桦褐孔菌菌质多糖的制备及其对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

为研究桦褐孔菌菌质多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用水提醇沉法提取粗多糖,Sevag法脱蛋白后透析,再经DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱进一步分离纯化,MTT法检测不同浓度的桦褐孔菌菌质多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。试验结果得到3个多糖纯化组分JZP1、JZP2、JZP3;粗多糖(JZPC)、精制多糖(JZPJ)和纯化多糖(JZP3),能够促进淋巴细胞增殖,最大增殖率分别为59.04%(1 000μg/m L),44.58%(20μg/m L),39.76%(20μg/m L)。JZP1和JZP2在1 000μg/m L时抑制淋巴细胞增殖,抑制率分别15.66%和13.25%。结果表明相同浓度下粗多糖对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用强于纯化多糖,不同多糖组分表现出不同的免疫学活性,并且其免疫活性与其浓度密切相关。     

细虫草胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能研究

本实验在体外条件下,以人工发酵培养的细虫草胞外多糖OgE、OgE-F1和OgE-F2作用于小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7,通过测定其对巨噬细胞的增殖率、代谢MTT活力、NO分泌和吞噬能力的影响,评价细虫草胞外多糖的免疫调节活性。结果表明,细虫草多糖对巨噬细胞无细胞毒性,且能促进巨噬细胞代谢MTT活力;在0.2mg/mL^1.0mg/mL浓度范围内,多糖呈剂量依赖性的促进巨噬细胞分泌NO水平和吞噬能力。本研究表明,细虫草多糖能有效地增强小鼠巨噬细胞的活性,潜在地可改善小鼠的先天性免疫调节。     

龙须菜免疫活性多糖的分离纯化及结构鉴定

利用小鼠淋巴细胞增殖模型,筛选龙须菜中具有免疫活性的多糖,并对其结构进行鉴定。活性筛选与分离纯化相结合,经室温提取,DEAE-Sepharose F.F.离子柱和凝胶Sephacryl S500层析,分离纯化得到具有刺激小鼠脾淋巴细胞增殖活性的龙须菜多糖GCpF2-3B。免疫实验表明,GCpF2-3B在较低浓度10μg/mL就表现出刺激作用(增殖率135%),当浓度为50μg/mL时增殖率达到最高(195%)。高效渗透色谱HPSEC层析纯度鉴定和紫外扫描表明GCpF2-3B为均一多糖,分子量约为1.03×105Da。红外光谱扫描显示,GCpF2-3B为典型的含硫酸基团多糖,具有糖类特征峰和总硫酸基吸收峰;13C NMR谱显示GCpF2-3B主要由交替相连的(1→3)-β-D-半乳糖和(1→4)-α-L-3,6-内醚半乳糖重复二糖组成。     

植物乳杆菌JLK0142胞外多糖对RAW264.7巨噬细胞和免疫抑制小鼠的免疫调节作用

【目的】研究植物乳杆菌JLK0142胞外多糖(EPS)对RAW264.7巨噬细胞和免疫抑制小鼠免疫活性的影响。【方法】从植物乳杆菌JLK0142培养液中分离纯化EPS,采用体外细胞培养,测定EPS对巨噬细胞增殖、吞噬活性和一氧化氮(NO)分泌的影响;采用环磷酰胺构建免疫抑制小鼠模型,灌胃不同剂量的EPS,分别测定小鼠脾脏指数、T淋巴细胞增殖活力及血清中IL-2和TNF-α水平。【结果】植物乳杆菌JLK0142胞外多糖在50–800μg/m L浓度范围内能促进正常状态RAW264.7巨噬细胞的增殖,显著提高巨噬细胞的吞噬活性及NO的分泌量;与模型组相比,EPS中、高剂量组小鼠脾脏指数和T淋巴细胞增殖活力显著提高;EPS高剂量组小鼠血清中IL-2和TNF-α含量显著提高。【结论】植物乳杆菌JLK0142胞外多糖能有效提高RAW264.7巨噬细胞的免疫活力,并拮抗环磷酰胺对小鼠免疫功能的抑制作用。     

免疫活性地龙肽的制备及其对小鼠巨噬细胞活性的影响

分离纯化免疫活性地龙肽并研究其对小鼠巨噬细胞活性的影响.通过抽提、离心、超滤及色谱等步骤提取小分子量免疫活性地龙肽;通过体外实验测定其对巨噬细胞吞噬活性的影响.结果表明,一定浓度的3种免疫活性地龙肽在体外均可明显增强小鼠巨噬细胞的吞噬活性,提示其具有免疫调节功能.     

