腺病毒介导的人抑瘤素M基因对A375人黑色素瘤细胞的抑制作用

目的:构建抑瘤素M(OSM)重组腺病毒载体,研究其对人黑色素瘤细胞A375的抑制作用。方法:以PEGZ-OSM重组质粒为模板,通过PCR技术扩增出OSM片段,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人OSM氨基酸序列相同的重组腺病毒子Ad-OSM,感染A375细胞,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot法检测OSM在A375细胞中的转录和表达;荧光显微镜观察A375细胞的形态学改变;MTT法和流式细胞术(FCM)检测Ad-OSM对A375细胞的生长抑制和细胞周期的抑制效应;半定量RT-PCR法检测OSM基因表达对A375细胞中的Bax、Bcl-2基因表达的影响。结果:基因测序和PCR分析结果显示,成功构建了Ad-OSM腺病毒表达载体;RT-PCR和Western blot法检测到OSM基因在A375细胞中的转录和表达;OSM基因的表达对A375细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,OSM基因可通过上调细胞中Bax和下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。结论:成功构建了Ad-OSM腺病毒表达载体,感染OSM基因可明显抑制A375人黑色素瘤细胞的生长,诱导其凋亡,该现象可能是通过改变Bax、Bcl-2基因表达水平来发挥抗肿瘤作用。     

RASSF1A对食管癌细胞增殖影响的研究

目的:观察外源性RASSF1A基因对食管癌细胞的增殖作用并探讨机制.方法:将包含RASSF1A基因的质粒转染食管癌细胞EC9706,建立稳定转染细胞克隆,Western blot检测RASSF1A基因表达,通过细胞生长曲线检测细胞生长活性和增殖能力、流式细胞仪检测对细胞周期的影响、裸鼠移植瘤实验检测转染细胞的体内成瘤特性.结果:稳定表达RASSF1A基因的EC9706细胞中RASSF1A蛋白表达增加;细胞生长速度明显减慢;细胞周期中G1/G0期比例明显增加,S期比例减少;EC9706细胞的裸鼠致瘤能力被抑制.结论:RASSF1A基因能显著抑制食管癌细胞在体内外的生长,其机制可能与该基因诱导凋亡、抑制增殖作用有关.     

hGM－CSF基因及其调控研究进展

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因表达受到转录调控与转录后调控.5＇非转录区的一些顺式调控成分,如CATT(A/T)重复序列,富含GC序列,CK-1、CK-2、kB特异序列与可诱导的CsA敏感增强子成分等在转录水平上调控hGM-CSF的表达.3＇非翻译区有一62bp富含AU序列,它与mRNA的稳定性相关,在翻译水平调控hGM-CSF的表达.细胞因子与一些刺激因子通过不同的机制作用于hGM-CSF基因,从而影响hGM-CSF的产生与分泌.     

cDNA微阵列技术分析NAG7基因对鼻咽癌细胞基因表达谱的影响

运用cDNA微阵列技术分析NAG7基因重表达对HNE1细胞基因表达谱的影响.抽提HNE1细胞和pcDNA3.1(+)/NAG7/HNE1细胞总RNA,分离polyA mRNA,将mRNA逆转录为cDNA,并在逆转录过程中用³³P-dATP进行标记,与含有16 150个基因和表达序列标签(EST)的cDNA表达阵列膜杂交,获得基因表达图谱.Array Gauge软件分析NAG7基因的重表达所导致的鼻咽癌细胞HNE1基因表达谱改变,并用RNA印迹对微阵列杂交结果进行验证.结果分析表明,2倍以上的差异表达基因或EST 179个,其中表达上调的91个,表达下调的88个;已明确基因表达产物的上调基因29个,下调基因37个.在差异表达基因中,涉及基因转录调控、信号转导、细胞生长、细胞代谢和细胞凋亡等基因.RNA印迹证实生长阻滞特异蛋白1（gas 1）基因表达上调.特别值得关注的是, 先前的蛋白质组研究结果亦发现NAG7基因可导致生长阻滞特异蛋白1表达上调,说明gas 1基因在NAG7重表达的HNE1细胞中具有重要作用,这为深入研究NAG7基因的作用环节和机理提供了重要的线索.     

