无血清培养高密度乳猪肝细胞的形态和功能变化

本文研究了无血清培养高密度猪肝细胞的形态和功能变化。将分离的肝细胞以高密度(1×10~7/ml)培养在含激素、多种生长因子和营养成分的无血清培养基中,动态观察培养7天中肝细胞形态、活率、蛋白质合成功能、G-6-Pase活性、安定转化功能及LDH含量;同时以无血清培养低密度(5×10~5/ml)肝细胞作为对照组。研究结果表明:高密度培养的 肝细胞各项功能较低密度培养的肝细胞为低;高密度培养的肝细胞的形态、蛋白质合成功能在培养7天中保持稳定;活率随着培养时间的延长而下降,但均高于90％;安定转化功能在培养第2、3天最强;G-6-Pase活性在培养1天后明显下降,然后维持在较低水平;LDH含量在第1、2、3天较高。     

注射法制作ICR小鼠肝癌模型及其改进

应用直接注射法制作ICR小鼠原发肝癌模型并成功地进行方法改进。对模型小鼠进行了体重监测、原位移植成功率统计和病理检查,结果表明改进后的直接注射法制作小鼠原发肝癌模型的成功率显著提高,并成功模拟出肿瘤的多器官转移及人类肝癌常见的临床症状、体征。模型可以很好的满足抗肿瘤药物开发、肝癌发生发展机制研究的需要。同时,直接注射法改进方案和理念解决了直接注入细胞产生返漏的技术难题,为进一步建立其他脏器的原发或继发性癌症移植模型打下了基础。     

小牛类表皮生长因子活性肽（c－EGF）的分离纯化及性质

本文报道小牛颌下腺通过酸抽提、ＣＭ５２、ＤＥ５２柱层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶过滤及ＨＰＬＣ等步,分离纯化到一个分子量为６ｋＤ,等电点为４．６的小肽。该小肽类似人重组表皮生长因子（ｒｈ—ＥＧＦ）的生物活性,具有刺激ＮＲＫ细胞的增殖及刺激新生小鼠的睁眼、萌牙,并具有增加Ａ４３１细胞膜蛋白质磷酸化的功能。氨基酸组成缺少苯丙氨酸及苏氨酸残基。我们命名它为小牛类ＥＧＦ样活性肽（ｃａｌｆＥＧＦ－ｌｉｋｅａｃｔｉｖｅｐｅｐｔｉｄｅ,简称ｃ－ＥＧＦ）。     

人胸腺上皮细胞培养及其分泌产物

本文通过降低培养基中血清含量,向RPMI 1640培养基中补加三碘甲腺原氨酸而获得一种人胸腺网状上皮细胞占优势生长的培养物。在此培养基中细胞经传代培养长达90天,仍维持正常形态特征。胸腺组织在培养14天后,新生细胞的突起形成网状结构,细胞化学检查和电镜观察表明具有丰富的分泌颗粒,囊泡及张力原纤维束和桥粒等上皮细胞特征。收集合并细胞培养液,经部分纯化后检查其生物活性,表现出具有促进玫瑰花结形成和降低胸腺细胞TdT活性的作用,说明培养细胞的分泌产物具有胸腺激素活性。根据形态学,细胞化学和生物活性检测结果,我们倾向于认为该培养物主要为网状上皮细胞。     

猪胸腺激素对淋巴细胞DNA复制和转录的刺激作用

胸腺激素可促进T细胞成熟分化,调节免疫细胞功能,因而在免疫中起重要作用。T细胞在成熟过程中,将出现Lyt 1,2,3及绵羊红血球受体等表面标志和TDT。本研究以~3H-TdR和~3H-Leu掺入试验观察猪胸腺激素PTH和DNA复制及蛋白质合成的关系,以玫瑰花结及TDT为标志研究PTH在T细胞成熟中的作用。     