尖顶羊肚菌胞外多糖提取物对皮肤成纤维细胞增殖和衰老的影响

不同浓度尖顶羊肚菌胞外多糖提取物作用人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）,检测对HSF细胞形态、细胞增殖、衰老相关β-半乳糖苷酶活性、羟脯氨酸含量的影响,探究尖顶羊肚菌胞外多糖提取物对HSF增殖和衰老的影响。结果显示,125μg/mL尖顶羊肚菌胞外多糖提取物使HSF细胞活力增加了25.2%,羟脯氨酸含量增加了12.1%,β-半乳糖苷酶活性降低了48.1%。说明适宜浓度尖顶羊肚菌胞外多糖提取物具有促进HSF细胞增殖、胶原蛋白合成,延缓细胞衰老的作用。     

恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7体外免疫调节作用初探

初步探讨恰麻古粗多糖BRP、中性多糖BRNP-1、BRNP-2及酸性多糖BRAP-1、BRAP-2对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。实验方法选用CCK-8法检测不同质量浓度各恰麻古多糖组对巨噬细胞RAW264.7细胞增殖率的影响;以中性红法观察各组恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的影响;Griess法测定恰麻古多糖致巨噬细胞RAW264.7对NO的释放水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测细胞因子TNF-α(肿瘤坏死因子)与IL-6(白介素-6)分泌水平。实验结果显示不同质量浓度各恰麻古多糖组能够显著提高巨噬细胞RAW264.7增殖率与对中性红的吞噬活性,并能够刺激巨噬细胞释放NO,且促进其TNF-α及IL-6分泌水平。通过实验,初步验证了各恰麻古多糖具有良好的生物活性,并对巨噬细胞RAW264.7具有免疫调节作用。     

松子壳多糖对小鼠主要免疫细胞功能的影响

目的探讨松子壳多糖（pine nut shell polysaccharide,PSP）对小鼠主要免疫细胞的影响。方法应用MTT法测定PSP对小鼠脾淋巴细胞的毒性和对ConA或LPS诱生小鼠脾T、B淋巴细胞的转化,用中性红吞噬试验测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能,应用乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞的杀伤活性。结果 PSP对脾细胞毒性很低,各种浓度对小鼠脾淋巴细胞的增殖均有较强的促进作用（P〈0.01）;PSP在浓度50～300μg/mL时,明显促进T淋巴细胞的转化（P〈0.01）,但是当浓度达到300μg/mL时表现出一定的抑制作用（P〉0.05）;PSP在25～200μg/mL时显著促进了小鼠脾B淋巴细胞的转化（P〈0.05）,但是当浓度达到300μg/mL时,抑制作用极显著（P〈0.01）;不同浓度均可以增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力及其代谢功能,当浓度在100μg/mL时能显著的促进巨噬细胞吞噬中性红的能力（P〈0.01）;PSP在浓度100～300μg/mL时,能极显著的促进NK细胞对Yac-1的杀伤作用（P〈0.01）,当浓度达到400μg/mL,对NK细胞杀伤性的促进作用开始减弱。结论 PSP对小鼠脾淋巴细胞的毒性较低,能增强免疫细胞活性,有望成为新一代免疫调节剂。     

分级醇沉对罗勒多糖体外抑菌及免疫活性影响研究

目的：研究罗勒30%、50%、80%醇沉多糖对体外抗菌及免疫活性的影响,确定罗勒多糖的有效部位。方法：水提醇沉制备罗勒粗多糖,将罗勒粗多糖3次醇沉后去蛋白得精多糖,再分级醇沉得到30%、50%、80%醇沉多糖,最终测定其体外抗菌及免疫活性。结果：30%醇沉多糖具有最佳的抑菌效果和最高的刺激巨噬细胞增殖能力;50%醇沉多糖促进脾脏细胞增殖作用最为显著。结论：不同浓度的醇沉罗勒多糖抑菌和刺激免疫细胞增殖活性有显著差异。     

