂指数提高,G2期细胞减少,有丝分裂前期细胞  相似文献   

3.
观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心肌肌浆网Ca2+,Mg2+-ATPase基因(SERCA2a)转录调节的影响,评价DMP811对此效应的干预作用.6周龄雄性SD大鼠随机分为3组,每组6只.组1:生理盐水输注;组2:AngⅡ输注+DMP811管饲(3mg·d-1·kg-1);组3:AngⅡ输注(200ng·min-1·kg-1.1周后称其体重,取心脏并称重,提取心脏总RNA后采用Northernblot的方法检测SER-CA2a的转录水平,采用RT-PCR检测AngⅡ1型受体(AT1)mRNA水平.实验后,组3心重(CW)、心重/体重(C/B)、AT1受体转录水平均高于组1(分别增加4.7±0.4%,4.9±0.9%和24.7±3.5%;P<0.01),而SERCA2a基因转录水平显著低于组1(降低20.1±3.0%,P<0.01),并且SERCA2amRNA水平与AT1受体mRNA水平呈负相关(r=-0.74,P<0.01).AngⅡ导致的上述改变能被DMP811完全阻断.AngⅡ通过其Ⅰ型受体的介导,诱导了SERCA2a的转录下调  相似文献   

4.
EB病毒潜伏膜蛋白(LMP)是由病毒编码的主要的与病毒致宿主细胞潜伏感染有关的蛋白之一。我们用基因重组技术,把含有LMP基因(BNLF1)3个外显子(exon)开放阅读框架(ORF)的长1.80kbp的DNA片段,和能分解HygromycinB的含有SV40早期启动子和HgryomycinB磷酸转移酶全基因(长1025bp)的DNA片段(长1.60bp),同时重组于亚克隆载体pBluescriptSK(pBS)中,并使该重组质粒pBS-LMP-Hyg(长5767bp)在乳地鼠肾传代细胞(BHK)中获得表达。BHK细胞在经此重组质粒转染后,LMP阳性细胞是2%,在HygromycinB的持续压力下,LMP表达细胞率可达20%。3个月后,LMP表达细胞逐渐减少。5个月后,不能测到LMP表达细胞。经免疫荧光和蛋白印迹(Westemblot)实验证实,人鼻咽癌、风湿性关节炎和正常人血清中不含有抗LMP抗体。  相似文献   

5.
RRM RNA 结合蛋白在基因的转录后调控中起着重要作用.人GRY-RBP 是我们实验室最近克隆的一个新的全长cDNA,编码一个RRM RNA 结合蛋白.GRY-RBP 的全编码区用PCR扩增后,克隆到pET30a+ 表达载体中,在E.coli中获得了高效表达,表达的GRY-RBP重组蛋白占细菌总蛋白的21% .利用融合在GRY-RBPN 端的His.Tag,采取亲和层析的方法纯化了表达的重组蛋白.为了检测GRY-RBP的RNA 结合活性及其所结合的RNA 性质,将表达的蛋白与poly(A)-Sepharose 4B结合,发现GRY-RBP能与polyA (A)结合,结合活性能被可溶性的poly(A)、poly(C)减弱.改变NaCl浓度和加入不同浓度的酵母tRNA竞争物后,poly(A)结合活性不变.  相似文献   

6.
克隆小鼠白细胞介素12(IL-12)p40及p35cDNA,并构建同时含mIL-12p40和p35cDNA的双顺反子真核表达载体及其在哺乳动物细胞中的表达.白细胞介素12是由巨噬细胞,树突状细胞等抗原提呈细胞产生的一种异二聚体细胞因子,对机体的细胞免疫功能起着重要的调节作用.利用脂多糖(100pg/ml)和小鼠重组干扰素(IFN-γ500U/ml)体外联合刺激小鼠腹腔巨噬细胞,从中提取总RNA,经RT-PCR扩增出含信号肽的小鼠白细胞介素12(mIL-12)p40及p35全长cD-NA.PCR产物经酶切后,分别克隆至pBluescriptⅡSK载体中,序列测定结果与文献报道序列一致.然后利用脊髓灰质炎(Polio)病毒内核糖体进入位点(IRES)连接mIL-12p40及p35cDNA,亚克隆至pcDNA3载体中,构建成含mIL-12p40及p35cDNA双顺反子真核表达载体,即pcDNA3/mIL-12,p40及p35cDNA同时受pcDNA3中hCMV启动子驱动,将p40及p35转录至同一mR-NA上.通过LipofectAMINE将pcDNA3/mIL-12转染COS-7细胞,72h收集培养上清,测定m  相似文献   

