阿片受体克隆成动——记1993年国际麻醉性药物研究大会

1993年7月10～15日在瑞典Skvde市召开了1993年国际麻醉性药物研究大会(International Narcotic Research Conference,INRC)。这是20年前召开首届INRC以来一次激动人心的盛会,会上宣布三类阿片受体(mu,delta,kappa)全部克隆成功。本文介绍会议内外的一些背景资料,以飨读者。     

阿片受体亚型研究进展

近20年来,人们已成功克隆了μ,δ和κ三种经典阿片受体的基因。最近克隆的孤儿(ｏｒｐｈａｎ)受体,其结构特征与阿片受体基本相同,并有高度的同源性,又被称为阿片受体样受体(ｏｐｉｏｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒｌｉｋｅ,ＯＲＬ1)。进一步通过药理学特性的研究,提出每一种受体可能有不同的亚型,并发现了一些新型的ε、λ、ι和ζ阿片受体,而σ受体药理学特性与其它阿片受体明显不同,应不属于阿片受体的范畴。1.阿片受体1.1　μ受体亚型μ(ＭＯＲ1)受体的基因与编码δ、κ受体和ＯＲＬ1受体的基因大约有50%～70%的同源性。μ受体的两种剪接变异体(…     

第一个阿片受体克隆成功

谢国玺博士最近从人胎盘中克隆出一个具有阿片结合活性的受体,这是第一个克隆成功的阿片受体。阿片受体的存在最早是于70年代初基于药理学实验提出的,以后许多实验室又对阿片受体的生化特性做了大量的研究,并纯化出一些不同分子量的阿片受体,进一步证实了阿片受体的存在。尽管这些实验室一直在致力于阿片受体的     

阿片受体的研究进展

阿片及其衍生物在神经系统中具有很强的镇痛作用,对阿片受体的研究已有20多年的历史。20世纪70年代发现了阿片受体的存在并先后发现了脑啡肽、β-内啡肽和强啡肽等阿片肽,随后发现了孤啡肽。如年代3种阿片受体的基因均已克隆成功,氨基酸序列表明它们均属G蛋白偶联受体,为7螺旋跨膜受体家族的成员,具有很高的同源性,功能包括介导腺苷酸环化酶的抑制作用以及一些离子通道的激活和抑制作用等。阿片受体基因的克隆将有利于新型临床药物的开发以及耐受和药物成瘾性分子基础的研究。目前阿片受体基因敲除、计算机结构模拟分析以及寻找新型阿片受体基因的研究均在深入进行。     

μ阿片受体基因敲出（Knockout）小鼠模型的建立和阿片受体镇痛及成瘾机理的

１９９２年克隆出阿片δ受体后,已从不同种属的动物克隆出阿片受体的三个亚型μ,δ,和κ受体。最近法国Ｋｉｅｆｆｅｒ实验室的Ｍａｔｔｈｅｓ等利用小鼠胚胎干细胞基因敲出技术繁育成功了一个μ阿片受体缺陷的种系小鼠,这种小鼠除无μ阿片受体外,生长,发育,生殖和活动周期等正常小鼠无异,且小鼠的δ和κ受体的数量和分布,内源性阿片肽的表达和对热刺激的敏感性都与正常小鼠无异。给予该小鼠吗啡,无镇痛,位置偏受和身体依     

阿片受体的分子生物学研究

近年来,三种阿片受体的基因均已获得克隆。氨基酸序列表明,它们均属于Ｇ蛋白相关受体,彼此之间有很高的同源性,尤其是跨膜区和胞内环区。差异最大的部位在氨基端和羧基端以及胞外环区。与其它Ｇ蛋白相关受体比较,阿片受体和生长抑素受体有最大的同源性。阿片受体基因的克隆将大大促进人们对阿片类物质的研究。     

阿片受体基因表达调控的最新进展

20世纪90年代早期,科研人员成功克隆了μ、δ和κ3种经典的阿片受体基因,近两三年来又克隆出了孤儿(orphan)受体。目前的研究证实,这些阿片受体基因的调控主要分为转录调节和转录后调节。在转录水平上,最近的研究揭示了众多的转录因子、维生素A酸以及胞质分裂在阿片受体基因表达调控上的作用。转录后调控包括了对基因转录副本的选择性拼接,mRNA稳定性的改变以及翻译效率的影响。     

μ阿片受体基因敲出(Knockout)小鼠模型的建立和阿片受体镇痛及成瘾机理的阐明

1992年克隆出阿片δ受体后,已从不同种属的动物克隆出了阿片受体的三个亚型μ、δ和k受体。最近法国Kieffer实验室的Matthes等利用小鼠胚胎干细胞基因敲出技术繁育成功了一个μ阿片受体缺陷的种系小鼠。这种小鼠除无出阿片受体外,生长、发育、生殖和活动周期等与正常小鼠无异,且小鼠的δ和k受体的数量和分布、内源性阿片肽的表达和对热刺激的敏感性都与正常小鼠无异。给予该小鼠吗啡,无镇痛、位置偏爱和身体依赖性作用,给予纳洛酮也不出现撤药综合征。给予δ受体的选择性激动剂也无镇痛作用。说明吗啡的镇痛、位置偏爱和身体依赖性作用由μ受体介导,而与δ和k受体无关。     