海滨锦葵块根皂苷及多糖的分离、纯化及对细胞增殖活性的影响

本文报道了海滨锦葵块根中皂苷及多糖的分离、纯化方法,以及皂苷的体外抑制肿瘤细胞增殖活性、多糖的免疫活性的检测.采用超声波法对块根中的皂苷和多糖进行粗提;通过大孔树脂柱层析法对得到的皂苷粗提取物进行纯化;皂苷经酸解得到皂苷元部分;采用DEAE-纤维素柱层析对粗多糖溶液进行提纯.利用MTT比色法测定皂苷对肿瘤细胞HepS增殖的影响以及多糖对胸腺淋巴细胞、脾淋巴细胞增殖的影响.结果表明,海滨锦葵块根皂苷提取率为0.089％,粗多糖提取率为5.10％;海滨锦葵块根皂苷及皂苷元有抑制HepS增殖的作用,皂苷元效果更好;海滨锦葵块根多糖能显著促进淋巴细胞体外增殖,增强体液免疫力.     

毛尖茶叶多糖的提取分离及其活性测定

本研究对毛尖茶叶多糖结构分析与活性开展了研究。采用水提醇沉法提取毛尖茶叶粗多糖,经除蛋白后得到精制多糖(MP),以柱层析方法对MP进行多次分离纯化,得到一个均一组分毛尖茶叶多糖(Maojian Tea Polysaccharides,MTP)。采用1,1-二苯基–2–三硝基苯肼[1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH]自由基清除、小鼠免疫细胞RAW264.7增殖、吞噬能力和产生NO等试验方法对MTP的活性进行研究。结果显示MTP对浓度0.1 mmol/L DPPH自由基清除率为38.26%,对小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖、吞噬能力和产生NO的能力均具有促进作用,与空白对照组有显著性差异(P0.01),且质量浓度为500 mg/L时,活性最大。     

猫爪草多糖对小鼠腹腔巨噬细胞活力的调节作用

此次研究旨在探讨猫爪草多糖对体外培养的正常状态下的原代小鼠腹腔巨噬细胞活性的调节作用,以及小鼠腹腔巨噬细胞在体外培养条件下的活力变化情况。以原代培养的小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,设对照组(加入100μL DMEM培养基)和实验组(分别加入25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL, 200μg/mL,400μg/mL的猫爪草多糖),分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、CCK-8法、乳酸脱氢酶释放法和中性红吞噬实验检测不同浓度的猫爪草多糖对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞活力的调节作用;同时设置24 h、36 h、48 h、60 h和72 h的不同培养时间,观察在体外培养条件下,小鼠腹腔巨噬细胞活力的变化情况。结果表明:与对照组相比,不同浓度的猫爪草多糖均能增强小鼠腹腔巨噬细胞的活力,且猫爪草多糖浓度在100~400μg/mL的细胞活力极显著增强(p<0.01)。此外,各处理组的巨噬细胞在体外培养24~72 h不更换培养液的条件下,48 h处活性最佳。体外培养条件下,一定浓度的猫爪草多糖可以激活小鼠腹腔巨噬细胞,通过猫爪草多糖激活巨噬细胞,可能是猫爪草发挥提升机体免疫力的作用机制之一。此外,体外培养的巨噬细胞虽能存活长达一个月,但仍有一个最佳活力时间。     

甘草提取物的抑菌作用及其对小鼠免疫功能的影响

目的 研究甘草提取物的最低抑菌浓度及其对小鼠免疫功能的影响.方法 以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌为供试菌.结果 甘草提取物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度均为12 mg/mL.甘草提取物能提高小鼠的免疫功能,当甘草提取物浓度为100μg/mL时,与对照组相比,小鼠脾脏T淋巴细胞增殖率为(32.62±1.06)％,B淋巴细胞增殖率为(28.20±1.68)％;腹腔巨噬细胞的增殖率为(40.19 ±2.38)％;腹腔巨噬细胞吞噬能力提高(24.20 ±0.01)％;NK细胞杀伤活力提高(15.83 ±1.02)％;IL-1、IL-2的体外诱生增殖率分别为(12.34±0.72)％、(23.78±1.87)％.结论 甘草提取物能抑制大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的生长,且抑制作用呈剂量依赖性.     