7.
将抗癌胚抗原(CEA)单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体pBacPAKHis, 与修饰的家蚕核型多角体病毒BmBacPAKDNA共转染家蚕细胞, 经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗CEAScFv 基因的重组病毒BmBacScFv。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫, 在两者中均得到了高效表达, 产物分子量为28kD, 前者占细胞总蛋白的6 % , 后者为0 .3 mg/ 蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ni2+IDASepharose6B亲和柱纯化, 前者纯度可达90% 以上, 后者纯度较低; 纯化后的融合蛋白具有CEA 结合活力, 其亲和常数分别为5 .4×108/mol·L- 1 和2.3 ×108/mol·L-1 , 略低于其亲本单抗E7B10 2.7 ×109/mol·L- 1 。  相似文献   

8.
日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达   总被引:5,自引:0,他引:5  
研究了外源基因日本血吸虫26kD抗原(Sj26GST)在卡介苗(bacilusCalmete-Guerin,BCG)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)和大肠杆菌(E.coli)中的表达.运用重组DNA和聚合酶链反应(PCR)等分子生物学技术,以表达Sj26GST的E.colipGEX衍生质粒为模板,经PCR得到编码Sj26GST的全长cDNA片段.将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70的启动子下游,再将HSP70启动子和Sj26GST基因一起亚克隆到E.coli-分枝杆菌穿梭质粒pBCG-2000中,得到E.coli-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-Sj26.pBCG-Sj26电转化入BCG和M.smegmatismc2155中表达Sj26GST抗原,所表达的天然重组Sj26GST(rSj26GST)为可溶性蛋白,在SDS-PAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带.其表达量分别占BCG和M.smegmatis菌体总蛋白的15%和10%.可见,Sj26GST基因能在BCG中高效表达.  相似文献   

9.
本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞(PASMCs),观察了外源性血小板活化因子(plateletactivatingfactor,PAF)、BN52021(PAF受体拮抗剂)、吲哚美辛、维拉帕米对PASMCs产生血栓素A_2(TxA_2)、前列环素(PGI_2)及对细胞膜Ca~(2+)-ATPase活力的影响。结果表明:(1)基础状态下PASMCs存在花生四烯酸(AA)代谢。(2)外源性PAF通过受体后途径激活环加氧酶促进AA代谢致TXA_2及PGI-2增加,TXA_2/PGI_2比值无明显变化。(3)外源性PAF能直接抑制Ca~(2+)-ATPase活力。(4)维拉帕米可逆转PAF抑制PASMCs膜Ca~(2+)-ATPase活力的效应。  相似文献   

10.
利用微丝(microfilament,MF)解聚药物细胞松驰素B(cytochalasinB,CB)处理G_0期小鼠C_3H_(10)T_(1/2)成纤维细胞,对G_0至S期DNA合成,胸腺嘧啶核苷激酶(thymidinekinase,TK)活性、TK基因表达、钙调素(calmodulin,CaM)水平和一些细胞周期早期基因的表达进行了观察,G_0期细胞经3mg/LCB处理2h,促MF解聚增强了血清对S期细胞TK活性、TK基因表达和DNA合成的刺激作用,并促进细胞提前进入S期.血清刺激G_0期细胞进入晚G_1期和S期时,CaM水平明显升高,而CB预处理则使CaM含量进一步增加,特别是CB处理促使S期CaM增加向核内转移.CB处理明显增强血清对c-jun、c-fos和c-myc基因表达的刺激作用,而PKC抑制剂H_7则抑制CB处理对这些基因转录的刺激作用,说明CB使G_0期细胞MF解聚刺激c-jun、c-fos和c-myc的转录活性与PKC的作用有关.结果表明G_0至S期早期MF的重组可促进细胞进入S期,增强DNA合成.  相似文献   

