漆酶介导生物体内酚类氧化偶联的基本原理及其在绿色合成中的应用

漆酶(Laccase,p-diphenol dioxygen oxidoreductases,EC 1.10.3.2)是一类包含三核铜簇位点的多酚氧化还原酶,广泛存在于细菌、真菌、高等植物和昆虫体内。该类酶不仅能够促进生态系统中高分子木质素和腐殖质聚合物的生物分解,还可以催化有机体内单酚和多酚类化合物参与黑色素、木质素、黄酮类和角质层等功能酚聚合物的生物合成。漆酶介导有机物的分解代谢和合成代谢机制有益于生态环境中碳循环和生物形态发生变化。在生物体内,漆酶催化天然酚类单电子氧化形成苯氧活性自由基或醌类中间体,随后这些活性中间体发生自我偶联或交叉偶联反应,生成多种结构复杂的大分子C-C、C-O-C或C-N-C功能聚合产物。因此,通过人工模拟漆酶催化生物体内的绿色合成代谢机理和路径,合理设计和定向改造漆酶在生物体外催化酚类底物偶联形成大分子功能聚合产物的结构和特性,有望为拓展和研发漆酶在绿色合成化学中的多功能应用提供丰富的参考价值和新颖的见解思路。     

胡芦巴超临界CO2萃取物的萃取条件优化及其对谷蠹的触杀活性

对胡芦巴Trigonella foenum-graecum L.中杀虫活性成分进行超临界CO₂萃取分离,并以主要储粮害虫谷蠹Rhyzopertha dominica Fabricius为对象,对其触杀活性进行研究。采用正交试验设计,以萃取液中活性成分的得率、毒力为考察指标,对杀虫活性成分的提取条件进行优化。结果表明：最佳萃取工艺为萃取压力25 MPa,萃取温度55℃,夹带剂为95%乙醇,固液比为200 g:30 mL。萃取压力和夹带剂体积对试验指标有非常显著的影响,萃取温度和夹带剂浓度的影响较小。优化后的萃取方案可达到5.96%的得率。萃取产物对谷蠹的触杀试验结果显示,优化后的超临界CO₂萃取工艺对胡芦巴中的杀虫物质具有良好的选择性,得到的萃取物对谷蠹处理10天后的致死中浓度为65.03 μg/cm²,触杀活性明显增加。     

国外卫生信息化建设对我军卫生信息化建设与发展的启示

为加快我国军队卫生系统的信息化建设,本文阐述了国外以及军内外卫生信息化建设的基本情况,系统分析了我军卫生信息化建设面临的一系列新挑战和问题,并提出了有针对性地应对措施,为全军卫生系统的信息化建设的长远规划打下了坚实的基础。     

蔗糖异构酶PalI在解脂耶氏酵母中的表面展示

【背景】蔗糖异构酶(PalI)生物转化蔗糖是目前生产异麦芽酮糖的主要方法,但在生产过程中存在的蔗糖异构酶转化蔗糖副产物比例较高、游离酶需要分离纯化等问题限制了异麦芽酮糖工业生产的应用。【目的】构建蔗糖异构酶PalI在解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica) Po1g中的表面展示菌株,以降低蔗糖异构酶转化蔗糖的副产物比例及其纯化成本。【方法】为获得具有生产PalI能力的Y.lipolytica Po1g表面展示菌株,通过重叠延伸PCR将克雷伯氏菌(Klebsiella singaporensis)LX3的PalI的编码基因PalI与全基因合成的来自Y.lipolytica细胞壁的锚定蛋白Pir1融合,转入Y.lipolytica Po1g中构建表面展示菌株。利用3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)比色定糖法测定表面展示的PalI酶活力并对其酶学性质进行探究,通过高效液相色谱法分析其转化蔗糖的产物。【结果】构建了蔗糖异构酶表面展示菌株Pir1-PalI/Po1g,经DNS法测得展示在Y. lipolytica Po1g表面的Pal...     

