中国人r——干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从中国人淋巴细胞ｍＲＮＡ反转录产物中克隆了ＩＦＮ－ｒ－ｃＤＮＡ,序列分析证实了分子进化规律对ＩＦＮ－ｒｃＤＮＡ序列存在多态性的推论。在此基础上应用ＤＮＡ重组技术,将去信号肽中国人ＩＦＮ－ｒ ｃＤＮＡ克隆到原核表达质粒ｐＢＶ２２０ ＰＲＰＬ启动子下游,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ,通过温度诱导表达,成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人ＩＦＮ－ｒ ｃＤＮＡ,其表达水平占全菌可溶性总     

r－干扰素对喉癌细胞系HEP－2HLA－DR抗原和增殖细胞核抗原表达的影响

本实验用人重组ｒ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ）作用ＨＥＰ－２细胞后ＨＬＡ－ＤＲ抗原和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的检测来探讨ｒ－干扰素对ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达诱导作用及体外抗增殖活性。用单克隆抗体ＣＲ３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ）和Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ）。以链霉素一生物素技术（ＬＳＡＢ）检测ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原和ＰＣＮＡ表达,结果显示：ｒ－ＩＥＮ诱导ＨＬＡ－ＤＲ抗原和抑制ＰＣＮＡ表达其强弱与ｒ－ＩＦＮ剂量有关。资料提示：ｒ－ＩＦＮ不仅对ＨＥＰ－２细胞有细胞毒作用,同时能调节其细胞膜特性,因而在喉癌的治疗中是有效的。     

脊髓灰质炎减毒活疫苗的高效纯化及特性研究

用就Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ对Ｖｅｒｏ细胞基质制备的Ｉ型口服脊髓灰质炎减毒活疫苗悬液进行纯化。病毒液经滤过澄清和超浓缩,获得８５％的病毒感染性滴度回收率,而经Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆ．Ｆ．纯化的病毒悬液,病毒感染性滴度回收率达１００％。纯化后的病毒液用α－＾３２ＰｄＡＴＰ标记ＤＮＡ探针膜杂交法测定,宿主Ｖｅｒｏ细胞基质ＤＮＡ残余含量远低于１００ｐｇ／剂量的标准;ｒｃｔ／４０特征     

抗人α2a型基因工程干扰素单克隆抗体及亲和层析柱的研制

应用鼠－鼠杂交瘤细胞技术建立了三系稳定分泌抗重组人α２ａ型干扰素（ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ）单克隆抗体细胞系１Ａ５、１Ｂ５和２７Ａ７。细胞连续传代和在液氮中冻存后复苏,分泌抗体能力不变,并且维持在较高水平,细胞培养上清效价１∶２５６～１∶４０９６,腹水１∶２６×１０５～１∶２７×１０８。Ｉｇ亚类测定,１Ａ５和１Ｂ５ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１,２７Ａ７为ＩｇＧ２ａ。三系ＭｃＡｂ均识别ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ和－α２ｂ,与ｒＨｕ－ＩＦＮ－α１和正常大肠菌体裂解液无反应。竞争ＥＬＩＳＡ试验,三系ＭｃＡｂ分别针对ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ上三个不同表位。同ＭｃＡｂ建立双抗体夹心ＥＬＩＳＡ对ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ和－α２ｂ均可检测到１５０ｐｇ／ｍｌ,约１０ＩＵ／ｍｌ的敏感度。用提纯的单抗制备亲和层析柱,单抗偶联率９５％以上。三系单抗亲和层析柱均可将粗制ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ提纯到９７％以上纯度。平均回收率为：１Ａ５单抗柱９０２％,１Ｂ５单抗柱９５３％,２７Ａ７单抗柱９４７％。比活性平均值依次为１９４×１０８ＩＵ／ｍｇ,１９７×１０８ＩＵ／ｍｇ和１６４×１０８ＩＵ／ｍｇ,残余鼠ＩｇＧ量均符合规程要求。纯化ｒＨｕ－ＩＦＮ?     

