p16基因的功能及与肿瘤的关系

ｐ１６基因是新近发现的一种肿瘤抑制基因,它的编码蛋白是Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ／ｃｄｋ４激酶的特异性抑制剂,通过抑制细胞周期进程而抑制细胞增殖。ｐ１６基因在多种肿瘤中有高频率的纯合缺失和点突变,使之成为继ｐ５３之后肿瘤基础及临床研究中又一热点之一。     

哺乳类细胞中周期蛋白依赖激酶抑制因子

近两年,人们相继发现了一组能结合性抑制周期蛋白依赖激酶（ＣＤＫｓ）活性的蛋白因子──ＣＤＫ抑制因子（ＣＫＩｓ）。它们分别是：ｐ２１、ｐ１６、ｐ１５、ｐ２７和ＣＤＩｌ。ｐ２１和ｐ２７有一定同源性,能抑制多种ＣＤＫｓ的活性;ｐ１６和ｐ１５则同源性更高,能特异地与ＣＤＫ４、ＣＤＫ６结合;ＣＤ１１的结合特异性还有待进一步的研究。ｐ２１的表达受ｐ５３的正调控;ＴＧＦ－β则上调ｐ１５的表达以及ｐ２７的抑制活性。以上表明ＣＫｌｓ不仅是ＣＤＫｓ活性的调控者,而且还是抑癌因子与细胞周期调控之间的直接联系者。     

p18^INK4C,p19^INK4D的结构,功能及细胞分化

ｐ１８＾ＩＮＫ４Ｃ和ｐ１９ＩＮＫ４Ｄ是细胞周期调控中的两种抑制因子,属于ＣＫＩｓ中的ＩＮＫ４家族蛋白,具有周期依赖性表达模式,特异性抑制Ｇ１ＣＤＫ４／６的激酶活性。同时也参与一些组织的终末分化过程,在细胞增殖周期与分化调控方法发挥偶联作用。     

CIP—KIP细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子家族

细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子（ＣＫＩ）是细胞周期调控网络的主要成员之一,在周期调控中具有重要的地位,ＣＩＰ－ＣＫＩ两个家族之一,与细胞生长分化和肿瘤发生方面有极其重要的关系。本文对ＣＩＰ－ＫＩＰ家族的细胞周期调控,基因敲除以及促ＣＤＫ／ＣｙｃｌｉｎＤ装配功能的最新进展进行综述。     

细胞周期抑制蛋白Kip及Ink4研究进展

真核细胞的细胞周期由细胞周期素依次激活相应的Ｃｄｋ所推动,细胞能否通过限制点从Ｇ１期进入Ｓ期很大程度上取决于Ｇ１期细胞内ＣｙｅｌｉｎＤ１／ＣｙｃｌｉｎＥ／ＣｙｃｌｉｎＡ的积累,Ｃｄｋ４／Ｃｄｋ６／Ｃｄｋ２,Ｋｉｐ的化学剂量关系及Ｉｎｋ４的活ｉｐ和Ｉｎｋ４是目前已知的两类结构不同、作用方式也不尽相同的细胞周期抑制蛋白;Ｋｉｐ主要以化学剂量方式,一方面抑制与ＤＮＡ复制相关的蛋白质的ｍＲＮＡ的转录;另一     

微波修复抗原和微波酶消化法同时应用在P16和CyclinD1免疫组织化学方法中的体会

Ｐ１６蛋白和ＣｙｃｌｉｎＤ１是两种常用的抗细胞周期调控因子抗体,Ｐ１６是多种肿瘤抑制基因的表达产物,ＣｙｃｌｉｎＤ１是一种癌基因产物,在肿瘤病理学研究中选用Ｐ１６和ＣｙｃｌｉｎＤ１等作为相反的抗体是十分有意义的［１］。为提高这两种抗体在石蜡包埋切片中的阳性检出率,我们在实验操作中同时应用了微波抗原修复法和微波胰蛋白酶消化法,获得了较为满意的结果,现报道如下：１　材料和方法１１　材料：选取本科手术切除大肠腺癌标本存档蜡块４０例,每例均切６张４μｍ切片备用,切片裱于涂有防脱片剂的干净载玻片上。１…     

p16抑癌基因定点突变及其在大肠杆菌中的表达与纯化

为了研究错义突变对ｐ１６功能的影响,应用ＰＣＲ体外定点突变方法对ｐ１６ｃＤＮＡ进行体外定点突变,并将野生型和突变型ｐ１６ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＸ－５Ｔ载体,在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹鉴定确证表达．而后用谷胱甘肽－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化野生型和突变型ｐ１６融合蛋白．得到了第４８位密码子ＣＣＧ（Ｐｒｏ）→ＣＴＧ（Ｌｅｕ）突变的ｐ１６－Ｐ４８突变体,并在大肠杆菌中表达了４２ｋＤ的ＧＳＴ－ｐ１６和ＧＳＴ－ｐ１６Ｐ４８Ｌ融合蛋白．最后经纯化得到了野生和Ｐ４８Ｌ突变的ｐ１６融合蛋白     

