牛染色体的G带、C带,姐妹单体互换的观察

近年来,由于染色体分带、姐妹单体互换等新技术的发展,大大促进了对哺乳动物染色体的研究工作。牛的染色体共30对(2n=60),除性染色体为亚中央着丝粒外,其余29对常染色体均为端着丝粒,(Melander,1959;Gustavsson1969)只根据着丝粒的位置,染色体的大小、很难在彼此间加以区别。因此本文报导了牛染色体的G带、C带分析,以有助于识别和鉴定牛的各条染色体,并报道了姐妹单体互换(SCE)的自发频率。     

Tropic 1808基因重组蛋白对大鼠坐骨神经再生的影响

目的观察Tropic1808基因重组蛋白对坐骨神经损伤后再生的影响。方法SD大鼠16只,分为Tropic1808基因重组蛋白组和生理盐水组,切断左侧坐骨神经,硅胶管套接后两神经断端间距10mm,再生室内注入Tropic 1808基因重组蛋白液(500μg/ml)或生理盐水13μl。术后每4周做一次足迹试验,16周时作神经干动作电位、脊髓前角运动神经元数、腓肠肌纤维截面积、硅胶管中段再生神经等检测。结果Tropic1808基因重组蛋白组SFI的恢复、神经干动作电位、脊髓前角运动神经元数、腓肠肌纤维截面积、硅胶管中段再生神经有髓神经纤维数等结果均明显优于生理盐水组,有统计学意义。电镜观察表明Tropic1808组再生轴突较NS组粗,髓鞘较生理盐水组厚。结论Tropic1808基因重组蛋白有促进大鼠坐骨神经再生的作用。     

大鼠骨髓基质细胞向Schwann细胞分化后蛋白表达变化的研究

近年来很多研究报道大鼠骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,MSCs）可以向神经细胞或神经胶质细胞分化,其中多数研究观察了细胞形态以及几种神经相关蛋白的免疫反应,也有报道用基因组学方法分析MSCs诱导过程中基因谱的表达变化.尚未见报道用蛋白质组学方法分析MSCs在诱导过程中蛋白谱的表达变化.本研究利用蛋白质组学技术分析MSCs向Schwann细胞样细胞诱导分化过程中蛋白谱的表达变化.从成年SD大鼠的股骨和胫骨中分离培养MSCs,应用复合诱导因子体外连续诱导MSCs向Schwann细胞样细胞分化.采用2-DE技术分离未诱导和诱导分化后MSCs总蛋白,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图谱,搜索数据库分析差异蛋白质点.所得到的MSCs蛋白谱有792个蛋白点,通过PDQuest软件分析诱导前后MSCs的蛋白谱,初步分析发现有74个蛋白质的表达发生了明显的变化,其中43个蛋白表达上调,31个蛋白表达下调.本研究通过质谱分析并进行网上数据库搜索匹配,初步分析发现这些蛋白主要包括骨架和结构蛋白、生长因子类的蛋白、代谢相关蛋白及酶类、伴侣蛋白、受体类蛋白、细胞周期蛋白、钙结合蛋白以及其他蛋白等.研究表明,MSCs体外条件诱导分化过程中有较多蛋白表达发生变化;其中与神经细胞和神经胶质细胞相关蛋白：BDNF,CNTF,GFAP等在MSCs体外条件诱导分化后中表达明显上调;本研究从蛋白质水平为MSCs体外向Schwann细胞样细胞条件诱导提供了新的研究资料。     

周围神经43kD蛋白免疫化学研究

目的：制图周围神经43kD蛋白单克隆抗体,并检测该蛋白在正常及损伤坐骨神经中的表达,方法：实验用SDS－聚丙烯酰胺胺凝胶电泳系统,从周围神经中分离回收43kD蛋白作为抗原,免疫BALB／c小鼠,通过杂交瘤技术和点膜印迹法检测,获得分泌识别43kD蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以Westernblot方法检测单克隆抗体的特异性,并检测43kD蛋白在正常坐骨神经及损伤坐骨神经远侧端中的表达。结果：经检测获得了识别43kD蛋白的单克隆抗体,Westernblot显示在正常大鼠坐骨神经与损伤后2周的坐骨神经远侧端组织电泳图谱43kD处均出现特异的阳性反应条带,在损伤神经中43kD蛋白阳性反应产物着色较深。结论：43kD蛋白具有独特的免疫化学特性,在正常与损伤坐骨神经中的有表达,在损伤坐骨神经中表达更强。     