苗期杨树生长和光合特征在不同水分梯度和施肥下的比较分析

为提高水肥效率,指导杨树科学浇水施肥,以华石2号杨为材料,通过不同的水、肥配比试验,对其生长和光合特征进行比较分析。结果显示:水分和施肥量双因素方差分析发现,不同土壤水分间,苗高和地径差异均显著(P<0.05),不同施肥量间,地径差异显著(P<0.05),而苗高差异不显著,生长表现最差的为A4B4(自然雨水, 0 g复合肥)处理,生长最好的为A2B2(80%—85%田间持水量, 15 g复合肥)处理。无论是不同施肥处理还是水分处理,植株叶片数差异均显著(P<0.05),A4B1(自然雨水,21g复合肥)处理的单株叶片数最少,均值为17.67片,而A1B2(95%—100%田间持水量, 15 g复合肥)处理的单株叶片数最多,均值为39.00片。比较发现,叶片叶绿素含量比较低的主要是施肥量少的几个处理,叶绿素含量比较高的主要是施肥量较高的处理。光饱和点(PLS)最大为处理A1B1(95%—100%田间持水量,21g复合肥),达到1961.59μmol·m-2·s-1,处理A2B1(80%—85%田间持水量,21g复合肥)的最大净光合速率(Pnmax)最高(24.75μmo...     

改良法分离培养SD新生乳鼠原代心肌细胞*

目的:建立一种稳定、快速的SD新生乳鼠原代心肌细胞分离培养改良方法。 方法:取SD新生乳鼠心室,0.12%Ⅱ型胶原酶消化,Percoll密度梯度离心结合5-溴脱氧尿嘧啶(5-BrdU)化学抑制法纯化心肌细胞,体外培养于含5%马血清的改良DMEM/F12中,次日更换为普通含10%胎牛血清的高糖DMEM继续培养,并比较此改良方法与传统差速贴壁法的差异。 结果:改良法获得的心肌细胞生长良好,接种24 h 后几乎全部贴壁生长,细胞呈三角形、梭形或不规则形,个别细胞出现自主搏动,频率为10～30 beats/min不等。48 h后心肌细胞变长伸出伪足,部分细胞呈现同步搏动, 频率接近50～80 beats/min。72 h后心肌细胞成菊花样交织成网,自发搏动趋于同步,频率加快至80～100 beats/min;96 h后细胞聚集成簇,呈岛屿样,同步搏动频率在100～120 beats/min左右,一周内细胞状态良好。改良法纯化原代心肌细胞的得率((1.17±0.15)×10⁶ vs (1.21±0.22)×10⁶,P＞0.05)和存活率与传统差速贴壁法相当(93.3%±1.4% vs 92.2%±0.7%, P＞0.05 ),但是改良方法获得的原代心肌细胞纯度更高 (94.7%±2.1% vs 89.5%±1.3%, P＜0.05),且用时较短((3.1±0.4)h vs (4.3±0.3)h, P＜0.01)。 结论:改良法获得心肌细胞耗时短、纯度高、结构功能保存完整,且实验重复和稳定性好,是一种理想且简单易行的的原代心肌细胞分离培养方法。     

峨眉金线兰的生药鉴别

金线兰属植物形态相似，峨眉金线兰（Anoectochilus emeiensis）为金线兰（Anoectochilus roxburghii）的近缘种。调查发现，市场上常将峨眉金线兰当作金线兰使用，为区分两者，本试验采用生药学鉴定方法观察峨眉金线兰的原植物形态、组织构造及粉末显微特征；采用HPLC-ELSD法测定峨眉金线兰中主要内酯苷的含量。峨眉金线兰叶片为卵形，具有金红色网纹；花不倒置，唇瓣白色，前部裂片长圆状倒披针形，中部两侧各具1枚宽大长圆形的褶片且其边缘具疏锯齿。显微结构中，根茎横切面中皮层宽广，根木质部导管2~5个成束，茎木质部导管1~8个成束；叶横截面叶肉细胞中有大量红色物质，上表皮呈乳突状突起，下表皮气孔较多，气孔以不定式为主；粉末中可见草酸钙针晶和导管。3批峨眉金线兰中金线莲苷和斑叶兰苷（goodyeroside A）的含量分别为32.66~35.21 mg/g和134.41~137.72 mg/g，分别在100~500 μg/mL和200~1 000 μg/mL质量浓度范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为100.51%（RSD=1.56%）和97.50%（RSD=1.54%）。以上特征可为峨眉金线兰的生药鉴别提供参考依据。