p16抑癌基因和肿瘤

ｐ１６基因（又名ＭＴＳ１,多肿瘤抑制基因）所编码的蛋白是细胞周期蛋白Ｄ／ＣＤＫ激酶的抑制蛋白,在细胞周期的调控中起着重要作用,能和ＣＤＫ４结合,抑制ＣＤＫ４／ｃｙｃｌｉｎＤ复合物的催化活性。当ｐ１６基因发生突变和缺失,就会丧失对细胞分裂的调控,导致细胞的异常增殖,最终形成肿瘤。研究表明：ｐ１６基因的突变和缺失,和许多肿瘤的发生有关。ｐ１６基因是一种新的肿瘤抑制基因。     

与细胞周期G1→S调控点相关的几个重要元件及其与肿瘤的关系

在哺乳动物细胞周期调控中,Ｇ１→Ｓ期之间的调控点是细胞内外信号经传递、整合汇集到细胞核,对细胞的增殖进行调控的关键点,该点调控的异常与肿瘤的发生、发展关系密切。在相关的因子中,Ｒｈ、ｃｙｃｌｉｎＤ、ＣＤｋ４／６和Ｐ１６组成调控途径研究比较明确,目前被认为与Ｇ１→Ｓ调控点关系最密切,本文综述了Ｒｂ、ｃｃｌｉｎＤ１和Ｐ１６的异常与某些肿瘤发生的关系;并初步探讨了这些成分的异常与肿瘤发展的特定阶段和特定     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞细胞周期蛋白D_1基因表达的影响

动脉平滑肌细胞（ｓｍ ｏｏｔｈ ｍ ｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）斑块中的主要细胞,它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要．利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ,Ｎ－ＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ＨＤＬ,ＯＸ－ＨＤＬ）对培养人主动脉ＳＭＣ ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１（细胞周期蛋白Ｄ１）基因转录表达的影响．结果表明：（１）Ｎ－ＨＤＬ对ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达无影响（Ｐ＞ ０．０５）;（２）ＯＸ－ＨＤＬ使ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达显著增强（Ｐ＜０．０１）,其表达量随时间（２、１２、２４ ｈ）延长而增加．上述结果表明,ＯＸ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与其刺激ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达增加有关．     

细胞周期蛋白（cyclin）D在鼻咽癌中的表达及功能初？…

探讨了细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ在ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）潜伏膜蛋白１（ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＭＰ１）阳性和阴性表达的鼻咽癌细胞５系中的表达特征,利用流式细胞仪同时从ＤＮＡ及蛋白质水平初步分析了ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１在鼻咽癌细胞系中的功能。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹的结果发现ｃｙｃｌｉｎｈ Ｄ１在ＣＮＥ－ＬＭＰ１中过表达,在ＨＮＥ１中表达较弱;Ｃｙｃｌｉ     

蛋白质的磷酸化作用和泛肽化降解作用与芽殖酵母细胞周期的调控

在芽殖酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）细胞中，Ｇ１期的三种ｃｙｃｌｉｎｓ和Ｓ、Ｍ期的五种ｃｙｃｌｉｎｓ之周期性的合成和分解调节着Ｃｄｃ２８的活性，驱动细胞周期的正常运转。除了ＣＤＫ的磷酸化作用外，蛋白质的泛肽化降解作用间接或直接调控细胞周期：ＣＤＣ３４泛肽化途径通过降解Ｃｄｃ２８的专一抑制子而起始ＤＮＡ复制；ＡＰＣ泛肽化途径通过降解Ｍ期后期的抑制子和Ｍ期ｃｙｃｌｉｎｓ，使姐妹染色体分离和Ｍ期终止。     

p16基因的功能及与肿瘤的关系

ｐ１６基因是新近发现的一种肿瘤抑制基因,它的编码蛋白是Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ／ｃｄｋ４激酶的特异性抑制剂,通过抑制细胞周期进程而抑制细胞增殖。ｐ１６基因在多种肿瘤中有高频率的纯合缺失和点突变,使之成为继ｐ５３之后肿瘤基础及临床研究中又一热点之一。     

