产植酸酶菌株的分离筛选研究

研究了产植酸酶菌株分离筛选的方法 ,筛选得到分别适宜液态发酵和固态发酵的酶活力较高的黑曲霉XH和黑曲霉PA两菌株。在液态发酵KH2 PO4 对植酸酶产生有促进作用 ,其最佳用量为 8mg %;在固态发酵KH2 PO4 的添加对植酸酶的产生无明显促进作用。 2菌株所产植酸酶具有相似的酶学性质 ,最适作用温度为 5 5℃ ,当底物 pH为 3～ 5具有较高的酶活力。     

植酸酶固体发酵条件的研究

黑曲霉Ｇ２.１．１．１．４菌株在产生植酸酶时受无机磷的反馈阻遏,并且植酸酶的产生与淀粉酶的产生存在相互抑制。对植酸酶固体发酵进行调控和通过响应面分析优化发酵条件,提高了植酸酶产量。最适发酵条件下,植酸酶（ＰｈｙｔＡ）的产量可达６２．１ｕ／ｇ．干基。     

植酸酶固体发酵条件的研究

黑曲霉Ｇ２．１．１．１．４菌株在产生植酸酶时受无机磷的反馈阻遏,并且植酸酶的产生与淀粉酶的产生存在相互抑制。对植酸菌固体发酵进行调控和通过响应面分析优化发酵条件,提高了植酸酶产量。最适发酵条件下,植酸酶（ＰｈｙｔＡ）的产量可达６２．１ｕ／ｇ．干基。     

植酸酶高产菌的诱变选育

以黑曲霉ＭＡＯ２１为出发菌株,经紫外线,、亚硝基胍单独处理和复合处理,获得一植酸酶高产菌株ＵＮ－１２－１０。该菌株具有稳定的遗传性能,在经过优化的摇瓶培养基上发酵１０８ｈ,其植酸酶活力达到２９５０－３０１５ｕ／ｍｌ,是原始出发菌株的３．６倍。     

用原生质体诱变选育高植酸酶活的黑曲霉变异株

将 2株黑曲霉菌株 (I,II)在诱导产植酸酶的条件下分别制备成原生质体 ,并考察其原生质体形成及再生 ,经紫外诱变后 ,发现涂平板的黑曲霉 (II)原生质体在再生过程中菌落形态发生明显变化。考查突变菌种的植酸酶酶活 ,筛选到其中一个变异株比原始黑曲霉 (II)亲本株的植酸酶酶活提高了 2 .2倍。     

嗜碱芽孢杆菌NTT33产碱性β-甘露聚糖酶发酵条件的研究及高产菌株选育

研究了嗜碱芽孢杆菌（ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃＢａｃｌｕｓｓｐ．）ＮＴＴ３３发酵产生胞外碱性β－甘露聚糖酶的条件,其最佳碳源为１％槐豆角,最佳氮源为１％蛋白胨＋０．２％酵母膏,发酵培养３６ｈ产酶量最高（达６１．３υ／ｍＬ）。甘油,葡萄糖,甘露糖等对产酶有强的阻遏作用。该菌株经紫外诱变处理后,采用透明圈法初步筛选出在含葡萄糖和不含葡萄糖的槐豆胶培养基上同时产生透明圈的菌株,进一步测定其产酶进程曲线,最后筛选到一株（ＮＴＴ３３－ｒ６）部分消除葡萄糖代谢阻遏高产β－甘露聚糖酶的菌株,其酶活力比出发菌株提高５０％,,达到９６．３Ｕ／ｍｌ;。     

黑曲霉产纤维素酶的研究

从土壤中筛选获得一株产纤维素酶的优良菌株黑曲霉Asp．n－21,采用固体培养产生纤维素酶,产酶活力FPA137U／g干曲、GMCase320～388U／g干曲、β－葡萄糖苷酶84～149U／g干曲,对培养基成份进行优化,并分析其酶系组成,该菌所产酶可作为饲料用酶。     