与细胞周期G1→S调控点相关的几个重要元件及其与肿瘤的关系

在哺乳动物细胞周期调控中,Ｇ１→Ｓ期之间的调控点是细胞内外信号经传递、整合汇集到细胞核,对细胞的增殖进行调控的关键点,该点调控的异常与肿瘤的发生、发展关系密切。在相关的因子中,Ｒｈ、ｃｙｃｌｉｎＤ、ＣＤｋ４／６和Ｐ１６组成调控途径研究比较明确,目前被认为与Ｇ１→Ｓ调控点关系最密切,本文综述了Ｒｂ、ｃｃｌｉｎＤ１和Ｐ１６的异常与某些肿瘤发生的关系;并初步探讨了这些成分的异常与肿瘤发展的特定阶段和特定     

构建来自宫颈癌并带有突变及缺失LCR的HPV16重组体

为研究ＨＰＶ１６转录调节蛋白ＹＹ１结合位点改变对病毒致癌性的影响,以ＨＰＶ１６野毒株质粒ｐ１２０３为基础,经多次克隆,将来自宫颈癌组织并带有缺损突变的ＬＣＲ重组到地ＨＰＶ１６基因组中。核酸序列分析证实,质粒ｐＤＶ３９０在第２个ＹＹ１位点上有一Ｇ→Ａ点穷变,质粒ｐＤＶ３２６和ｐＤＶ４０１分别带有１１５ｂｐ和１４３ｂｐ的缺失突变,从而涉及２和４个ＹＹ１结合位点,重组质粒其它核苷酸序列与ＨＰＶ１６标准序列一致。这些重组质粒的组建为进一步研究ＹＹ１蛋白对ＨＰＶ１６致癌基因表达的调控及ＨＰＶ１６致癌作用的影响打下基础。     

SMAD4在嗜甲醇酵母中的表达及鉴定

Ｓｍａｄ４是新近发现的一种肿瘤抑制基因。在５０％的胰腺癌和３０％的结肠癌中,此基因发生突变或缺失。利用Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母表达系统,以胞外分泌的方法表达了ＳＭＡＤ４蛋白,并对ＳＭＡＤ４蛋白的生化性质进行了分析。结果显示表达蛋白的分子量约６７ｋＤ,经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹鉴定,与ＳＭＡＤ４抗全有特异的结合反应,Ｎ末端１３个氨基酸的序列与Ｓｍａｄ４ ｃＤＮＡ推断的序列完全一致。     

抑癌基因DPC4

抑癌基因ＤＰＣ４李贵新张玲（山东省医学科学院基础医学研究所,济南２５００６２）关键词胰腺癌抑癌基因ＤＰＣ４人类肿瘤的发生通常是由原癌基因和抑癌基因的改变而获得生长优势的细胞群体引起的。研究较多的抑癌基因有Ｒｂ、ＷＴ１、ＮＦ１、ｐ５３、ｐ１６和ＤＣＣ等...     

基因免疫和蛋白免疫制备抗P16抗血清

蛋白免疫,是传统的抗体制备法,基因免疫是新型的抗体制备法。为了制备抗这Ｐ１６抗血甭以及比较基因免疫和蛋白免疫制备抗体,分别以融合谷胱甘肽２－转移酶－Ｐ１６５和克隆有ｐ１６肿瘤抑制基因相关ｃＤＮＡ的裸露真核表达载体ｐＣＭＶ－ｐ１６经皮内多点注射接种家兔,制备抗Ｐ１６抗血清,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测到蛋白免疫的抗Ｐ１６抗血清滴度为１：６２５,明显高于基因免疫制备的Ｐ１６抗血清滴度。     

猪生长激素基因在杆状病毒载体系统中的表达

通过对猪生长激素（ｐＧＨ）基因的ｃＤＮＡ进行测序,得到ｐＧＨｃＤＮＡ的全序列,并与Ｓｅｅｂｕｒｇ等报道的序列进行了比较和讨论。然后利用具人工合成启动子和多角体蛋白ＸＩＶ启动子的转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３／４构建出含ｐＧＨ基因的重组质粒ｐＸ３／４－ｐＧＨ。将ｐＸ３／４－ｐＧＨ与致死缺失型线性化ＡｃＭＮＰＶ－ＯＣＣ＾－ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞,构建出既能形成多角体又能表达ｐＧＨ基因的苜蓿丫纹夜蛾     

