荧光标记的染色体原位杂交及其在人类基因组研究中的应用

FISH技术是80年代开始发展起来的一种新的定位技术.在人类基因组研究中得到了广泛的应用.通过中期染色体的FISH可以进行SCP,Cosmid和YAC的染色体定位,嵌合克隆的鉴别;通过间期核的FISH可以在50kb的分辨率下进行基因作图;最新的研究进展已可以进行伸展的染色质丝(chromatin fibre)的FISH,直接测量基因的长度,从而达到高精度基因作图的目的.总之,随着FISH技术本身的发展,它将在人类基因组研究中发挥更大的作用.     

荧光原位杂交技术(FISH)在鱼类遗传学研究中的应用及前景

荧光原位杂交技术（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）是一种在分子水平上进行了细胞遗传学研究的得力工具,本文综述了近年来ＦＩＳＨ技术在鱼类的基因定位,性别鉴定,染色体变异及种间杂交等研究中的应用;并将此技术在鱼类的基因定位,早期性别鉴定,染色体重排与进化,染色体鉴别与分类及杂交鉴定等方面的应用前景作一展望。     

放射杂交:一种人类染色体基因定位方法

1.概述染色体基因定位的方法有多种,包括传统的原位杂交中的荧光技术(ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ)[1]和放射杂交(ｒａｄｉａｔｉｏｎｈｙｂｒｉｄ,ＲＨ)定位[2]等。ＲＨ定位解决了传统ＦＩＳＨ定位精度过于粗略(>2Ｍｂ)的缺点,而且成本低、定位效率高。用于ＲＨ定位的细胞系叫放射杂交系。放射杂交系的建立收稿日期:19991119作者简介:杨泉胜(1977—),男,研究生。是用一定剂量的Ｘ射线照射人类双倍体细胞,然后与仓鼠细胞融合形成。这样,仓鼠融合细胞中就存留了一定数量的人类染色体片段。根据辐…     

DNA纤维上的原位杂交技术

ＤＮＡ纤维上的荧光原位杂交（Ｆｉｂｅｒ－ＦＩＳＨ）技术是一种非重要的分子细胞遗传学技术。对于高分辨物理图的绘制、基因组和染色体结构的研究、致病基因的定位克隆等都有很大作用,本文介绍了该技术的基本操作和应用,以及与引物原位ＤＮＡ合成（ＰＲＩＮＳ）等技术相结合进行更精确基因定位的潜力。     

4种珍珠菜属植物染色体研究

４种珍珠菜属植物染色体研究廖亮,徐玲玲,田先华（江西九江师范专科学校生物研究所九江３３２０００）（陕西师范大学生物系西安７１００６２）关键词珍珠菜属,染色体数目,核型ＳＴＵＤＩＥＳＯＦＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＯＦＦＯＵＲＳＰＥＣＩＥＳＩＮＬＹＳＩＭＡＣＨ...     

双参数人类染色体流式分析及分选

用ＦＡＣＳＶａｎｔａｇｅ型流式细胞分选仪对人二倍体成纤维细胞的单分散染色体悬液进行双参数、双激光染色体核型分析及分选。人类染色体可分出２１个集团,除９至１２号染色体外,其余均能被单独分离。经染色体特异性探针池ＦＩＳＨ鉴定,染色体分选纯度可达９０．５％。     