阿片受体克隆成功：记1993年国际麻醉性药物研究大会

１９９３年７月１０－１５日在瑞典Ｓｋｏｅｖｄｅ市召开了１９９３年国际麻醉性药物研究大会。这是２０年前召开首届ＩＮＲＣ以来一次激动人心的盛会，会上宣布三类阿片受体全部克隆成功。本文介绍会议内外的一些背景资料，以飨读者。     

阿片受体研究最新进展

阿片受体研究自１９９２年δ受体克隆成功,发展迅速,１９９３年μ、ｋ受体也克隆成功。１９９４年发现阿片孤儿受体ＯＲＬ－１,１９９５年即找到了ＯＲＬ－１的内泊性本体Ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ。１９９６年成功地应用基因敲出技术制成缺乏μ受体基因的小鼠,证明吗啡镇痛及成瘾形成通过μ受体。１９９７年又发现了μ受体内源性配体ｅｎｄｏｍｏｒｐｈｉｎｅ－１和ｅｎｄｏｍｏｒｐｈｉｎｅ－２,我国学者研究成功的羟甲芬太尼的八     

阿片受体研究最新进展──看分子药理学研究动向

阿片受体研究自1992年δ受体克隆成功;发展迅速,1993年μ、κ受体也克隆成功。1994年发现阿片孤儿受体ORL－1,1995年即找到ORL－1的内源性配体Nociceptin（OrphaninFQ）。1996年成功地应用基因敲出技术制成缺乏μ受体基因的小鼠,证明吗啡镇痛及成痛形成通过μ受体。1997年又发现了μ受体内源性配体endomorphine－1和endomorphine－2。我国学者研究成功的羟甲芬太尼的八个立体异构体合成,发现F－9202和F－9204是当前μ受体选择性最高的配体。计算机模拟μ受体三维结构及定点突变工作证明Tyr－148及His－319是羟甲芬太尼的结合位点。这些进展反映了当前神经分子药理研究的动向。     

介绍国际麻醉剂研究会

国际麻醉剂研究会(INRC)成立于1969年,这是以交流不同学科研究阿片类麻醉剂研究进展的学术组织,每年召开一次年会,以提供国际上从事该领域研究科学家一个交流科研进展及最新信息的极好场所。由于七十年代发现脑中阿片受体的存在及内源性阿片肽的不断出现,阿片肽及阿片受体有关的研究成为国际上神经生物学神经药理学研究的一个热门领域,大批实验室均投入这一领域的研究。使 INRC 成为一个重要的国际学术组织。原来,这组织为一俱乐部性质,至1986年正式制订规章,定名为现名。执行委员会由九人组成,北美3人,欧洲3人,其他地区3人。设书记(Secretary)一人,总管会务;司库1人。执委任期3年,     

脑内发现全新的阿片受体样受体及其内源性配体

１９９４年克隆了一种孤儿受体－－阿片受体样受体。１９９５年又发现其内源性配体ＯＦＱ或Ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ。ＯＲＬ受体与已知的阿片受体有５０％同源性,ＯＦＱ则与强啡肽Ａ化学结构高度相似,这两系统在功能上可能既有相反的作用,又有相似的作用,其详情正研究中。     

κ阿片受体有不同亚型

阿片受体有μ,δ及κ三种不同类型。应用选择性拮抗剂以及交叉耐药试验已进一步提出μ受体存在不同亚型。近年来不少学者根据离体受体结合试验的结果,认为κ受体也可能有不同亚型。Iyengar 等在活体动物实验中发现,不同的κ激动剂对大鼠血浆的促甲状腺激素(TSH)、皮质酮水平以及嗅球中多巴胺的代谢     

猪Mu阿片受体基因外显子Ⅲ单核苷酸多态性

行为规癖 (古板行为 )是母猪一种常见的异常行为 ,表现为重复、不变化的行为模式 ,并且不带有明显的目的性。Mu阿片受体 (Muopioidreceptor,简称MOR)属于G蛋白偶联受体 ,分布在痛觉传导区以及与情绪和行为有关的区域 ,影响动物的神经反应和行为表现。本研究以Mu阿片受体基因作为候选基因 ,探讨影响母猪规癖性状的可能性。根据Mu阿片受体基因外显子Ⅲ的序列设计引物 ,用PCR -SSCP的方法对大白猪、长白猪和杜洛克猪进行单核苷酸多态性分析 ,发现该位点存在多态性。对两种纯合子片段克隆并测序表明 ,mRNA第 1169处存在C→T的单碱基突变 ,在第 12 2 6处存在C→A的单碱基突变 ,均为沉默突变。统计结果发现 3种基因型 (AA ,AB ,BB)在各品种中的分布不一致 ,χ2 独立性检验差异极显著 (P <0 0 1)。将大白猪 3种基因型同行为规癖性状进行最小二乘分析 ,结果表明 ,BB基因型与其他 2种基因型相比有较高的无食咀嚼表现频率 ,同AA型比较差异极显著 (P <0 0 1) ,咬栏和站立基因型间差异不显著。因此 ,推测Mu阿片受体基因可能是影响母猪无食咀嚼性状的主效基因或与控制该性状的主效基因连锁     

