一种改造的同时含有preS1,preS2抗原决定簇的乙肝病毒表面抗原

利用PCR方法合成的编码乙肝病毒表面抗原 preS1区氨基酸第 2 1～ 47位和preS2区第 1 2 0～ 1 46位肽段的基因片段同时分别与S基因的 5′端和 3′端 (相当于第 2 2 3位氨基酸 )融合 .融合基因被置于痘苗病毒通用载体 pGJP 5上的P7.5启动子下游 ,并通过体内同源重组 ,经筛选获得重组痘苗病毒vS2SS1 .vS2SS1感染哺乳动物细胞后 ,融合蛋白S2SS1获得表达 .对S2SS1蛋白的表达水平、分泌性、抗原性和颗粒性分析结果表明 ,S2SS1蛋白能够形成同时具有preS1 ,preS2和S抗原性的颗粒 ,并能有效地从细胞中分泌 ,其表达和分泌水平与重组痘苗病毒单独表达的S蛋白接近     

莽山烙铁头蛇的资源调查报告

莽山烙铁头蛇 ( Ermia mangshanensis)是中国特有蛇种 ,于 1 989年在湖南莽山国家级自然保护区首次发现 ,1 990年被学术界正式命名 [1]。我们于 1 990～ 1 997年对莽山烙铁头蛇的分布及种群数量进行了初步的前期调查 ,于 1 998～ 2 0 0 0年对其进行了专项调查[2 ] ,现将调查结果报告如下。1　调查时间和方法1 .1　调查时间　　调查时间是 1 990～ 2 0 0 0年 ,其中前期调查是1 990～ 1 997年 ,专项调查是 1 998～ 2 0 0 0年。1 .2　调查方法　　前期调查以走访调查为主 ,实地调查为辅 ;专项调查以野外实地调查为主 ,兼顾走访调查。　　 ( 1 …     

毕赤酵母表达的含前S1、前S2和S表位乙肝表面抗原疫苗的制备和免疫原性研究

整合了乙肝表面抗原嵌合基因SS1和SS2的毕赤酵母工程菌株GS115-SS1S2经高密度发酵培养,甲醇诱导,抗原表达量达到300~600mg/L发酵液。SS1S2抗原经细胞破碎、硅胶吸附、疏水层析和凝胶过滤纯化,纯度达99%以上,每升培养物可收获纯化抗原82mg。纯化的SS1S2抗原经Al(OH)3吸附,在NIH小鼠中进行免疫效果评价。三组NIH雌性小鼠,分别腹腔接种2.5μg、0.625μg和0.156μgSS1S2疫苗或商品化的单S疫苗。部分小鼠在30天时采血,测定各疫苗组的ED50值。在SS1S2疫苗组,前S1、前S2和S抗原的ED50值分别为0.46、0.29和0.84μg,而S疫苗组S抗原的ED50为0.99μg。另一部分小鼠分别在7天和14天时采血,考察抗体阳转率与时间的关系。SS1S2疫苗前S1、前S2抗体阳转率在7d和14d时比S抗体的阳转率为高,提示前S抗体出现的时间较早。上述结果显示SS1S2疫苗比单S疫苗具有更好的免疫原性。     

甜菊良种的单株选育

经高效液相色谱分析及部分农艺性状的综合评价 ,从 3个甜菊 (SteviarebaudianaBertoni)优良品系 (中山一号、YS0 0 3和YS0 0 4)的自然并辅助人工授粉结实得到的 13株单株中筛选出 2株优良单株SZ990 0 40 0 3和SZ990 0 40 11,SZ990 0 40 0 3单株干叶总甙含量为 16 .6 4% ,R A甙 13.34 % ,R A甙 /总甙为 80 .17% ;SZ990 0 40 11单株干叶总甙含量 19.2 0 % ,R A甙 12 .30 % ,R A甙 /总甙为 6 4.0 6 %     

A NEW PADDLEFISH FROM THE UPPER JURASSIC OF NORTHEAST CHINA

orderAdpenseriformesBerg,l94oFaedyPolyodontidaeBonaparte,l838Genu8Protopsephuru8gen.nov.TyPespede8P.liuigen.etsp.nov.Protopsephuru8liuigen.etsp.nov.(Fig.1Ipl.1)HolotypeAnearlycompletefishanditscounterpart,lackingpartofitscau-dalfin.GMV2032-la,b.Horizonandl0ealityUpperJurassicYixianF0rmation,S0ngzhangzivillage,LingyuanCounty,LiaoningProvince.Diagn0chPadd1efishofmiddlesizewithtotallengthreachinglm0rmore.Rostralpartisaboutl/40fthefishlengthwithmanyr0stralsandrareste1latebones.Derm0sphe…     

2018年我国19株猪链球菌4型分离株的病原学特征及分析

[背景]近年来,猪链球菌4型(Streptococcus suis serotype 4,SS4)分离率逐渐上升,但是有关SS4的系统研究报道匮乏.[目的]研究19株SS4临床分离株的病原学特征.[方法]以2株猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)强毒株为参考菌株,对19株S...     

小麦淀粉合酶基因Ⅲ片段的克隆及反义和RNA干扰载体的构建

采用RT-PCR方法从小麦品种豫教2号的发育籽粒中克隆出淀粉合酶Ⅲ基因(starch synthase Ⅲ,SSⅢ)部分cDNA片段(509bp) (GenBank No.EF466009),同源性比较结果显示,它与GenBank 上已报道的SSⅢ基因有高度同源性.以pWM101质粒为基础,构建了由35S启动子调控的SSⅢ基因的反义表达载体pWM101SSⅢA;另外,还以pFGC5941质粒为基础,构建了SSⅢ基因的RNAi干扰载体pFGC5941SSⅢsa,这些载体的构建为研究此基因的功能打下了很好的基础.     