人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕酵母系统中的高效表达

本文以黑曲霉（Aspergillus niger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列,换用在毕赤酵母（Pichia pastoris）中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因（PhyA-as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合人酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDS－PAGE结果与表达产物酶这性质研究表明植酸酶得到分泌表达,且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌,其中SPAN－Ⅲ菌株达到了在摇庆培养条件下,每毫升发酵液产生165000u植酸酶的水平,基本满足工业化生产的要求。     

植酸酶产生菌黑曲霉N14的诱变选育及其基因分析

以植酸酶产生菌黑曲霉03214为出发菌株,经紫外线和亚硝基胍诱变,获得了产酶活性较出发菌株提高了22．3％,达422IU／ml发酵液的突变菌株黑曲霉N14,其最适pH值为2．5,最适温度为50℃。通过对黑曲霉N14植酸酶phyA基因进行PCR扩增,获得了一条长约1．5kb的特异性产物。以pMD18-T为载体,构建了含有目的基因片段的重组质粒。DNA序列测定表明,目的基因片段含有植酸酶phyA基因的完整序列(GenBank Accession：AY426977),phyA基因全长1506bp,其中包含一段长102bp的内含子,编码467个氨基酸,有10个潜在的糖基化位点,5’端有一编码19个氨基酸的信号肽序列。实验结果为植酸酶基因工程菌的构建奠定了基础。     

酸性木聚糖酶产生菌的筛选及产酶条件

从１５０株真菌中筛选到８株产木聚糖酶活力在１００Ｕ／ｍＬ以上的菌株,其中活力最高的为黑曲霉（编号１４９）（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ）。该菌株产酶较适培养基为：麸皮半纤维素４％,ＮａＮＯ３１％,麸皮１％,用不加（ＮＨ４）２ＳＯ４和尿素的Ｍａｎｄｅｌｓ氏营养盐液配制。２８℃～３０℃振荡培养６０ｈ,酶活力最高可达３７５．２Ｕ／ｍＬ。该酶最适作用ｐＨ为４６,在ｐＨ３～１１之间基本稳定。该菌株发酵液中含有木聚糖酶（相对活力１００）外还有淀粉酶（１８）,甘露聚糖酶（０９８）,β木糖苷酶（０９４）和纤维素酶（０１７）。     

植酸酶高产菌株的诱变选育

以黑曲霉MAO21为出发菌株,经紫外线、亚硝基胍单独处理和复合处理,获得一株植酸酶高产菌株UN-02－10。该菌株具有稳定的遗传性能,在经过优化的摇瓶培养基上发酵108h,其植酸酶活力达到2950～3O15u／ml,是原始出发菌株的3.6倍。     

黑曲霉单宁酶高活性菌株的诱变选育*

以黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｈｉｇｅｒ）Ｎｏ．１３为出发菌株,经紫外线诱变处理,获得一株制备原生质体的起始菌,该菌株单宁酶活性比Ｎｏ．１３提高５５％,并对其制备原生质体的条件进行了研究,在优化方案基础上,紫外诱变原生质体,诱变株经筛选,最后得到一株具有稳定遗传性的单宁酶高活性菌株,在摇瓶培养基中进行生物转化实验,连续传代１０次,结果显示发酵液中没食子酸浓度始 维持在２２．８－２３．９ｍｇ／     

黑曲霉(Aspergillus niger)产菊粉酶菌株的筛选及培养条件的研究

Ak3个地区7个土壤样品中筛选高产菊粉酶的黑曲霉菌株,对筛选出的黑曲霉菌株进行了形态鉴定,探讨了温度、pH值对菊粉酶活力的影响,比较了固体和液体两种扩大培养法对黑曲霉菌株产菊粉酶的影响。结果表明：经过初筛和复筛得到A4、A6、A8、A12、At4、A15和A16共7株黑曲霉菌株,菊粉酶活力大于15．0U／mL,经数码生物摄影显微镜镜检符合黑曲霉的形态特征。A8菌株的菊粉酶酶活最高,达到25．0U／mL,在60℃、pH值5．0的条件下酶活性最大。     