基因免疫和蛋白免疫制备抗P16抗血清

蛋白免疫,是传统的抗体制备法,基因免疫是新型的抗体制备法。为了制备抗这Ｐ１６抗血甭以及比较基因免疫和蛋白免疫制备抗体,分别以融合谷胱甘肽２－转移酶－Ｐ１６５和克隆有ｐ１６肿瘤抑制基因相关ｃＤＮＡ的裸露真核表达载体ｐＣＭＶ－ｐ１６经皮内多点注射接种家兔,制备抗Ｐ１６抗血清,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测到蛋白免疫的抗Ｐ１６抗血清滴度为１：６２５,明显高于基因免疫制备的Ｐ１６抗血清滴度。     

细胞周期抑制蛋白Kip及Ink4研究进展

真核细胞的细胞周期由细胞周期素依次激活相应的Ｃｄｋ所推动,细胞能否通过限制点从Ｇ１期进入Ｓ期很大程度上取决于Ｇ１期细胞内ＣｙｅｌｉｎＤ１／ＣｙｃｌｉｎＥ／ＣｙｃｌｉｎＡ的积累,Ｃｄｋ４／Ｃｄｋ６／Ｃｄｋ２,Ｋｉｐ的化学剂量关系及Ｉｎｋ４的活ｉｐ和Ｉｎｋ４是目前已知的两类结构不同、作用方式也不尽相同的细胞周期抑制蛋白;Ｋｉｐ主要以化学剂量方式,一方面抑制与ＤＮＡ复制相关的蛋白质的ｍＲＮＡ的转录;另一     

微波在免疫组化双重染色的抗体洗脱中的应用

本文介绍一种新技术──微波加强抗体洗脱法。在酸洗脱液中微波辐射（最低能量档）３分钟．完全除去经ＰＡＰ法染色后的垂体前叶切片上的抗体复合物;双重染色显示两种形态和颜色不同的细胞。切片在Ｔｒｉｓ缓冲盐液中微波辐射３分钟,或分别浸入室温和约５０℃的酸洗脱液中２小时和３分钟,抗体复合物不能被洗脱,或洗脱不完全;双重染色时出现假性双标记细胞。结果表明微波具有加强抗体洗脱的作用,是一种快速、有效的除去免疫酶双重染色中抗体复合物的方法。     

酵母PHO85结合蛋白PAP1基因的克隆和表达

酵母调探因了ＰＨＯ８５是一个依赖于细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）的蛋白酶（ＣＤＫ）,参与对细胞周期和酸性磷酸酯酶基因表达的调控。冯ＰＨＯ８５为靶分子,利用酵母的染色体基因文库中克隆到了一个新的与ＰＨＯ８５相结合的蛋白因子的基因,利用酵母双杂交（ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ）系统从酵母的染色体基因文加中克隆到了一个新的与ＰＨＯ８５相结合的蛋白因子的基因,将此蛋白质命名为ＰＡＰ１（ＰＨＯ８５ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ     

CIP—KIP细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子家族

细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子（ＣＫＩ）是细胞周期调控网络的主要成员之一,在周期调控中具有重要的地位,ＣＩＰ－ＣＫＩ两个家族之一,与细胞生长分化和肿瘤发生方面有极其重要的关系。本文对ＣＩＰ－ＫＩＰ家族的细胞周期调控,基因敲除以及促ＣＤＫ／ＣｙｃｌｉｎＤ装配功能的最新进展进行综述。     

柱孢菌细胞色素P－450nor2cDNA克隆与表达

在真菌的反硝化作用中,一种独特的细胞色素Ｐ－４５０起着一氧化氮还原酶（Ｐ－４５０ｎｏｒ）的作用。用ｇｔｌｌ构建了柱孢菌（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎｔｏｎｌｅｉｎｅｎｓｅ）ｃＤＮＡ文库。纯化的柱孢菌Ｃ。Ｐ－４５０ｎｏｒ２免疫兔,制备抗体。并用抗体筛选出阳性克隆。回收插入片段（Ｐ－４５０ｎｏｒ２ｃＤＮＡ）克隆到表达载体ｐＹＥＳ２中,并在酵母系统中表达。经Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ分析验证,表达产物能与抗体反应产生特异性杂交带。酶分析结果表明：表达产物具有一氧化氮还原酶细胞包素Ｐ－４５０ｎｏｒ２的活性,能以ＮＡＤＨ或ＮＡＤＰＨ为供体,使ＮＯ还原先成Ｎ２Ｏ。     