氦氧饱和高气压暴露对铜绿假单胞菌PAO1基因表达的诱导调节

研究氦氧饱和高气压暴露对铜绿假单胞菌基因表达谱的系统影响,对急性毒力基因表达的调节。用全基因组DNA芯片分析技术比较菌株暴露前后基因表达谱差异;RT-PCR方法验证部分差异表达基因;用分光光度法在细胞水平验证弹性蛋白酶含量;小鼠染毒法观察暴露组细菌毒力在整体动物水平的变化。基因表达谱分析结果表明,铜绿假单胞菌暴露12 h差异表达基因达243个、72 h差异表达基因为1 168个。72 h差异表达基因中与细菌应激响应、蛋白折叠、转录调节、菌毛和鞭毛合成、毒力因子调节与合成、细菌外膜蛋白和抗原合成的基因大量上调;部分基因的RT-PCR验证结果与芯片结果一致;细胞水平验证结果显示暴露72 h细菌毒力表型增强。因此,氦氧饱和高气压暴露对铜绿假单胞菌基因表达谱有明显影响,对急性侵袭性感染毒力因子基因表达水平有正向诱导调节作用。     

基于差异共表达识别肝癌分子生物标志物

为了阐明肝细胞癌的分子机制,采用差异共表达的分析方法对TCGA数据库中HCC的转录组数据进行了生物信息学分析,识别出120 787对差异共表达对,其中1 526个基因被认为频繁参与差异共表达.与差异表达分析比较,识别的差异表达基因与差异共表达基因是相互补充的关系;差异共表达基因整合到人类调控网络识别出TP53、NFKB1和HIF1A等22个潜在调控差异共表达的转录因子.结合KEGG代谢途径识别出168个失调途径.相同代谢通路中基因间存在大量的差异共表达,如细胞周期代谢通路,在肝癌样品和癌旁样品中基因表达相关性发生显著改变的同时基因表达量也发生了显著变化.同时也识别出一些不能被GSEA识别的代谢通路,如JAK-STAT信号通路.本研究结果为进一步了解HCC分子致病机理,识别新型肝癌分子生物标志物提供依据.     

转录因子GGS1参与赤霉素和糖信号调控

MYB类转录因子GGS1（glucose and GA signaling 1）既受到DELLA蛋白的调控,又与糖受体蛋白HXK1形成核内复合体.前人的这些研究结果暗示,GGS1可能同时参与了赤霉素和糖的信号调控.为了进一步证实GGS1基因在两信号途径中发挥的作用,我们对以下两个方面进行了研究.首先对GGS1基因表达谱进行分析,结果表明,GGS1特异在拟南芥各器官的维管组织的韧皮部细胞中表达;用赤霉素和高浓度蔗糖处理能抑制GGS1基因的表达.GGS1同源基因虽和GGS1具有相似的表达谱,但是其表达却不受GA和糖处理的影响,暗示二者间不存在功能冗余.其次,我们获得GGS1过表达转基因植株并通过Q-PCR分析这一植株中GA和糖代谢途径中一些重要相关基因表达变化.结果表明,在GGS1过表达植株中参与GA合成的基因表达升高,GA分解代谢基因表达降低;与糖信号密切相关的光合作用相关基因表达升高.两方面研究结果证实了GGS1的双元功能,即既可以作为GA信号调控的负调控因子,又在糖的信号传递中发挥作用.     

细胞因子对血管平滑肌细胞MMP-2基因表达的诱导及其作用机制研究

为了探讨血管平滑肌细胞 ( VSMC)基质金属蛋白酶 - 2 ( MMP- 2 )基因的表达调控机制 ,利用Northern印迹杂交和 MMP- 2活性酶图分析检查 b FGF、TNF- α和 IL- 1 β对 VSMC MMP- 2基因表达的影响 ,应用电泳迁移率改变实验 ( EMSA)和 CAT分析对其作用机制进行研究 .结果证实 ,3种细胞因子均能显著诱导 MMP- 2基因表达 ,其作用强度依次为 b FGF>TNF-α>IL - 1β.将 MMP-2基因 5′侧翼 - 61 9～ 1 9bp调控序列克隆进携带报告基因的重组质粒 p SV0 - CAT后 ,经转染VSMC及 CAT分析显示 ,在上述 3种细胞因子的作用下 ,该调控序列可激活 cat基因表达 ,三者促进 cat表达的活性与其诱导 VSMC表达 MMP- 2的结果相一致 ;EMSA结果显示 ,被 b FGF和TNF- α刺激的 VSMC中产生与该基因调控区序列特异结合的转录调控因子 .提示细胞因子除可激活 VSMC细胞周期调节基因表达外 ,还可通过诱导 MMP- 2表达而发挥其对细胞外基质代谢的调节作用及参与 VSMC迁移的启动过程 ;细胞因子对 VSMC MMP- 2基因表达的诱导作用是通过促进转录调控因子的合成或活化而实现的 .     