神经再生素对PC12细胞分化的影响

目的探索神经再生素(nerve regemration factor．NRF)诱导PCl2细胞神经元性分化的潜在能力。方法以NGF为阳性对照,采用细胞培养方法,观察NRF在低血清的情况下,诱导PCI2细胞发生的形态学改变;同时,使用荧光免疫细胞化学方法,观察神经元标志性物质低分子量神经丝蛋白(NF-L)在NRF诱导分化的PCI2细胞中的表达。采用RT-PCR方法观察NRF对无血清培养的PC12细胞即早基因c—fos的表达变化。结果加药后第14天,NRF、组以及NGF组的PCI2细胞呈现明显的形态学改变：细胞胞体皱缩,且有明显的突起生长。空白对照组、NRI：、组(0．01μg／ml、0.1μg／ml、1μg,／ml)、NGF组(0．05μg／m1)具有明显突起的分化细胞占总细胞的比例分别为5．169％、25．718％、43．325％、73．038％、85．286％。免疫荧光细胞化学结果显示NRF、、NGF组的分化细胞基本都为NF-L标记阳性的细胞;NRF能使c-fos的表达上调,作用2h后达峰值。结论神经再生素具有诱导PCl2细胞的神经元性分化作用,且能使c—fos表达上调。     

实验性铅中毒对大鼠海马p75基因表达的影响

目的　探讨铅对海马 p75基因表达的影响。方法　采用RT PCR方法 ,半定量分析铅对大鼠海马组织NGFmRNA表达的变化。以地高辛标记的p75cDNA为探针 ,采用原位杂交方法观察铅对大鼠海马 p75mRNA表达的影响。结果　与对照组相比 ,大鼠以 1%醋酸铅经口染毒 8周 ,海马组织 p75mRNA的表达量明显下降 (P <0 0 1)。结论　铅可影响海马 p75基因的表达。     

β-1,4半乳糖基转移酶-I在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化

目的分析β-1,4半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-I)mRNA在正常和损伤坐骨神经髓鞘上的定位及其表达变化.方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-I在小鼠坐骨神经中的表达水平.将RT-PCR扩增的β-1,4-GalT-I片段,克隆到pGEM-T载体中.采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针.通过原位杂交及图像分析的方法,分析β-1,4-GalT-I mRNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的定位及其表达变化.结果检测到β-1,4-GalT-I在大鼠坐骨神经的髓鞘中有表达,并在坐骨神经损伤后1～2d内表达最高,随后表达下降.结论提示β-1,4-GalT-I可能在周围神经最主要的胶质细胞-施万细胞中表达,并在周围神经损伤后发生表达变化,这样为进一步分析β-1,4-GalT-I在周围神经再生中的调控机制奠定基础.     

p75NTR在大鼠失神经支配腓肠肌肌内神经中的表达

目的：观察神经营养因子低亲和力受体p75NTP在大鼠失神经支配腓肠肌内神经的表达和分布。方法：取正常大鼠及坐骨神经钳夹伤后3、6、12、21天的大鼠腓肠肌,免疫组织化学ABC法显示p75NTR阳性免疫反应产物。结果：正常大鼠腓肠肌无阳性免疫反应产物。坐骨神经损伤后不同时间腓肠肌内的神经呈p75NTR阳性反应,肌细胞为阴性。结论：坐骨神经损伤导致失神经支配腓肠肌内神经表达p75NTR,而肌细胞不表达p75NTR。     

人βNGFDNA地高辛标记探针的制备及在小鼠颌下腺中的基因表达

本研究在国内首先制备非放射性地高辛标记的人βＮＧＦＤＮＡ（ｄｉｇ－ｈ－βＮＧＦＤＮＡ）探针,并应用原位杂交技术结合计算机图像分析,对ＮＧＦｍＲＮＡ在ＩＣＲ雄性小鼠颌下腺中的分布进行了观察。实验结果显示ＮＧＦｍＲＮＡ主要分布于颌下腺纹状管（ＳＳＴ）和颗粒曲管（ＧＣＴ）的上皮细胞,其细胞基底部胞质呈杂交反应强阳性,细胞顶部呈弱阳性,图像分析显示二者具有显著性差异。本实验制备的ｄｉｇ－ｈ－βＮＧＦＤＮＡ探针灵敏度高达０．１ｐｇ／ｍｌ,并且特异性强,分辨力高,重复性好,是研究ＮＧＦｍＲＮＡ基因表达和调控的有力工具。     

抗寄生虫药物在体外活化后诱发姐妹染色单体互换的研究

本文报道了三种抗寄生虫药物在体外经大鼠肝脏微粒体酶系(S-9组分)活化后,诱发人体淋巴细胞姐妹染色单体互换(SCE)的作用。环磷酰胺需先经活化后才能提高SCE频率,以此为指标鉴定了本实验所用的S-9活性。实验结果表明,两种含硝基呋喃环的呋喃类药物——呋喃丙胺和M-170诱发的SCE频率显著高于对照组,表明具有诱变性;同时,呋喃丙胺需经过S-9活化后才表现出诱发SCE的能力。抗血吸虫药物吡喹酮不论是否经S-9活化,都不提高SCE频率。