11.
将大鼠酰胺化酶的信号肽及前导肽编码序列引入昆虫核多角体病毒转移表达载体,构建PABChGRF(Gly)、PABCIGFI融合基因的昆虫细胞分泌表达质粒pBacPAG2、pBacPAI,并与经修饰的银纹夜蛾核多角体病毒BacPAK6线性化DNA共转染秋粘虫细胞Sf21,通过同源重组、筛选和鉴定,得到它们的重组病毒BacPAG、BacPAI。将重组病毒感染Sf21细胞,PABChGRF(Gly)和PABCIGFI均得到有效外泌表达,表达产物通过IgGSepharose柱可获得快速纯化。  相似文献   

12.
应用放射性同位素 ̄(45)Ca ̄(2+)示踪技术及光敏生物素标记cDNA探针杂交方法,观察了维拉帕米、黄芪、地塞米松等药物对感染柯萨奇B_3病毒(CVB_3)的大鼠培养心肌细胞Ca ̄(2+)内流及细胞中CVB_3-RNA复制的作用。结果发现:在病毒感染48h,上述三药均可显著减少感染细胞及正常对照的心肌Ca ̄(2+)内流(P<0.01和P<0.05);若在病毒感染后即加入上述药物,经48h培养后,黄芪组细胞中的CVB_3-RNA含量显著少于病毒对照组(P<0.001),维拉帕米则显著增加(P<0.01).而地塞米松对其无影响。提示黄芪与地塞米松具有一种与维拉帕米相似的减少病毒感染心肌Ca ̄(2+)内流的作用,有可能减轻感染细胞的继发性Ca ̄(2+)损伤;但三种药物对感染细胞中病毒核酸的复制有不同作用,可作为临床治疗病毒性心肌炎时的参考。  相似文献   

13.
 用竞争性 P C R 方法定量检测了大鼠肌球蛋白轻链 2 启动子(m yosin light chain 2 prom ot er, M L C2) 糜酶(chym ase)融合基因在转基因小鼠不同组织中的表达情况,发现 M L C2 chym ase融合基因在转基因小鼠的心脏中有较高水平的表达,在骨骼肌中表达水平较低,在肾脏中有微弱表达;而在肝脏和肺中未检测到.表明 M L C2 chym ase 融合基因改变了野生型 chym ase 在生物体内的表达特性,不仅提高了表达效率,而且赋予了一定的心脏组织特异性,为进一步研究 chym ase 基因在心脏中的功能奠定了基础.  相似文献   

14.
耐热芽孢杆菌E2菌株纤维素酶基因克隆的研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
官家发  江明 《遗传学报》1995,22(4):322-328
用质粒pBR322作载体,大肠杆菌E.coli DH5αF’作受体,克隆到耐热孢杆菌E2菌株的羧甲基纤维素酶基因。重组质粒PBG3从产生CMCase的转化子中分离得到。克隆到的CMCase基因位于4.0kbHindⅠⅠⅠ片段上。功能状态CMCase基因被亚克隆到2.4kbDNA片段上。  相似文献   

15.
高产稳产聚羟基烷酸的重组大肠杆菌的构建   总被引:7,自引:0,他引:7  
重组大肠杆菌Escherichia coliHMS174(pTZ18UPHB) 含有携带聚羟基烷酸(PHA) 合成基因( phaCAB)** 的质粒pTZ18UPHB,是很有潜力的PHA 生产菌,但存在着质粒不稳定和不能合成3羟基丁酸(3HB) 与3羟基戊酸(3HV) 共聚物[P(3HBco3HV)] 的缺陷。将RK2 质粒上的par DE 基因引入pTZ18UPHB 构成质粒pJMC2 ,该质粒可以在宿主E.ColiHMS174 中稳定遗传。将培养基中的磷酸盐浓度降至18 m mol/L,发现E.Coli HMS174(pJMC2) 能够以丙酸为前体合成P(3HBco3HV) ,其中3HV 在共聚物中的含量为5 % ~8 % 。在5L自动发酵罐中分批补料培养E.Coli HMS174(pJMC2) ,培养基初始磷酸盐浓度为15 m mol/L,30 h 后每升培养液中干菌体可达42-5 g,P(3HBco3HV) 占干重的70 % ,其中3HV 在共聚物中的含量为4-9 % 。  相似文献   