干扰素-a对人骨肉瘤细胞ICAM-1,CEA和Vimentin表达的调节作用

为探讨ＩＦＮ－ａ在骨肉瘤浸润转移中的诱导调节作用。本实验采用Ｃｅｌ－ＥＬＩＳＡ方法半定量检测了ＩＦＮ－ａ对体外培养的人骨肉瘤细胞系（ＯＳ－７３２）细胞间粘附分子－１、癌胚抗原和波形蛋白表达的诱导变化。结果显示,ＩＦＮ－ａ对３种抗原的表达均有显著的诱导增强作用（Ｐ＜０．０１）,且存在一定的量效关系,即ＩＦＮ－ａ浓度＜１０３Ｕ／ｍｌ时,ＩＣＡＭ－１、ＣＥＡ和Ｖｉｍ的表达量随ＩＦＮ－ａ浓度的增加而增加;当ＩＦＮ－ａ的浓度＞１０３Ｕ／ｍｌ时,其表达量随之逐渐下降。提示：ＩＦＮ－ａ对骨肉瘤细胞有一定的诱导分化作用,在一定程度上能抑制骨肉瘤的浸润转移并且在治疗骨肉瘤中有一定的积极作用。     

尖锐湿疣患者皮损中白介素2基因表达的研究

为探讨Ｔｈ１ 反应如白介素２ （ＩＬ－２） 产生在尖锐湿疣（ＣＡ） 发病及消退中的作用。本实验采用逆转录——聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ） 技术检测了ＣＡ患者皮损组织ＩＬ－２ 的基因表达, 实验分为三组： 正常对照组（ｎ＝ １０）, 单纯病例组（ｎ＝ １８） 及γ－ 干扰素（ＩＦＮ－γ） 诱导组（ｎ＝ ６）。结果发现正常皮肤组织未检测到ＩＬ－２ ｍ ＲＮＡ, 在１８ 例单纯病例的ＣＡ患者有２ 例皮损ＩＬ－２ ｍ ＲＮＡ阳性, ６ 例ＣＡ患者注射ＩＦＮ－γ前局部皮损未检测到ＩＬ－２ ｍ ＲＮＡ, 而在皮损内注射ＩＦＮ－γ７２ 小时后有４ 例阳性。研究结果提示了ＩＦＮ－γ可诱导Ｔｈ１ 应答, Ｔｈ１ 应答在抵抗人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ） 感染及清除ＨＰＶ中可能起着重要作用, 为临床应用ＩＬ－２ 及ＩＦＮ－γ治疗ＣＡ提供了理论依据。     

人βNGFDNA地高辛标记探针的制备及在小鼠颌下腺中的基因表达

本研究在国内首先制备非放射性地高辛标记的人βＮＧＦＤＮＡ（ｄｉｇ－ｈ－βＮＧＦＤＮＡ）探针,并应用原位杂交技术结合计算机图像分析,对ＮＧＦｍＲＮＡ在ＩＣＲ雄性小鼠颌下腺中的分布进行了观察。实验结果显示ＮＧＦｍＲＮＡ主要分布于颌下腺纹状管（ＳＳＴ）和颗粒曲管（ＧＣＴ）的上皮细胞,其细胞基底部胞质呈杂交反应强阳性,细胞顶部呈弱阳性,图像分析显示二者具有显著性差异。本实验制备的ｄｉｇ－ｈ－βＮＧＦＤＮＡ探针灵敏度高达０．１ｐｇ／ｍｌ,并且特异性强,分辨力高,重复性好,是研究ＮＧＦｍＲＮＡ基因表达和调控的有力工具。     

白介素－18

白介素－１８日本研究者ＵｓｈｉｏＳ等（１９９６）根据ＩＦＮ－γ诱导因子（ＩＧＩＦ）的结构特征和功能,将它命名的白介素－１８（ＩＬ－１８）。Ｈｙｏｇｏ医学院细菌学系Ｏｋａｍｕｒａ等（１９９５）从内毒素休克小鼠肝脏里克隆了小鼠ＩＬ－１８ｃＤＮＡ,其ＯＲＦ...     

干扰素的分子生物学研究进展

本文介绍了干扰素（ＩＦＮ）分子生物学方面的研究进展,主要涉及ＩＦＮ的基因结构及其表达调控,ＩＦＮ受体（ＩＦＮＲ）的结构和功能,以及ＩＦＮ与受体结合后,引起的信号传导新模式和快速调控基因表达的分子机理。     