黑曲霉N25株产植酸酶及酶促反应条件研究

从植物种子中研究筛选出高产植酸酶的黑曲霉N25,进行了最适液体培养基的筛选,研究了黑曲霉N25在玉米半合成液体培养基中所产植酸酶的最适酶促反应条件。结果表明：在四种培养基中,玉米半合成液体培养基为最适培养基,黑曲霉N25产植酸酶高峰期在96h,黑曲霉N25所产植酸酶的酶促反应最适pH为2.6和4.6,并具有很好的热稳定性,一定浓度的Ca^2 ,Mg^2 ,Mn^2 ,Cr^3 ,Li^ ,EDTA和高磷是植酸酶活性的抑制剂,1.0mmol/ml聚乙二醇1000,0.3nmol/mL Fe^2 和低磷对植酸酶活性具有激活作用。     

阿维菌素高产菌株的选育及阿维菌素B1的鉴定

自阿维链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ ＡＴＣＣ３１２７２）中分离出了３种不同类型的菌株,其中只有产灰色了的菌株能产生阿维菌素（Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎｓ）,摇瓶发醇单位约１００μｇ／ｍＬ。从其菌丝体中提取纯化了阿维菌素Ｂ１晶体,其紫外吸收光谱、红外吸收光谱、核磁共振谱Ｈ－ＮＭＲ和＾１３Ｃ－ＮＭＲ）和质与国外报道的一致。Ｓａ－７６菌株又经２次亚硝基胍诱变,筛选出发酵单位２０００     

黑曲霉产木聚糖酶发酵条件的研究

正交设计试验结果表明,黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｍ１２）产木聚糖酶活力达７６．６０ｕ／ｍｌ,合适的产酶发酵条件如下,培养基（ｇ／Ｌ）：麸皮４０,尿素６．６７,ＫＨ２ＰＯ４ １．０,ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ０．５,ＮａＣｌ０．３,Ｔｗｅｅｎ－８０ ３．０,ＣａＣＯ３ ２．０,２８℃,１２０ｒ／ｍｉｎ水浴振荡培养５．５ｄ。     

合成乙酸乙酯酯肪酶产生菌的筛选及产酶条件

从２７株脂肪酶产生菌中筛选到能由乙醇和己酸合成己酸乙酯的菌株８侏。其中Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐ．Ｈ－３菌株脂肪酶活力为５０－６０ｕ／ｍｌ,全细胞在有机溶剂中的酯化率可达己酸的９１％。Ｈ－３产酶的最适碳源为淀偻或葡萄糖。６％黄豆饼粉加４％蛋白胨复合氮源有利于酶活力的增加。     

产胡萝卜素酵母的筛选

从被油污染的土样和植物的落花中分离筛选出几株产胡萝卜素的酵母菌,其中从椰子油污染的土样中分离获得的菌株ＣＯＳ－５的胡萝卜素产量最高。ＣＯＳ－５菌株经鉴定为红酵母（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｓｐ．）ＣＯＳ－５。该菌株以蔗糖为碳源,添加桔子皮和盐酸硫胺素的培养基２８℃振荡培养９６ｈ,细胞生物量为２７．５ｍｇ干重／ｍｌ发酵液,胡萝卜素产量为１３．５５μｇ／ｍｌ发酵液。菌体胡萝卜素含量达４９２．７μｇ／ｇ干     

细菌3—脱氧葡糖松还原酶产生菌及产酶条件

从１２株细菌菌株中筛选到一株产３－脱氧葡糖松还原酶的高产菌Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．２并研究了该菌株的产酶条件。在所试验的细菌中,３－脱氧警戒松氧化酶活性较低甚至检测不出,而还原酶活性普遍较高。     

亚硝基胍诱变选育林肯霉素高产菌株

以林肯链霉菌９４７－８（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｎｃｏｌｎｅｎｓｉｓ９４７－８）为出发菌株（产林肯霉素９４０γ／ｍｌ）。采用孢子热处理方法处理出发菌株孢子,得到变异株９４７－８ｓ,产林肯霉素１０８０γ／ｍｌ。对９４７－８ｓ菌株进行ＮＴＧ诱变处理,得变异株９４７－８ｘ,产林肯霉素为１２１８γ／ｍｌ,且生产能力稳定。