16.
稀土离子对烟草RuBPcase的激活作用及EXFAS研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
研究了稀土离子(Ln3 +) 对烟草(Nicotiana tabacum)1 ,5 - 二磷酸核酮糖羧化酶(RuBPcase)活力的影响。结果表明,在该酶的反应体系中,用Ln3 + 替代Mg2 + ,烟草RuBPcase 的活力随Ln3 + 浓度的变化曲线呈双相效应, 即在高浓度时, Ln3 + 抑制该酶活性; 低浓度的Ln3 + 提高RuBPcase 活性。其活化效应为轻稀土离子大于重稀土离子,但Ln3 + 的活化效应低于Mg2 + 。在有Mg2 + 的反应体系中,Ln3 + 在低浓度时也有提高RuBPcase 活性的能力,提高幅度较低;而高浓度的Ln3 + 显著地抑制酶活性。进一步对RuBPcase - La 二元复合物的EXFAS 研究,证实La3 + 与RuBPcase 氨基酸残基的O 原子键合,键长为2 .51?;La3 + 还与S 原子结合。最后对Ln3 + 和RuBPcase 相互作用的分子机制进行讨论  相似文献   

17.
地涌金莲化学成分的研究   总被引:17,自引:3,他引:14  
从地涌金莲(Musella lasiocarpa(Franch.)C.Y.Wu.)新鲜植物中分离得到了5种化合物,经理化常数和IR,EI-MW、^1H NMR,^15CNMR波谱数据分析,分别鉴定为,正二十四烷(tetracosane,1),β-谷甾醇(β-sitosterol,2),硬脂酸(sterarie acid,3)2,4-二羟基苯甲酸(2,4-dithydroxy benzole aci  相似文献   

18.
长果升麻的化学成分研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
从长果升麻(Souliea vaginata)根茎中分离出6种皂甙,经光谱(FAB-MS、1H-NMR、1H-1H-COSY、13C-NMR、1H-13C-COSY)分析,分别鉴定为27-deoxyactein(1),actein(2),25-0-乙酰升麻醇木糖甙(3),25-甲基升麻醇木糖甙(4),升麻醇木糖甙(5),24-acetylhydroshengmanol xyloside(6),其中  相似文献   

19.
以存活率(SR)、复苏运动度(RM)、SPA为精子活力检测指标,对四种冷冻程序PSF、H3P、LP、MDP和卵黄的、无卵黄的冷冻稀释保存液进行了藏酋猴(Macaca thibetana)精液冻存比较研究。 PSF的SR为90.1±1.9%,RM为63.8±2.8%,显著高于其他三种冷冻程序(P<0.01)。卵黄冷冻稀释保存液(MDM)的SR(95. 4±1.3%)和RM(88.0±10.2%)显著高于无卵黄防冻液(FCS-G/TH)的SR(90.1±1.9%)和RM(63.6±2.8%),但前者在复苏一小时后,RM(12.5±1.6%)明显低于后者的RM(54. 7±2. 2%)。用 FCS~G/TH冻存的精液经 SPA检测,其穿透率为新鲜精子的 51. 9%。结果提示:1)慢速降温冷冻程序适于藏酋猴精液冻存;2)卵黄冷冻稀释保存液能较好地保存藏酋猴精液的活动度;而无卵黄防冻液则有利于延长其冷冻精子的运动寿命。这可能与两者的稀释液及所含的脂蛋白不同有关。  相似文献   

20.
白介素10的临床应用研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
言慧  黄树其 《生命的化学》1999,19(4):192-195
1989年,Fiorentio等发现Th2细胞分泌一种能抑制Th1细胞功能的未知因子,称为细胞因子合成抑制因子(cytokinesynthe-sisinhibitoryfactor,CSIF)。Moore等发现CSIF与EB病毒(EBV)中BCRF-...  相似文献   

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