乙型肝炎导向干扰素抗乙型肝炎病毒作用的体外实验研究

为提高ＩＦＮ抗ＨＢＶ疗效,实现感染细胞水平上的抗病毒性肝炎导向治疗,我们将抗ＨＢｓＡｇ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的Ｆ（ａｂ＇）２片段与ＩＦＮ文联,所得交联体称为乙型肝炎导向干扰素（Ｔ－ＩＦＮ）。应用ＨＢＶＤＮＡ转染细胞系（２,２,１５细胞）作模型,对Ｔ－ＩＦＮ进行了体外抗ＨＢＶ实验：通过检测细胞上清液ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ水平的变化,结合细胞存活率来评价其抗ＨＢＶ活性,并与游离ＩＦＮ和ＭｃＡｂ以及二者的混合法（Ｍｉｘ）进行比较。结果显示,经１２天作用,Ｔ－ＩＦＮ在细胞存活率、对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ抑制率及时ＨＢＶＤＮＡ抑制作用等方面均优于游离崳桑疲巍ⅲ停悖粒夂停停椋裕椋疲魏鲜逝ǘ任保担埃啊常埃埃埃桑眨恚欤谡庖慌ǘ认拢赴婊盥省荩罚梗叮ィ龋拢螅粒缫种坡剩担罚场叮罚叮ィ龋拢澹粒缫种坡剩矗埃薄担保玻ィ危模猎冢保妫缢揭韵拢欢嘤εǘ鹊模桑疲巍ⅲ停悖粒夂停停椋模危猎冢欤穑缢揭陨希龋拢螅粒绾停龋拢澹粒缫种坡示陀冢裕桑疲巍Ｌ崾荆砸唬桑疲慰赡茉诓《荆危模粮粗啤⒉《镜鞍缀铣杀泶锏榷嘞罨方谏戏⒒右种谱饔谩＃裕桑疲慰梗龋幔中Ч庞冢桑疲巍     

不同功能位点介导α干扰素的免疫调节和中枢镇痛作用

细胞因子α干扰素（ＩＦＮα）具有中枢镇痛作用。抗内源性阿片肽血清与ＩＦＮα能发生明显的交叉反应,提示ＩＦＮα与内源性阿片肽之间存在着共同的抗原决定基。采用基因定点突变技术,获得系列ＩＦＮα突变体,并分别测定其免疫学活性和镇痛能力。结果显示,ＩＦＮα突变体Ｙ１２９Ｓ－ＩＦＮα免疫学活性显著下降,但仍然保留了很强的镇痛能力,阿片受体拮抗纳洛酮能够阻断Ｙ１２９Ｓ－ＩＦＮα的镇痛作用。实验结果表明,ＩＦＮ     

四种鱼类外周血红细胞细胞周期及DNA含量

通过流式细胞仪测量了兴国红鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｃａｒｐｉｏ Ｖａｒ． Ｓｉｎｇｕｏｎｅｎｓｉｓ）、奥利亚罗非鱼（Ｓａｒｏｔｈｅｒｏｄｏｎ ａｕｒｅａ）、 鳙（Ａｒｉｓｔｉｃｈｔｈｙｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｒ．）和团头鲂（Ｍｅｇａｌｏｂｒａｍａ ａｍｂｌｙｃｅｐｈａｌａ Ｙｉｎ．）红细胞的ＤＮＡ含量,四种鱼与鸡红细胞ＤＮＡ含量的比值分别为１·６５、０．９６、０．９１、１·１５,以鸡红细胞ＤＮＡ含量２．３ｐｇ／Ｎ计算,四种鱼二倍体体细胞的 ＤＮＡ含量分别为３．８０ ｐｇ／Ｎ, ２． ２２ｐｇ／Ｎ、２． ０８ｐｇ／Ｎ、 ２． ６６ｐｇ／Ｎ。另外,四种鱼外周血红细胞分别有２６％、 ２６％、 ２３％、 ２４％的细胞处于 ＤＮＡ合成期（Ｓ）,ＤＮＡ合成后期（Ｇ２）和分裂期（Ｍ）,这表明这四种鱼类的外周血红细胞并非失去分裂能力的特化细胞群,它们表现了较强的细胞周期现象。这有可能是这几种硬骨鱼类外周血仍具有造血功能的缘故。     

α—干扰素对中枢神经系统的作用

本文综述了免疫调节因子α－干扰素对中枢神经系统（ＣＮＳ）的作用。ＩＦＮα的中枢作用不仅改变了神经系统是免疫特免性的认识,而且打破了对ＩＦＮα功能的传统认识,同时提出了ＩＦＮα作用新的机制。     

细胞因子在抗病毒免疫中作用的研究进展

近来通过构建编码细胞因子的重组痘苗病毒（ｒＶＶ）感染不同免疫应答状态的小鼠,可以研究细胞因子在体内抗病毒免疫机理中的作用,不仅证实了ＩＦＮ－γ、ＩＮＦ、ＩＬ－２等细胞因子在抗病毒免疫中起重要作用,并对抗病毒免疫机理的传统概念提出了重要的补充与修正。     

