培养新生大鼠心肌细胞的电信号传导：多电极记录研究

利用多电极阵列同步记录技术对培养的新生大鼠单层心肌细胞的电活动进行胞外记录,观察心肌细胞在自发搏动和电刺激情况下信号在细胞间的传导模式。通过对记录信号的处理和分析,能获得诸如起搏细胞的数量和位置、动作电位的传导速度和途径以及不同起搏细胞间的相互影响等信息。研究还发现,心肌细胞阈下刺激会影响细胞的搏动和信号传导。     

模拟微重力条件下心肌细胞的体外三维固定化培养

观察心肌细胞体外培养形成三维(3D)组织结构的能力和过程及心肌细胞在模拟微重力状态下的3D固定化培养效果。应用酶消化法从新生的乳鼠心室肌组织获取心肌细胞,以Cytodex3为心肌细胞的3D固定化培养载体,将心肌细胞固定化培养于Spinnerflask中,用扫描电镜观察心肌细胞体外培养形成的3D组织结构;以心肌细胞的代谢效率和细胞搏动强度为观察指标,比较心肌细胞在Spinnerflask及HARV(highaspectratevessel)生物反应器中3D固定化培养的差异。结果显示,心肌细胞不仅能贴附于Cytodex3上生长,且形成了具有同步自律收缩的3D组织样结构;心肌细胞在两种不同培养体系中的细胞接种效率和细胞形态没有明显差异,培养于HARV中的心肌细胞的代谢效率和细胞搏动强度均明显高于Spinnerflask培养体系。体外培养的乳鼠心肌细胞具有形成同步自律收缩的3D组织结构的能力;模拟微重力的培养环境有利于改善心肌细胞3D组织样培养物的代谢和功能 。     

改良法分离培养SD新生乳鼠原代心肌细胞*

目的:建立一种稳定、快速的SD新生乳鼠原代心肌细胞分离培养改良方法。 方法:取SD新生乳鼠心室,0.12%Ⅱ型胶原酶消化,Percoll密度梯度离心结合5-溴脱氧尿嘧啶(5-BrdU)化学抑制法纯化心肌细胞,体外培养于含5%马血清的改良DMEM/F12中,次日更换为普通含10%胎牛血清的高糖DMEM继续培养,并比较此改良方法与传统差速贴壁法的差异。 结果:改良法获得的心肌细胞生长良好,接种24 h 后几乎全部贴壁生长,细胞呈三角形、梭形或不规则形,个别细胞出现自主搏动,频率为10～30 beats/min不等。48 h后心肌细胞变长伸出伪足,部分细胞呈现同步搏动, 频率接近50～80 beats/min。72 h后心肌细胞成菊花样交织成网,自发搏动趋于同步,频率加快至80～100 beats/min;96 h后细胞聚集成簇,呈岛屿样,同步搏动频率在100～120 beats/min左右,一周内细胞状态良好。改良法纯化原代心肌细胞的得率((1.17±0.15)×10⁶ vs (1.21±0.22)×10⁶,P＞0.05)和存活率与传统差速贴壁法相当(93.3%±1.4% vs 92.2%±0.7%, P＞0.05 ),但是改良方法获得的原代心肌细胞纯度更高 (94.7%±2.1% vs 89.5%±1.3%, P＜0.05),且用时较短((3.1±0.4)h vs (4.3±0.3)h, P＜0.01)。 结论:改良法获得心肌细胞耗时短、纯度高、结构功能保存完整,且实验重复和稳定性好,是一种理想且简单易行的的原代心肌细胞分离培养方法。     

细胞膜的基本结构——细胞膜的结构与功能及其有关问题(一)

细胞膜是在细胞外表的一层薄膜。细胞的许多功能活动是通过细胞膜进行的。机体的许多生命活动,如体液调节、神经调节、生物电、淋巴细胞对抗原的识别、心肌细胞的节律性同步搏动、受精、细胞分化等等,都和细胞膜的结构与功能有关。细胞膜研究成为当前生物科学研究中的焦点之一。细胞膜的问题不只是细胞学、分子生物学、生化学方面的重     