水稻Xa21基因在水稻和玉米中的比较物理定位

比较基因组分析证明,禾本科不同种基因组间存在广泛的同线性和共线性。对水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）这一模式植物与其它禾本科植物基因的原位杂交比较定位可以揭示禾本科植物基因组结构的共同特点和进化规律。利用含Ｘａ２１基因的ｐＢ８２２作探针筛选水稻的细菌人工染色体（ＢＡＣ）文库,建立了一个包含３个ＢＡＣ克隆的重叠群。用生物素标记其中一个ＢＡＣ克隆,对水稻“广陆矮４号”和玉米自交系黄早四进行了染色体荧光原位杂交。同时,用ｐＢ８２２也作了原位杂交检测。在水稻第１１染色体长臂中间检出了杂交信号,信号与着丝粒的百分距离约为２４。在玉米的第１、３和第８染色体长臂观察到杂交信号,表明玉米基因组中具有三个Ｘａ２１的同源序列座位。ＢＡＣＦＩＳＨ的信号检出率达在４０％以上,大大高于质粒探针ｐＢ８２２的检出率（１５％）,而且可在同源染色体和姊妹染色单体上同时检出杂交信号的比例较高,证明了利用ＢＡＣ克隆荧光原位杂交进行比较物理定位的可行性和优越性。在ＢＡＣＦＩＳＨ中必须用相应基因组的ＣｏｔⅠＤＮＡ封阻,以排除重复序列的干扰。     

Localization of An Exogenous GH Gene on Chromosomes of Transgenic Pig by in situ Hybridizaiton

近些年来随着原位杂交技术的不断改进,该技术已广泛用于染色体的基因定位。非放射性标记探针的应用使基因定位变得更加简单易行,从而有可能对动物的转基因进行定位研究。本文首次采用胶体金标记药盒（Ａｎｔｉｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎｇｏｌｄ）和银加强试剂（Ｓｉｌｖｅｒｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｒｅａｇｅｎｔｓ）的非同位素原位杂交技术对转基因猪外源基因进行了定位研究。如Ｆｉｇ．１所示：表达质粒ｐＳＭＴＰＧＨ含有载体ｐＵＣ１９,羊启动子ＭＴ０１１和猪生长激素ＰＧＨ基因。选５头带有ｐＳＭＴＰＧＨ的转基因猪,分别制备含有染色体ＤＮＡ的杂交膜。用ＢｇｌＩＩ和ＳｍａＩ对ｐＳＭＴＰＧＨ进行完全酶切,收集０．９Ｋｂ片段作为探针,以ｄｉｇ１１ｄＵＴＰ进行标记。探针与ＤＮＡ杂交后,用Ａｎｔｉｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎｇｏｌｄ和Ｓｉｌｖｅｒｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｒｅａｇｅｎｔｓ进行显色反应。胰酶法Ｇ—显带后,用光学显微镜检查。选择分散相良好、显影银颗粒清楚的玻片进行摄影记录（Ｆｉｇ．２）。对染色体上的显影银颗粒进行统计分析,参照家猪的染色体标准带型,确定外源ＰＧＨ基因整合位点。Ｆｉｇ．３为４１０４号转基因猪染色体上的银颗粒分布情况。对５头     

正常的和转化的C3H小鼠胚胎成纤维细胞neu基因结构的初步研究

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术并结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交从基因水平对正常和￣３Ｈ－ＴｄＲ恶性转化小鼠胚胎成纤维细胞ＮＣ３Ｈ１０和ＴＣ３Ｈ１０中ｎｅｕ基因进行研究。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交结果表明恶性转化的ＴＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因出现重排和扩增,ＳＳＣＰ分析未发现ＴＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因跨膜区突变。上述结果说明ＴＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因结构异常可能在跨膜区外,ｎｅｕ基因异常在￣３Ｈ－ＴｄＲ诱导的细胞恶性转化过程中可能有重要的作用,ＥＧＦ可促进ｎｅｕ基因表达增高,研究发现在ＥＧＦ持续作用下,ＮＣ３Ｈ１０细胞ｎｅｕ基因甲基化水平无显著变化,说明ＥＧＦ可能是通过其它途径调控ｎｅｕ基因表达增高的,排除了ＥＧＦ通过改变ｎｅｕ基因甲基化水平而调控ｎｅｕ基因表达的可能性。     