蔓三七茎多糖理化性质及抗氧化和免疫调节研究

为提取蔓三七茎中的多糖及研究它的理化性质并评价其抗氧化、免疫调节活性,以蔓三七茎为原料,采用水提醇沉法获得蔓三七茎粗多糖(GPSCP),先测定了粗多糖的含量、糖醛酸含量、硫酸根含量、蛋白质含量。再采用Sevage试剂和透析法对蔓三七茎粗多糖进行纯化,得到蔓三七茎多糖(GPSP)。采用气相色谱法测定GPSP中单糖组分和红外光谱测定多糖的结构,通过总抗氧化能力、DPPH自由基、OH自由基的清除能力评价GPSP的体外抗氧化能力;通过体外实验评估GPSP对RAW264.7巨噬细胞免疫调节活性。结果表明,所得GPSCP的得率为15.56%,总糖含量为52.32%;GPSP的得率为8.67%,含量为78.54±2.13%;GPSP中单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为1.69∶4.64∶9.17∶1.00∶1.92∶4.85。体外抗氧化实验结果表明,GPSP具有良好的抗氧化能力,对总抗氧化能力、DPPH和OH自由基清除效果明显。GPSP可显著提高RAW264.7细胞内一氧化氮(NO)的浓度,在给药浓度为50.0μg/mL时,NO的分泌量达到最大,为39.28±3.25μmol/L,GPSP可以提高免疫力,在功能食品的开发中,可以作为一个潜在的免疫调节剂。     

条斑紫菜粗多糖对淋巴细胞和支持细胞的增殖作用

目的:探讨条斑紫菜粗多糖的一些生物学功能,包括促进淋巴细胞增殖以及促进支持细胞生长的功能。方法:将原代培养的大鼠和小鼠脾淋巴细胞以及大鼠睾丸支持细胞分别接种于96孔板中,将不同浓度的条斑紫菜粗多糖(0.05、0.5、5、10mg/mL)加入培养,每种浓度设6个复孔,并设对照组孔。采用四氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖率。结果:条斑紫菜粗多糖能够显著地促进大鼠、小鼠脾淋巴细胞和大鼠睾丸支持细胞的增殖,增殖率随多糖浓度的提高而升高;当多糖浓度为10mg/mL时,增殖率分别为137.3%、149%和454.5%。结论:条斑紫菜粗多糖具有提高免疫力及促进生殖功能的作用,其对睾丸支持细胞的增殖作用目前还未见报道。     

夏枯草多糖分离纯化、相关性质及药效

研究了夏枯草多糖的提取工艺、分离纯化、部分理化性质以及夏枯草多糖的免疫学活性。夏枯草经水提醇沉,去蛋白、脱色、凝胶柱色谱等步骤分离纯化得到夏枯草精多糖（Pure polysaccahrides of Spica prunellae,PPSP）。HPGPC法测其相对分子质量,红外光谱法对其结构进行初步分析,柱前对氨基苯甲酸衍生化HPLC法测其单糖组成。免疫学实验证明夏枯草精多糖单独作用或协同ConA均可显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖,夏枯草精多糖在200μg／mL质量浓度下对正常小鼠的廓清指数和吞噬指数有明显促进作用。     

金针菇子实体多糖分离纯化及结构和免疫活性研究

从金针菇子实体中分离纯化多糖,并对多糖结构和体外免疫活性进行研究。采用水提醇沉法从金针菇子实体中提取粗多糖,利用DEAE-Cellulose-52及Sephacryl S-300HR柱层析纯化得到FVPⅠ-a,再利用HPLC-ELSD技术、红外及核磁共振对FVPⅠ-a进行结构解析。在体外以促RAW264.7巨噬细胞产NO、分泌细胞因子,促进小鼠淋巴细胞增殖实验,考察FVPⅠ-a增强免疫的能力。从金针菇子实体中分离纯化得到FVPⅠ-a,其为分子量81.4kDa,由葡萄糖、果糖和鼠李糖组成的β构型的吡喃型杂多糖。体外免疫实验表明,FVPⅠ-a能够促进RAW264.7巨噬细胞产生NO及分泌细胞因子（IL-1β,IL-6,TNF-α）,能单独的促进小鼠淋巴细胞增殖（P<0.05）,并能协同增强ConA和LPS对小鼠淋巴细胞的促增殖作用（P<0.01,P<0.05）。首次从金针菇子实体中获得FVPⅠ-a杂多糖,其在体外具有增强非特异性免疫反应及增强特异性免疫反应的能力。     

肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的提取纯化及其对细胞免疫活性的影响

采用液体深层培养得肺炎克雷伯氏菌Kp9株发酵液,研究确立了菌体快速裂解条件:NP40 1%和胰蛋白酶25 0IUg菌体,50℃作用1h ,然后加入溶菌酶80μg/mL ,56℃作用1h ;裂解液经超滤浓缩和有机溶剂沉淀获得多糖粗品;多糖粗品先后经CTAB吸附分离,DEAE-SepharoseFastFlow离子交换和SephacrylS 30 0HR凝胶过滤纯化,得分子量分布相对均一的多糖纯品,产品得率为0.25 1g/L。采用淋巴细胞转化实验分别探讨了多糖粗品和纯品的免疫活性,研究显示荚膜多糖具有高效的体外细胞免疫活性,并具有典型的双向免疫调节作用。研究结论为肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的开发奠定了前期基础。     

橙盖鹅膏多糖(AC-1)体外免疫调节活性、细胞毒性和抗肿瘤活性的研究

为研究橙盖鹅膏多糖的体外免疫调节活性、细胞毒性和抗肿瘤活性,本研究运用细胞学技术探究AC-1对T细胞、B细胞和RAW264.7三种免疫细胞的体外免疫调节活性;研究AC-1对小鼠成纤维细胞(L929)的细胞毒性以及对小鼠胃癌细胞(MFC)、小鼠肉瘤细胞(S180)的体外抗肿瘤活性。结果表明,AC-1能在体外显著刺激三种免疫细胞的增殖及RAW264.7细胞的吞噬,表明AC-1在增强机体免疫方面具有重要作用,进一步研究发现AC-1主要通过显著促进IgE和IgG的分泌来增强体液免疫。在浓度为5~20μg/mL时AC-1对L929细胞无显著的促进及抑制作用,说明AC-1对正常细胞无毒性;在浓度为10~20μg/mL时AC-1能显著抑制小鼠胃癌细胞(MFC)的生长,但对小鼠肉瘤细胞(S180)的抑制效果较弱,说明AC-1在体外能够直接抑制肿瘤细胞的生长,但对不同的肿瘤细胞具有不同的抑制效果。综上所述,橙盖鹅膏多糖(AC-1)在体外具有良好的免疫调节活性、抗肿瘤活性,但对不同的肿瘤细胞具有不同的抑制效果并且对正常细胞无毒性。     

四川小金县野生羊肚菌多糖的结构解析及体外抗肿瘤活性初探CSCD

本研究通过热水浸提法从四川小金县的野生羊肚菌中提取多糖(Morchella esculenta polysaccharide,ME-P),利用傅里叶红外光谱(FT-IR)、高效液相色谱(HPLC)、气相质谱连用(GC-MS)和核磁共振(NMR)波谱等技术鉴定ME-P的结构,采用CCK-8法检验ME-P的药物毒性并探寻ME-P体外抗肿瘤活性。结果表明,ME-P中含有吡喃糖环,单糖组成为甘露糖、葡萄糖、半乳糖,比例为4∶4∶1;具有1,2,3,4,6-D-甘露糖、2,3,4,6-D-甘露糖交替连接为主链,1,6-D-葡萄糖和1,2,6-D-半乳糖作为支链,4-D-葡萄糖与1,2,6-D-半乳糖连接作为末端糖的重复单位的结构新颖的多糖。ME-P对巨噬细胞(RAW 264.7)无毒害,且有极显著(P<0.01)增殖作用,在质量浓度为1.25μg/mL时对RAW 264.7的增殖率可高达79.5%。同时,对小鼠结肠癌细胞(CT26.WT)和胃癌细胞(MFC)均有抑制作用,且均为低浓度时抑制效果较好,在ME-P为1.25μg/mL时,ME-P对CT26.WT和MFC的抑制率分别为28.20%和34.23%。本研究解析出四川小金县羊肚菌多糖(ME-P)为甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的结构新颖的多糖,无毒且对肿瘤细胞显示出显著的抑制作用,该结果为羊肚菌多糖的开发与应用提供了一定的科学依据。