微重力条件下心肌细胞在聚羟基乙酸纤维支架上的三维固定化培养

以 1d龄Wistar乳鼠的心室肌组织为心肌细胞的来源 ,采用胰蛋白酶消化及细胞差速贴壁分离心肌细胞 ,以未经修饰和经鼠尾胶原溶液浸泡修饰的聚羟基乙酸 (polyglycolicacid ,PGA)纤维支架作为心肌细胞体外三维 (3D)固定化培养的支架 ,比较心肌细胞在静置培养体系及微重力培养体系下的生长、形态和收缩状况。心肌细胞在未经处理的PGA纤维支架 3D固定化培养时 ,心肌细胞在其上的分布不均匀 ,大部分心肌相互连接形成球状聚集体 ;PGA纤维支架经鼠尾胶原溶液浸泡处理后 ,心肌细胞在其上的分布较为均匀 ,细胞形态多呈梭形或不规则状 ,心肌细胞自律性搏动的幅度加大。在模拟微重力培养条件下 ,心肌细胞在经鼠尾胶原溶液浸泡修饰的PGA纤维支架上的分布更为均匀 ,心肌细胞形成具有自律性同步收缩特性、面积约为 15mm2 的类组织样 3D结构     

黄芪对培养的大鼠搏动心肌细胞感染柯萨奇B_2病毒后保护作用的超微观察

前文已经报道应用电子显微镜观察到培养的新生大鼠搏动心肌细胞感染柯萨奇B_2病毒后,细胞超微结构有明显病变,而中药黄芪对柯萨奇B_2病毒感染培养的大鼠心肌细胞所致心肌酶-乳酸脱氢酶及谷草转氨酶的释放,细胞搏动的停止等均有保护作用(待发表资料)。本     

铬对增强心肌细胞抗病毒作用的研究

本文研究了Coxsackie B_2病毒(XOX B_2V)对人及鼠心肌细胞的感染性以及三氯化铬对心肌细胞生长与对病毒感染佳的影响。实验结果证明人心肌细胞对COX B_2 V感染的敏感性比鼠心肌细胞高。三氯化铬能促进人与鼠心肌细胞的生长,促进鼠心肌细胞的搏动及搏动频率加快,并随着培养时间的增加,细胞生长代谢旺盛,细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量升高。用含铬培养液培养的人心肌细胞对病毒感染的敏感性有所降低,人心肌细胞培养液中LDH的含量随病毒对细胞损伤的程度而升高。     

中草药和铬对心肌细胞生长代谢及其抗病毒的实验研究

选用中草药人参、黄芪、麦冬及微量元素铬于体外培养的人及鼠心肌细胞上，研究药物对细胞生长代谢及其抗病毒作用。实验表明：中草药及铬均有促进细胞生长代 谢、延长细胞存活时间、增强鼠心肌细胞自发缩搏动及提示人心肌细胞抗病毒的作用，其中麦冬、黄芪及铬的作用更明显。     

人胚心肌细胞培养的初步研究(简报)

本室在乳鼠心肌细胞培养的基础上,最近又成功地培养了人胚心肌细胞。现报告如下。材料和方法妊娠17及18周的胎儿,经水囊引产娩出后,立即在无菌条件下取出心室肌,剪碎,以0.06％胰蛋白酶分次消化成单细胞,用含20％小牛血清的Eagle培养基(MEM)制成10~6细胞/毫升的心肌细胞悬液,进行原代人胚心肌细胞单层培养。在倒置显微镜下观察心肌细胞的搏动及形态,拍摄照片,以及录制心肌细胞搏动的电视录像,并作扫描也子显微镜的观察。     

培养心肌细胞肾上腺素能受体的研究

自1960年Harary用胰酶消化分散新生大鼠单个心肌细胞培养成功以后,其他学者相继培养成功大鼠胎鼠和人胚分散心肌细胞。我国学者参照Harary的方法于1981年培养大鼠乳鼠单个心肌细胞成功,有的学者还于1983年观察了β受体药物异丙肾上腺素和心得安对心肌细胞搏动频率的影响。 为了研究单个心肌细胞和其它细胞混合培养时,心肌细胞和其它细胞形态分化和化学分化     