从酵母表达时间序列估计基因调控网络

基因调控网络是生命功能在基因表达层面上的展现。用组合线性调控模型、调控元件识别和基因聚类等方法 ,从基因组表达谱解读酵母在细胞周期与环境胁迫中的基因调控网络。结果表明 ,细胞在不同环境条件下会调整基因调控网络。在适应的环境下 ,起主要作用的是细胞生长和增殖有关的基因调控网络 ;而在响应环境胁迫时 ,细胞会再规划调控网络 ,抑制细胞生长和增殖相关的基因 ,诱导跟适应性糖类代谢与结构修复相关的基因 ,还可能启动减数分裂产生孢子。分别从细胞周期和环境胁迫响应相关基因中 ,搜索到转录因子Mcm1结合位点TT CC T GGAAA ,和Dal82在尿囊素代谢途径相关基因上的结合位点TGAAAAWTTT。从而 ,从酵母表达时间序列估计基因调控网络是可行的 ,与至今已知的实验观察相当吻合     

RASSF1A suppresses melanoma development by modulating apoptosis and cell-cycle progression

The tumor suppressor candidate gene Ras association domain family 1, isoform A (RASSF1A) encodes a microtubule-associated protein that is implicated in the regulation of cell proliferation, migration, and apoptosis. Several studies indicate that down-regulation of RASSF1A resulting from promoter hypermethylation is a frequent epigenetic abnormality in malignant melanoma. In this study, we report that compared with melanocytes in normal skins or benign skin lesions, RASSF1A is down-regulated in melanoma tissues as well as cell lines, and its expression negatively correlates with lymph node metastasis. Following ectopic expression in RASSF1A-deficient melanoma A375 cell line, RASSF1A reduces cell viability, suppresses cell-cycle progression but enhances apoptotic cell death. In vivo, RASSF1A expression inhibits the tumorigenic potential of A375 cells in nude mice, which also correlates with decreased cell proliferation and increased apoptosis. On the molecular level, ectopic RASSF1A expression leads to differential expression of 209 genes, including 26 down-regulated and 183 up-regulated ones. Among different signaling pathways, activation of the apoptosis signal-regulating kinase 1 (ASK1)/p38 MAP kinase signaling is essential for RASSF1A-induced mitochondrial apoptosis, and the inhibition of the Akt/p70S6 kinase/eIF4E signaling is also important for RASSF1A-mediated apoptosis and cell-cycle arrest. This is the first study exploring the biological functions and the underlying mechanisms of RASSF1A during melanoma development. It also identifies potential targets for further diagnosis and clinical therapy.     

Status of RASSF1A in uveal melanocytes and melanoma cells

RASSF1A gene, found at the 3p21.3 locus, is a tumor suppressor gene frequently hypermethylated in human cancers. In this study, we report that compared with melanocytes in normal choroid, RASSF1A is downregulated in uveal melanoma samples and in uveal melanoma cell lines. LOH at 3p21.3 was detected in 50% of uveal melanoma. Moreover, methylation of the RASSF1A promoter was detected in 35 of 42 tumors (83%) and RASSF1A was also weakly expressed at the mRNA level. These data indicate that LOH at the RASSF1A locus or RASSF1A promoter methylation may partly account for the suppression of RASSF1A expression observed in uveal melanoma. Furthermore, following ectopic expression in three RASSF1A-deficient melanoma cell lines (OCM-1, Mel270, and 92.1), RASSF1A weakly reduces cell proliferation and anchorage-independent growth of uveal melanoma cells without effect on ERK1/2 activation, cyclin D1 and p27(Kip1) expression. This study explored biological functions and underlying mechanisms of RASSF1A in the ERK1/2 pathway in normal uveal melanocytes. We showed that siRNA-mediated depletion of RASSF1A increased ERK1/2 activation, cyclin D1 expression, and also decreased p27(Kip1) expression in normal uveal melanocytes. Moreover, that the depletion of RASSF1A induced senescence-associated β-galactosidase activity and increased p21(Cip1) expression suggests that RASSF1A plays a role in the escape of cellular senescence in normal uveal melanocytes. Interestingly, we found that RASSF1A was epigenetically inactivated in long-term culture of uveal melanocytes. Taken together, these data show that depletion of RASSF1A could be an early event observed during senescence of normal uveal melanocytes and that additional alterations are acquired during malignant transformation to uveal melanoma.