链霉菌形态分化基因——白基因的研究

白基因(ｗｈｉ)是一类在链霉菌形态分化过程中具有重要作用的基因。由于这些基因的突变阻断了气生菌丝到孢子形成这一形态分化过程,相应的突变株在延时培养条件下仍保持白色的表型而得名。1972年,Ｈｏｐｗｏｏｄ和Ｃｈａｔｅｒ将50多个天蓝色链霉菌(Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ)白色突变株分成9个形态类型(ｗｈｉＡ,Ｂ,Ｃ,Ｄ,Ｅ,Ｆ,Ｇ,Ｈ,和Ｉ),并通过遗传作图将它们定位在了8个不同的基因位点上[1]。1975年,Ｃｈａｔｅｒ等通过分析双突变株的表型确定了五个白基因(ｗｈｉＡ,Ｂ,Ｇ,Ｈ和Ｉ)的上位关系[2]。在上述已确定的8…     

粟酒裂殖酵母染色体DNA的脉冲电泳分析

采用等高锁状均质电场（ＣＨＥＦ）凝胶电泳技术,对来自中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心的粟酒裂殖酵母菌株ＡＳ２．２１４进行染色体ＤＮＡ分析。ＣＨＥＦ电泳结果显示菌株ＡＳ２．２１４的４条染色体ＤＮＡ的分子大小分别约为５９００ｋｂ、３２００ｋｂ、２５００ｋｂ和５５０ｋｂ,基因组大小约为１２０００ｋｂ。供试菌株ＡＳ２．２１４第Ｉ条染色体ＤＮＡ为５９００ｋｂ与已研究报道的菌株９７２ｈ＾－和ＨＭ２４８（     

人类YAC库PCR三维筛选体系的建立及质量考核

为了在知道某个区域、位点、基因或ＤＮＡ片段的部分信息后,能从ＣＥＰＨＹＡＣ库中筛选出与其对应的ＹＡＣ克隆,为进一步研究奠定基础,需要建立一个筛选体系。本文概述了这一筛选体系的建立过程。随后,用两对与已知基因对应的引物进行了筛选验证工作,证明了这一体系的可用性,同时提出了以后筛选的途径,即首先筛选ＹＡＣ库的ＭｅｇａＹＡＣ部分,并以５块板为一组进行筛选。另外,运用荧光原位杂交技术（ＦＢＨ）,对ＣＥＰＨＹＡＣ库的质量及其第一代人类基因组物理图谱进行了考察。我们取２６个ＹＡＣ克隆进行ＦＩＳＨ定位,结果其中嵌合体１３个,占５０％。定位错误的克隆有６个,占２３％。非嵌合体且定位正确的共９个,占３５％。     

新麦草的组织培养及染色体分析

新麦草的组织培养及染色体分析孙震晓,夏光敏,陈惠民（山东大学生物系．济南２５０１００）ＴＩＳＳＵＥＣＵＬＴＵＲＥＡＮＤＣＨＲＯＭＯＭＥＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＰｓＡＴＨＹＲＯＳＡＣＨＹＳＪＵＮＣＥＡ（ＦＩＳＣＨ．）ＮＥＶＳＫＩｓｕｎＺｈｅｎ－ｘｉａｏ;ｘ...     

双峰驼血浆促卵泡素的放射免疫分析法

用单峰驼促卵泡素标准品（ＣａｍＦＳＨ）,ｈＦＳＨ抗血清和＾１２５Ｉ－ｈＦＳＨ建立了测定双峰驼血浆ＦＳＨ的放射免疫分析方法,并通过一系列实验证明,该方法可以用于测定双峰驼血浆ＦＳＨ,是研究双峰驼生殖内分泌学的可靠手段之一。     

组织培养诱导的普通小麦─黑麦代换系和附加系分子细胞遗传学检测

通过组织培养从普通小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）与八倍体小黑麦（×ＴｒｉｔｉｃｏｓｅｃａｌｅＷｉｔｍａｃｋ）杂种Ｆ０幼胚再生植株后代中获得２个代换系９３０４９８、９３０４８３和１个附加系９３００２９。以黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）基因组ＤＮＡ为探针,采用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）证实了黑麦染色体的存在。在有丝分裂中期,经ＦＩＳＨ处理的黑麦染色体为黄绿色,明显区别于红色的小麦染色体。染色体配对、Ｃ分带、麦谷蛋白电泳分析,证明两个代换系为１Ｄ／１Ｒ代换,附加的也是黑麦１Ｒ染色体     