小鼠细胞分离培养及鉴定操作的优化和分析

目的 :探讨小鼠细胞分离培养及鉴定的优化操作,观察其应用效果。方法:选取0.25%胰蛋白酶对小鼠心室肌细胞进行分离,通过5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)处理分离到的心室肌细胞,差速离心后静止沉淀。使用观察仪器观察,实施鉴定处理。结果:心肌细胞明显同步搏动频率为50~160次,肌丝发达,鉴定结果显示为阳性。结论:在小鼠细胞分离培养的过程中使用胰蛋白酶能够加速分离效果,缩短培养周期。     

细胞膜的生物学意义及细胞膜与细胞核的关系——细胞膜的结构与功能及其有关问题(三)

机体许多生理和病理的活动机理都与细胞膜有密切关系。关于机体的体液调节、神经调节与细胞膜的关系已在上一期文中阐述。本文将叙述细胞膜与炎症、免疫、心肌细胞的节律性同步搏动、器官的组织结构、胚胎发育等的关系;最后谈一谈细胞膜与细胞核的关系,从而一方面认识:细胞膜的结构并不是固定不变的,而是在机体的成长发育过程中,在细胞与外环境不断相互作用过程中发展变化着的;     

大豆皂甙单体Ⅰ对培养心肌细胞自发性搏动与动作电位的影响

心室肌细胞在培养过程中,由快反应细胞转变为慢反应细胞,是研究药物对钙通道活动影响的理想模型。在此模型上,我们发现大豆总皂甙对大鼠心肌细胞有钙通道阻滞作用。为了对此作用做进一步分析,本实验在培养的心肌细胞上,以心肌细胞动作电位与自发性搏动为指标,对比观察大豆皂甙Ⅰ与尼莫地平的作用,以及大豆皂甙Ⅰ的量效关系。     

赤芍总苷对培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

为了探讨赤芍总苷对心肌细胞损伤的保护作用,以异丙基肾上腺素加入培养的乳鼠心肌细胞造成缺血缺氧损伤模型,对比分析正常对照组、药物损伤组、辅酶Q10阳性对照组、以及不同剂量赤芍总苷保护组的细胞形态学、心肌酶谱等指标、结果显示：损伤组细胞搏动加速,存活率下降,GOT、LDH、CK等3种心肌酶活力均显著升高;而辅酶Q10组和赤芍总苷组上述指标都有不同程度的改善,其中高剂量赤芍总苷组的保护作用优于阳性对照组．证明赤芍总苷对异丙基肾上腺素造成的培养乳鼠心肌细胞损伤具有保护作用,并且呈现剂量依赖关系．     

一氧化氮对心肌的抑制性保护作用

内皮型与神经型一氧化氮合酶(eNOS,nNOS)在心肌细胞内持续表达,而细胞应激可引起诱导型NOS(iNOS)表达.心肌细胞结构型eNOS与nNOS源性NO,在生理条件下对心肌主要发挥4方面的抑制作用:减缓心肌细胞搏动频率,轻度抑制心肌细胞收缩功能,加速心肌细胞舒张并增加顺应性,以及轻度抑制线粒体电子传递而增强氧利用效...     

介绍一种描记培养心肌细胞搏动的简便方法

离体培养的心肌细胞具有自发的搏动节律,这一现象已经广泛应用于细胞学、药理学以及生物化学等方面的研究中。应用闭路电视的方法和微电极技术,虽可完好地显示出心肌细胞的搏动及其电位变化,但需要较复杂的仪器设备。我们参考 Okarma 等的工作,用普通材料制成了一个简易光电换能装置,能够同时记录几个不同单细胞或细胞团的搏动。经过一年多的实际应用,效果颇为满意,现介绍如下:一、光电换能装置1.暗盒用0.2毫米厚的薄铜板焊制,由接口 A、主体 B 和后盖 C 三个部件依次套接成一个圆柱形暗盒,以接口 A 固定在倒置显微镜的投影镜头上。暗盒直径42毫米,高约     