望江南总蒽醌苷抗肿瘤作用的研究

探讨望江南总蒽醌苷(CSAG)的抗肿瘤作用及其作用机制.利用MTT法检测望江南总蒽醌苷对肝癌细胞HepS、肺癌细胞(A549)、小鼠肉瘤(S180)腹水型肿瘤细胞等肿瘤细胞和人正常肝细胞L-02增殖的影响;实体瘤称重法测定CSAG对肝癌(HepS)实体瘤的抑制情况,将接种肿瘤的小鼠分成5组,每组6只小鼠,雌雄各半,给药12 d,停药后24 h处死动物,秤鼠体重,剥离出肿瘤,秤瘤重,测定生化指标.结果显示,CSAG对以上肿瘤细胞的增殖均有抑制作用,对肝癌细胞荷瘤小鼠肿瘤生长具有明显的抑制作用;同时可增加胸腺指数和脾指数.因此,CSAG具有明显的抗肿瘤效果,其抗肿瘤作用可能与提高机体免疫力和诱导细胞凋亡有关.     

海滨锦葵块根总黄酮的提取鉴别及其对体外细胞增殖活性的影响

本文报道了海滨锦葵块根中总黄酮的提取、纯化、鉴别方法,以及总黄酮对小鼠免疫和肿瘤细胞的体外增殖活性的影响。采用超声波法对海滨锦葵块根总黄酮进行粗提,再通过D101型大孔树脂柱层析法对所得黄酮粗提物进行纯化;通过分光光度法测定了其中的总黄酮含量,并经薄层层析(GF254)和显色反应进行了初步定性鉴定;最后利用细胞增值试验测定了总黄酮的生物活性。结果表明,所得干物质中的总黄酮含量为12.5%,所含黄酮类化合物属于黄酮或黄酮醇类;总黄酮在60μg/mL时对小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞增值起显著促进作用;在80μg/mL时对于肿瘤细胞增殖具有较强的抑制作用。     

乳猪肝细胞短期培养后的低温保存

本文对乳猪肝细胞短期培养后冻存法和直接冻存法进行比较。采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞,将肝细胞接种到含10％DMSO、激素、生长因子和10％NBS的RPM1 1640培养基中,用阶段性冻存法保存肝细胞,分别对直接冻存和培养后冻存10天、20天复苏的肝细胞进行培养,动态观察其活率和功能。研究结果表明各组复苏后的肝细胞均保持较高的活率;短期培养后冻存组肝细胞活率、G-6-Pase活性、白蛋白和葡萄糖合成功能及安定转化能力均较直接冻存组为高;LDH活性低于直接冻存组;冻存时间的长短对其白蛋白、尿素和葡萄糖合成功能有一定影响。因此,短期培养后冻存法较直接冻存法为好。     

五肽胃泌素及其类似物对大鼠胃粘膜细胞DNA合成的作用

 利用细胞培养的方法,测定五肽胃泌素(Boc-β-Ala-Trp-Met-Asp-phe·NH_2)、葡萄糖-1-脱氧果糖四肽(GIe-1-Deoxyflu-Trp-Met-Asp-phe·NH_2)及Boc-三肽(Boc-Met-Asp-Phe·NH_2)等胃泌素类似物对~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)参入胃粘膜细胞DNA合成的影响。实验结果表明五肽胃泌素对胃粘膜细胞DNA合成有明显促进作用,而泌酸活性比五肽胃泌素还强的葡萄糖-1-脱氧果糖四肽却没有这种作用。进一步证明胃泌素的营养作用是独立于泌酸活性而存在的,二者有着不同的作用机理。     

原花色素对HepS细胞增殖抑制诱导凋亡的研究

本文通过体外培养肝癌HepS细胞,以不同浓度原花色素处理12—72h后,MTT法测定细胞生长抑制作用,采用DNA片断分析、DNA琼脂糖凝胶电泳、荧光染色以及流式细胞技术等方法来探讨原花色素体外抑制肝癌HepS细胞及诱导其凋亡的作用。实验结果显示原花色素能抑制HepS细胞的生长,并且呈现出明显的时效和量效关系,DNA电泳出现典型的凋亡DNA梯形带,在荧光显微镜下,凋亡细胞呈亮绿色,H和AnnexinV．FIFC双染后,经流式细胞仪检测、分析显示凋亡细胞明显增多。因此原花色素能抑制肝癌HepS细胞株的生长,可能与诱导其细胞凋亡有关。