乙型肝炎、肝硬变和肝癌中HBxAg的表达及其在肝癌发生中的作用

对３７９例良、恶性肝组织进行的免疫组织化学研究显示,３３％的慢性迁延性肝炎（６／１８）、７６％的慢性活动性肝炎（２６／３４）、９２％的肝硬变（５７／６２）和９７％的肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）（５８／６０）中有ＨＢｘＡｇ表达,阳性率高于ＨＢｓＡｇ或ＨＢｃＡｇ。癌周肝中的ＨＢｘＡｇ阳性率显著高于非癌周肝。与其它２种ＨＢＶ抗原不同,ＨＢｘＡｇ表达在细胞类型上有较明显的选择性,在肝小多角细胞（ＳＰＬＣ）、小细胞性不典型增生（ＳＣＤ）及ＨＣＣ中较强。与ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｃ－ｍｙｃ和ＥＧＦ－Ｒ表达进行的对照研究表明ＨＢｘＡｇ与ＩＧＦⅡ和ｃ－ｅｒｂＢ－２这２种ＨＣＣ发生相关基因的表达关系密切。ＰＣＮＡ染色结果显示ＨＢｘＡｇ阳性组织的细胞增殖活性显著高于ＨＢｘＡｇ阴性组织。我们的结果还表明ＨＢｘＡｇ表达与肝细胞不典型增生的发生和进展有关、提出ＨＢＶＸ基因可能通过其表达产物（ＨＢｘＡｇ）首先激活ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２基因,继而引起显著的ＳＰＬＣ增生和ＳＣＤ而参与ＨＣＣ发生的．     

两种淡水鱼类的Sox基因

ＴＨＥＳＯＸＧＥＮＥＳＩＮＴＷＯＳＰＥＣＩＥＳＯＦＦＲＥＳＨＷＡＴＥＲＦＩＳＨＥＳ两种淡水鱼类的Ｓｏｘ基因ＫｅｙｗｏｒｄｓＳｅｘ,Ｉｎｔｒｏｎ,Ｆｒｅｓｈｗａｔｅｒｆｉｓｈ关键词性别内含子淡水鱼类ＴｈｅＳｒｙｉｓｔｈｅｓｅｘｄｅｔｅｒｍｉｎｉ...     

栝楼属8种植物的染色体数目

栝楼属８种植物的染色体数目黄潞琦,乐崇熙,李懋学（中国中医研究院中药研究所,北京１００７００）（北京大学生物系,北京１００８７１）关键词栝楼属,染色体数目ＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＮＵＭＢＥＲＳＯＦ８ＳＰＥＣＩＥＳＩＮＴＲＩＣＨＯＳＡＮＴＨＥＳ￥ＨＵＡＮＧ...     

酒精─盐酸─醋酸洋红在植物染色体制片中的运用

酒精┐盐酸┐醋酸洋红在植物染色体制片中的运用刘建全（中国科学院西北高原生物研究所，西宁８１０００１）ＨＥＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＡＬＣＯＨＯＬＩＣＨＹＤＲＯＣＨＬＯＲＩＣＡＣＩ┐ＤＣＡＲＭＩＮＥＳＴＡＩＮＴＯＴＨＥＰＬＡＮＴＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＳＳ...     

二种不同抗冷性水稻品种剑叶5’－核苷酸酶的细胞化学定位

二种不同抗冷性水稻品种剑叶５’－核苷酸酶的细胞化学定位陈善娜邹晓菊梁斌（云南大学生物系，昆明６５００９１）ＴＨＥＣＹＴＯＣＨＥＭＩＣＡＬＬＯＣＡＴＩＯＮＯＦ５’－ＮＵＣＬＥＯＴＩＤＡＳＥＩＮＳＷＯＲＤＳＨＡＲＰＥＤＬＥＡＶＥＳＯＦＴＷＯＤＩＦＦＥＲ...