人γ干扰素（IFN－γ）－表皮生长因子（EGF）融合蛋白的抗肿瘤细胞增殖作用与靶细胞的EGF受体有关

采用表皮生长因子（ＥＧＦ）受体丰富的Ａ４３１细胞进一步研究了人ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白￣〔１〕的抗细胞分裂活性,以及它和靶细胞ＥＧＦ受体的关系。结果表明,ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白的抗肿瘤细胞增殖作用明显高于其母体分子。￣１２５Ｉ－ＥＧＦ受体竞争抑制试验表明,ＩＦＮ－γ可与ＥＧＦ竞争Ａ４３１细胞的ＥＧＦ受体,而ＩＮＦ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白的ＥＧＦ受体竞争抑制作用更为明显,说明人ＩＦＮ－γ和ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白的抗肿瘤细胞分裂活性,与靶细胞ＥＧＦ受体被竟争抑制密切相关。     

地高辛标记核酸探针斑点杂交法检测轮状病毒疫苗中残余MA－104细胞DNA含量的研究

本文报导用地高辛标记核酸探针和分子斑点杂交技术检测轮状病毒基因重配株Ｌ－３株活疫苗中残余ＭＡ－１０４细胞ＤＮＡ含量的方法。提取和纯化ＭＡ－１０４细胞ＤＮＡ,将其ＡｌｕＩ酶切片段用随机引物法引导ＤＮＡ标记为探针。待检样品抽提核酸后点膜进行斑点杂交。此法灵敏度高,可检出０．１４ｐｇ的ＤＮＡ,特异性强,与非同源性ＤＮＡ无杂交。用此法检测轮状病毒基因重配株Ｌ－３株制备的疫苗,ＭＡ－１０４细胞残余ＤＮＡ含量低于１４ｐｇ低于ＷＨＯ限量标准,结果表明此重配株用于研制疫苗是安全的。     

IFN—α治疗慢性乙肝抗病毒疗效与细胞因子变化关系分析

观察一乙型病毒性肝炎（ＣＨＢ）患者（２５例）经α－干扰素（ＩＦＮ－α）抗病毒治疗前后血清中细胞因子和受体水平的变化与乙肝病毒消长之间的关系。收集治疗前后血清标本ＥＬＩＳＡ法同步检测,根据治疗后乙肝病毒复制指标（ＨＢＶ－ＤＮＡ）阴转分应答组（１０例）与无应答组（１５例）进行统计学分析。治疗后两组血清中ＩＬ－６水平下降,尤其答应组下降明显;治疗后应答组ＩＬ－２水平明显升高（Ｐ〈０．０１）,ｓＩＬ－２Ｒ     

干扰素基因表达调控研究进展

干扰素基因表达调控研究进展孙劲综述方企圣审（中国预防医学科学院病毒研究所,北京１０００５２）近年来,有关于扰素（ＩＦＮ）分子生物学的研究以及基因工程方法生产干扰素取得很大进展。本文将有关ＩＦＮ蛋白的诱导和基因调控机理方面最新进展作一综述。ＩＦＮ蛋白的...     

核因子-κB的研究进展

机体对损伤及微生物入侵进行防御反应时,活化的核因子－κＢ（ＮＦ－κΒ）可诱导细胞合成各种生物大分子。细胞处于静息状态时,ＮＦ－κＢ与κＢ抑制蛋白（ＩκＢｓ）结合形成三聚体存在于细胞质内。当细胞受到外界因素刺激时,ＮＦ－κＢ与ＩκＢｓ分离,ＮＦ－κＢ进入细胞核内,其亚基形成环状结构与ＤＮＡ接触,启动基因转录。随后,新合成的ＩκＢｓ又与ＮＦ－κＢ结合返回细胞质。不同的ＩκＢｓ亚型发挥不同的生理功能。同时,对ＮＦ－κＢ的生理功能也作了介绍。     

花生种子高纯度DNA的提取（简报）

花生种子高纯度ＤＮＡ的提取（简报）王艳,何军贤,傅家瑞（中山大学生命科学学院,广州５０２７５）关键词花生;种子;ＤＮＡ;十六烷基三甲基溴化铵ＲＡＰＩＤＡＮＤＥＦＦＩＣＩＥＮＴＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＤＮＡＦＲＯＭＰＥＡＮＵＴ（ＡＲＡＣＨＩＳＨＹＰ...