RAPD应用于遗传多样性和系统学研究中的问题

在研究银杉（Ｃａｔｈａｙａ ａｒｇｙｒｏｐｈｙｌｌａ）的遗传多样性时,对ＲＡＰＤ 产物的影响因素进行了大量的实验探索,结果表明：逐级纯化的ＤＮＡ 模板的ＲＡＰＤ结果一致, 因而模板制备过程中的很多纯化步骤是不必要的; ＲＮＡ 对扩增产物无影响; 模板浓度在一个相当大的范围内不影响扩增结果; 从干叶和鲜叶中提取的ＤＮＡ 可获得一致的扩增产物; 从而证明ＲＡＰＤ 产物具有很好的重复性。进而讨论了ＲＡＰＤ产物分析及数据分析中的一些问题。通过对升麻属（Ｃｉｍ ｉｃｉｆｕｇａ） ５ 种、类叶升麻（Ａｃｔａｅａ ａｓｉａｔｉｃａ）及松潘乌头（Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｓｕｎｇｐａｎｅｎｓｅ）的ＲＡＰＤ 结果分析,认为ＲＡＰＤ 方法可用于种间乃至近缘属间的系统学研究, 但有一定的局限性     

周期蛋白依赖激酶抑制因子p21Cip1的研究进展

ｐ２１Ｃｉｐ１是广泛的ＣＤＫ－ｃｙｃｌｉｎ抑制因子。它的表达受ｐ５３的正调控,也可不依赖于ｐ５３。它与ＰＣＮＡ结合抑制ＤＮＡ的复制,同时又允许ＤＮＡ损伤的切除修复。近两年的研究还表明它与细胞分化密切相关,但它与癌症的相关性并不确定。     

CD15抗原高表达的免疫组织化学检测方法探讨

ＣＤ１５抗原是位于细胞表面的一种糖蛋白。越来越多的研究证实,ＣＤ１５表达与许多恶性肿瘤的发生发展、侵袭转移密切相关,被视为肿瘤预后不良的一种标志。常规免疫组织化学方法检测ＣＤ１５抗原表达,常因非特异性背景染色、阳性产物表达甚弱,影响结果正确判断。对此,我们在提高ＣＤ１５抗原检测方法上作了探讨,取得良好效果。材料和方法１．材料：标本取１０％甲醛固定的胃癌、肠癌、乳腺癌、肺癌、肾癌、胆囊癌、前列腺癌及子宫内膜癌等各种肿瘤组织,常规脱水处理及石蜡切片厚４μｍ。２．试剂与器械：鼠抗ＣＤ１５单克隆抗体和Ｓ…     

在正常细胞中导入端粒酶可使c-myc过表达,出现癌变危险

人乳腺上皮细胞 (ＨＭＥＣ)在通常情况下可分裂至ＰＤ(群体倍增次数 ) 5 5～ 6 0 ,ＷａｎｇＪ等(2 0 0 0 )将含有人ＴＥＲＴ(端粒酶催化亚单位的ｃＤＮＡ)的逆转录病毒导入ＰＤ40的ＨＭＥＣ ,使其可分裂代数延长到ＰＤ2 5 0。他们在延至ＰＤ1 5 0时用Ｃｒｅ重组酶 (ｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅ)切除基因组中该逆转录病毒重组体 ,且以Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法验证其确已切除后 ,却发现切除外源性ＴＥＲＴ的细胞仍有较高的端粒酶活性 (野生型对照未测出活性 ) ,细胞长势不减 ,至少可再长 2 0ＰＤ。由于ｈＴＥＲＴ基因是ｃ Ｍｙｃ的靶基因 ,ｃ Ｍｙ…     