蛇毒蛋白Echistatin的C端突变基因的构建，表达及其活性研究

通过ＰＣＲ定点突变的技术,将蛇毒蛋白Ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ基因的Ｃ端进行了突变（Ａｌａ４８→Ａｒｇ４８→,Ｔｈｒ４９→Ｖａｌ４９）,模拟纤维蛋白Ｎ端的四肽（Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｖａｌ）,以期增加Ｅｃｓ（Ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ）的活性。突变的基因重组到表达质粒ｐＪＣ２６４上,经ＩＰＴＧ诱导,以ＣｈｅＹ－Ｅｃｓ融合蛋白方式进行了表达,表达量占菌体总蛋白的１５～２０％。ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５初步纯化该融合蛋白,然后用ＣＮＢｒ裂解,透析,冻干,反相ＨＰＬＣ纯化Ｃ端突变体Ｅｃｓ蛇毒蛋白,Ｎ端十个氨基酸分析与天然的相符,在ＰＲＰ（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｒｉｃｈｐｌａｓｍａ）测活体系中,１０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＤＰ诱导,Ｃ端突变体Ｅｃｓ抑制血小板凝聚的活性约为野生型４倍。得到了Ｅｃｓ的Ｃ端突变后使Ｅｃｓ抑制血小板凝聚的活性提高的结果。     

叶绿素缺失和异养生长对蓝藻Synechocystis sp.PCC 6803藻胆蛋白含量的影响

通过遮黑培养缺失ｆｒｘＣ基因的蓝藻Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓｓｐ．ＰＣＣ６８０３突变工程株,获得了叶绿素缺失的藻细胞,吸收光谱测定及数学计算表明,藻细胞中叶绿素缺失后藻胆蛋白含量增加,藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白含量分别为相同条件下野生株对照组的４倍和６倍。野生株遮黑培养时,细胞进行异养生长,藻胆蛋白含量下降,藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白含量分别为光照培养条件下自养生长的野生株细胞的３４．５％和２５３％。另外,缺失ａｐｃＥ基因的突变工程株细胞的藻胆蛋白含量也少于对照野生株,表明ａｐｃＥ基因的编码蛋白ＬＣＭ与藻胆蛋白的含量相关。     

神经酰胺：细胞凋亡信号转号的第二信使分子

神经酰胺是细胞凋亡信号调控中的一个第二信使因子,许多应激刺激能激活神经鞘磷脂循环产生神经酰胺诱导多种细胞体系发生凋亡。神经酰胺介导细胞凋亡的机理尚未完全明了,可能是通过多个下游靶分子包括ＣＡＰＫ,ＣＡＫＫ,ＰＫＣ,ＳＡＰＫ／ＪＮＫ,ＣＰＰ３２,Ｂｃｌ－２以及Ｒａｓ－ＲａｃｌＪＮＫ／ｐ３８－Ｋ→ＧＡＤＤ１５３信号传导链等作用于不同的信号转导途径而诱导细胞凋亡的。     

p^19ARF：INK4α编码的另一种细胞周期蛋白

ＩＮＫ４α的重叠编码框架编码产生出两个不同的蛋白ｐ１６＾ＩＮＫ４ａ和ｐ＾１９ＡＲＦ。ｐ１９＾ＡＲＦ在最近的研究中表明有细胞周期阻滞作用，它发挥作用时依赖于ｐ５３。     

周期蛋白依赖激酶抑制因子p21Cip1的研究进展

ｐ２１Ｃｉｐ１是广泛的ＣＤＫ－ｃｙｃｌｉｎ抑制因子。它的表达受ｐ５３的正调控,也可不依赖于ｐ５３。它与ＰＣＮＡ结合抑制ＤＮＡ的复制,同时又允许ＤＮＡ损伤的切除修复。近两年的研究还表明它与细胞分化密切相关,但它与癌症的相关性并不确定。     

细胞周期调控基因——p21^CIP1／WAF1

Ｐ２１＾ＣＩＰ１／ＷＡＦ１基因编码的产物是一种细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制蛋白。它通过调控细胞周期的进程,参与细胞的生长,衰老及死亡。在细胞ＤＮＡ损伤反应及肿瘤的发生、发展中也占且席之地。本文对Ｐ２１基因的发现,基因及蛋白南结构、生物化学特性、生物学特性以及研究前景概述。     

伪狂犬病病毒Fa株胸苷激酶基因缺失株的构建

采用外切除缺失法对已克隆于ｐＢＲ３２２中包含伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）胸苷激酶（ＴＫ）基因的ＢａｍＨＩ－１１片段（ｐＰＢ１１）进行改建,经筛选获得４株ＴＫ基因缺失重组质粒（ｐＤＴＫ３－１．ｐＤＴＫ３－６,ｐｄＴＫ３－８和ｐＤＴＫ５－６）对其进行酶切鉴定和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交,结果其１１片段迁移率均发生改变,缺失的碱基数分别约１２５０,１１００,１２５０和２００ｂｐ,用ＰＲＶＦａ－ＤＮＡ或ＰＲＶＦａ