阿片受体的耐受机制

阿片类药物是临床疼痛治疗中重要的选择药物,限制其长期使用的主要原因在于患者生理耐受性和药物依赖性的发生。多种给药途径、不同剂量(从超低到高剂量)以及给药时间(如间歇性或持续)均可造成阿片类药物的耐受。阿片类药物的使用是一把双刃剑。它们最初被用于镇痛和抗痛觉过敏,但随后的实验研究和临床观察发现,长期使用阿片类药物会导致急性阿片类耐受(acute opioid tolerance,AOT)和阿片类诱导的痛觉过敏(opioid-induced hyperalgesia, OIH)。有研究表明,阿片类药物即使在临床接受的剂量范围内使用,也会引起剂量或时间依赖性的急性耐受性和痛觉过敏。要在实现临床疗效的情况下同时减轻或有效阻止阿片耐受的形成是一个亟待解决的问题。因此,本文主要简述了阿片受体中最重要的μ阿片受体耐受的形成机制,以期为阿片耐受的治疗提供理论依据。     

猪Kappa阿片受体基因外显子部分序列单核苷酸多态性分析

应用PCR SSCP的方法对大白猪、长白猪和杜洛克猪的Kappa阿片受体 (Kappaopioidreceptor,简称KOR)基因进行单核苷酸多态性检测和分析 ,研究Kappa阿片受体基因作为候选基因 ,影响母猪行为规癖性状的可能性。根据Kappa阿片受体基因外显子的部分序列设计 3对引物 ,发现F1/R1引物对扩增的片段有多态性。对两种纯合子片段克隆并测序表明 ,mRNA第 10 5处有一C→T的单碱基突变 ,为沉默突变。统计结果发现 ,3种基因型 (AA、AB、BB)在各品种中的分布不一致 ,χ2 独立性检验差异极显著 (P <0 0 1)。将 3种基因型同行为规癖性状进行统计分析 ,结果表明BB基因型与其他两种基因型相比表现较高的静止站立行为 ,同AA和AB型比较差异极显著 (P<0 0 1) ,其他 4种行为性状基因型间差异不显著。因此 ,推测Kappa阿片受体基因SNP对母猪静止站立行为性状存在一定的影响     

δ阿片肽受体分子药理学

目前已成功地克隆出δ、μ、κ阿片受体 ,均属Ｇ蛋白偶联受体 ,有 6 5 %同源序列 ,仅 35 %序列决定其特异性。阿片受体最大的同源区是跨膜区 (ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ,ＴＭ)和细胞内环 ,变化最大的区域在细胞外环及其氨基、羧基末端。近年来应用反义核酸技术、基因剔除、构建嵌合受体、基因定位突变、截短或缺失氨基酸突变等方法对阿片受体的结构和功能的研究取得了新进展。1 .内源性与克隆δ阿片受体δ阿片受体广泛分布于脑内 ,但在不同的脑区其分布密度不同。体内药理学实验证明 ,δ阿片受体有两种亚型δ1和δ2 [1] ,但是其亚型没被…     

羟甲芬太尼——一种新的高选择性μ阿片受体激动剂

阿片受体亚型功能结构研究中,高选择性和高亲和力的阿片受体亚型配体研究是一个十分重要的课题。国际上不少实验室均致力于寻找高选择性及高亲和力的阿片受体亚型配体,也取得了不少成就,如DAGO,DPDPE,U-50488H等分别为μ,δ及κ亚型的激动剂,已     

人源μ型阿片受体的cDNA克隆及转染CHO细胞的活性分析

μ型阿片受体是阿片类药物镇痛与成瘾的分子基础。从人脑组织总RNA通过RTPCR扩增获得μ型阿片受体的cDNA,将其克隆至pcDNA31(+)中,用酶切鉴定正确的重组质粒转染CHO细胞。筛选的单克隆细胞株,检测阳性的细胞克隆表达的μ型阿片受体介导胞内信号转导的能力。通过与激动剂和拮抗剂的信号转导分析证实,阳性的细胞克隆表达的μ型阿片受体与天然的μ型阿片受体具有基本一致的生物学特性,因此可以用来作为高效镇痛低成瘾药物筛选平台的候选细胞株。