猪瘟病毒石门株与兔化弱毒株gp55基因的克隆与序列分析

猪瘟病毒石门系强毒株及兔化弱毒疫苗株（ＨＣＬＶ株）是我国的标准毒株,囊膜糖蛋白ｇｐ５５（又称Ｅ１）是该病毒最重要的保护性抗原。本实验采用反转录ＰＣＲ扩增了这两个毒株的ｇｐ５５基因。序列分析结果表明：１．石门株和兔化弱毒株糖蛋白Ｅ１的氨基酸序列含有１５个半胱氨酸残基（Ｃｙｓ）,其数量及位置与国外４株猪瘟病毒（Ａｌｆｏｒｔ、Ｂｒｅｓｃｉａ、ＡＬＤ和ＧＰＥ＾－）完全一样。Ｅ１中Ｃｙｓ的数量及位置的保守性     

王不留行环肽研究

从中药王不留行（Ｖａｃａｒｉａｓｅｇｅｔａｌｉｓ）种子中分离并鉴定了４个环肽化合物,分别命名为王不留行环肽Ａ,Ｂ,Ｃ,Ｄ（ｖａｃｃａｒｉｎｓＡ,Ｂ,Ｃ,Ｄ）,其中王不留行环肽Ａ为新环肽化合物。其结构通过光谱和化学方法分别确定为：ｖａｃｃａｒｉｎＡ——ｃｙｃｌｏ－（Ｔｒｐ－Ａｌａ１－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ａｌａ２）,ｖａｃｃａｒｉｎＢ———ｃｙｃｌｏ－（Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ１－Ａｌａ－Ｐｈｅ２）,ｖａｃｃａｒｉｎＣ———ｃｙｃｌｏ－（Ｐｒｏ１－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ２－Ｌｅｕ－Ｔｒｐ）,ｖａｃａｒｉｎＤ———ｃｙｃｌｏ－（Ｐｒｏ－Ｖａｌ１－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ２）．     

高及低转移潜能小鼠肝癌细胞株糖蛋白凝集素结合特征的研究

为探讨肿瘤转移与细胞表面的糖结构的关系,对小鼠肝癌细胞的高、低淋巴道转移株Ｈｃａ－Ｆ和Ｈｃａ－Ｐ进行了蛋白质电泳及经蛋白质印迹术后的５种凝集素（ＣｏｎＡ、ＷＧＡ、ＵＥＡ、ＳＢＡ、ＰＮＡ）结合糖蛋白谱的对比分析．结果表明：高、低转移两株细胞的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ谱基本相同;ＣｏｎＡ特异结合糖蛋白共有５种（～７２,８０～９０,～１０４,～１５０,～２００ｋＤ）;其中较明显的差异为～７２ｋＤＣｏｎＡ特异结合糖蛋白,它在Ｈｃａ－Ｐ细胞的表达明显高于Ｈｃａ－Ｆ细胞．ＷＧＡ特异结合糖蛋白１种（～１５０ｋＤ）,在Ｈｃａ－Ｐ细胞的表达略高于Ｈｃａ－Ｆ细胞．此外,实验发现两种性质未明的蛋白质（～７９,～１３０ｋＤ）,后者在Ｈｃａ－Ｐ细胞的含量明显高于Ｈｃａ－Ｐ细胞．结果提示Ｈｃａ－Ｆ和Ｈｃａ－Ｐ细胞不同的转移表型可能与其糖蛋白的表达有一定的关联．     

标记抗体染色病毒空斑计数技术的研究

用细胞病变阳性（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｅｆｆｅｃｔ,ＣＰＥ＋ ）病毒马立克氏病毒（Ｍａｒｅｋ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ, ＭＤＶ）血清１,２,３ 型以及细胞病变阴性（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｅｆｆｅｃｔ,ＣＰＥ－ ）病毒猪瘟病毒（Ｈｏｇ ｃｈｏｌｅｒａ ｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）强毒与弱毒和鸡新城疫病毒（Ｎｅｗ ｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ． ＮＤＶ）Ｌａｓｏｔａ 毒株及其对应的异硫氢酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记的特异抗体为试验材料,以免疫荧光抗体技术（ＦＡ）为基础、并加以改进,建立了标记抗体染色病毒空斑计数技术． 该技术不仅能克服常规病毒空斑计数技术不能计数细胞病变阴性病毒和一种样品含有两种或两种以上病毒的各自空斑数的缺点,能迅速准确计数出ＣＰＥ－ 病毒和多病毒样品中病毒各自空斑数及其空斑总数,具较高敏感性、良好的可重复性．