心肌细胞自发性搏动节律的分岔和混沌现象

心脏的节律是复杂的、非线性的;其节律复杂性的起源是多层次的。实验观察了心肌细胞自发性搏动节律的模式,以及改变细胞间耦合强度时节律的转化规律。表明在以正常灌流液灌流状态下,心肌细胞表现为多种不同的节律模式,可以是周期的,也可以是非周期的。当细胞间耦合强度下降时,心肌细胞节律发生转化,并经倍周期分岔进入混沌节律。实验结果有助于更好地理解心脏节律复杂性的起源。     

新生小鼠心肌细胞分离培养的改良及其鉴定

通过改进新生小鼠心肌分离及其原代培养方法,提高心肌细胞的活性和纯度,构建了新生小鼠心肌细胞分离及原代培养实验平台.采用低浓度的胰酶和Ⅱ型胶原酶反复消化心脏组织5～6次,然后差速贴壁30 min分离纯化心肌细胞,得到的心肌细胞存活率和纯度高,细胞搏动率高,持续时间久.     

β_3受体激动剂对培养的大鼠心肌细胞搏动频率和细胞内环一磷酸腺苷水平的影响

目的 :观察 β3 受体激动剂 (BRL 37344 )对培养的大鼠心肌细胞搏动频率和细胞内环 -磷酸腺苷 (cAMP)水平的影响 ,以探讨 β3 受体在心肌细胞中的作用。方法 :分离培养乳鼠心肌细胞 ,随机分为八组 :对照组、ISO组、Nadolol+ISO组、BRL组、PTX +BRL组、L NAME +BRL、Nadolol+BRL组和Bupranolol+BRL组 ,观察心肌细胞搏动频率 ,并应用酶联免疫方法测定cAMP含量 ,逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)方法测 β3 受体mRNA表达。结果 :ISO(非选择性 β受体激动剂 )可显著增加心肌细胞搏动频率和升高cAMP水平 ,这种作用可被Nadolol(为 β1,β2 受体抑制剂 )阻断。BRL 37344可显著降低心肌细胞搏动频率和cAMP含量 ,这种作用可被PTX(Gi 蛋白抑制剂 )和Bupranolol(非选择性 β受体阻滞剂 )完全阻断 ,同时可被L NAME(一氧化氮合酶抑制剂 )部分阻断 ,不受Nadolol影响。RT PCR方法测出心肌细胞中有 β3 受体mRNA表达。结论 :心肌细胞中存在 β3 受体 ,它在心肌表现为负性变力作用 ,β3 受体的效应不受 β1,β2 受体抑制剂影响。心脏 β3 受体信号途径中可能有Gi 蛋白的参与 ,并且经过一氧化氮合酶途径发挥其作用。     

β3受体激动剂对培养的大鼠心肌细胞搏动频率和细胞内环-磷酸腺苷水平的影响

目的：观察β3受体激动剂(BRL-37344)对培养的大鼠心肌细胞搏动频率和细胞内环-磷酸腺苷(cAMP)水平的影响,以探讨β3受体在心肌细胞中的作用。方法：分离培养乳鼠心肌细胞,随机分为八组：对照组、ISO组、Nadolol ISO组、BRL组、PTX BRL组、L-NAME BRL、Nadolol BRL组和Buprandol BRL组,观察心肌细胞搏动频率,并应用酶联免疫方法测定cAMP含量,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法测β3受体mRNA表达。结果：ISO(非选择性β受体激动剂)可显著增加心肌细胞搏动频率和升高cAMP水平,这种作用可被Nadolol(为β1,β2受体抑制剂)阻断。BRL-37344可显著降低心肌细胞搏动频率和cAMP含量,这种作用可被PTX(Gi蛋白抑制剂)和Bupranolol(非选择性β受体阻滞荆)完全阻断,同时可被L-NAME(一氧化氮合酶抑制剂)部分阻断,不受Badolol影响。RT-PCR方法测出心肌细胞中有β3受体mRNA表达。结论：心肌细胞中存在β3受体,它在心肌表现为负性变力作用,β3受体的效应不受β1,β2受体抑制剂影响。心脏β3受体信号途径中可能有Gi蛋白的参与,并且经过一氧化氮合酶途径发挥其作用。