马铃薯淀粉合成酶融合基因植物表达载体构建

通过反义抑制马铃薯(Solanum tuberosum L.)块茎淀粉合成酶GBSS、SSⅡ和SSⅢ基因的表达,可降低淀粉中直链淀粉含量和改变分支链的长度,从而降低马铃薯淀粉糊化温度、改善其抗凝沉性。依据GBSS、SSⅡ和SSⅢ基因的cDNA序列分析,从各基因中筛选和克隆了一段同源性极低、约500~600bp的片段;通过PCR技术实现了3个片段的融合,得到了1671bp的融合基因GS2S3;将GS2S3反向连接在GBSS5′侧翼序列之后,构建了由GBSS5′侧翼序列驱动的GS2S3反义基因的植物表达载体pBI-GS2S3,并进行了初步转化。     

AccQ.Tag法中AccQ.Fluor试剂用量研究

在 0 .5 0 μmol/ml氨基酸标准溶液中 ,分别加入衍生剂 1 0 .0 ,1 2 .5 ,1 5 .0 ,1 7.5 μl进行衍生 ,并与标准方法的2 0 .0 μl进行对照 ,测定各种氨基酸的峰面积 ,方差分析表明 ,衍生剂加入量为 1 5 .0 μl和 1 7.5 μl时 ,峰面积与对照无显著差异 ,加入 1 0 .0 μl和 1 2 .5 μl时与对照有极显著差异 ,因此 ,在实际样品分析中 ,只加入 1 5 μl衍生剂 ,已完全能够满足常规分析的需要 ,而可以节省 1 /4的衍生剂用量     

修饰的含前S1、前S2免疫决定簇乙肝表面抗原融合多肽在毕赤酵母中的共表达

用BamHⅠ和BglⅡ双酶切含SS2嵌合基因片段的重组质粒pAO815-SS2,分离含AOX1启动子区、SS2嵌合基因和AOX1转录终止序列的表达盒。将分离的BamHⅠ-BglⅡ表达盒与经BamHⅠ线性化的pAO815-SS1质粒连接,转化大肠杆菌Top10F′,提取质粒,用BamHⅠ和BglⅡ双酶切分析重组质粒并筛选正向插入SS2表达盒的重组子。将该重组质粒用电转化法导入PichiapastorisGS115细胞,经表型筛选、小试表达和产物鉴定,构建了重组表达菌株GS115-SS1S2。重组菌株经甲醇诱导后制备抗原粗提液,进一步进行ELISA和Westernblot鉴定。ELISA结果显示,产物同时具有S、前S1和前S2抗原性。Westernblot分析进一步表明,表达产物既能与S抗体结合,也能与前S1和前S2抗体结合。工程菌经高密度发酵,表达量达到300~600mg/L。抗原经纯化后进行电镜观察,形成直径20~35nm的球形颗粒。纯化抗原经SDS-PAGE分析,SS1和SS2多肽仍然保持完整,基本无降解。     

三株芸豆叶际拮抗细菌的筛选与鉴定

以芸豆锈病病原菌[Uromyces appendiculatus(Pers.)Ung.]为指示菌,从芸豆叶际中筛选到3株具有明显拮抗效果的细菌,编号为SS2,L14b,NEW2。经过形态学观察,生理生化测定,16S rDNA序列及系统发育分析,初步鉴定SS2为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis),L14b与NEW2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。SS2,L14b,NEW2的16S rDNA序列的Gen-Bank登录号分别为EU771078、EU771076和EU771079。     

Salmonella enterica Flagellin Is Recognized via FLS2 and Activates PAMP-Triggered Immunity in Arabidopsis thaliana

Infections with Salmonella enterica belong to the most prominent causes of food poisoning and infected fruits and vegetables represent important vectors for salmonellosis. Recent evidence indicates that plants recognize S. enterica and raise defense responses. Nonetheless, the molecular mechanisms controlling the interaction of S. enterica with plants are still largely unclear. Here, we show that flagellin from S. enterica represents a prominent pathogenassociated molecular pattern （PAMP） in Arabidopsis thaliana, which induces PAMP-triggered immunity （PTI） via the recognition of the fig22 domain by the receptor kinase FLS2. The Arabidopsis fls2 mutant shows reduced though not abolished PTI activation, indicating that plants rely also on recognition of other S. enterica PAMPs. Interestingly, the S. enterica type III secretion system （T3SS） mutant prgH- induced stronger defense gene expression than wild-type bacteria in Arabidopsis, suggesting that T3SS effectors are involved in defense suppression. Furthermore, we observe that S. enterica strains show variation in the fig22 epitope, which results in proteins with reduced PTI-inducing activity. Altogether, these results show that S. enterica activates PTI in Arabidopsis and suggest that, in order to accomplish plant colonization, S. enterica evolved strategies to avoid or suppress PTI.     

产甾体皂甙华重楼内生菌的筛选与鉴定

从华重楼(Paris polyphyllavar.chinensisFranch)的地下块茎中分离筛选得到2株可能产生甾体皂甙的内生菌(SS01和SS02),薄层层析检测菌株SS01、SS02的发酵产物分别有3条和2条层析带与重楼总皂甙的层析带迁移率相当。形态和生理生化特征初步表明SS01和SS02分属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)和芽孢杆菌属(Bacillussp.)细菌。扩增、测序得到SS01和SS02的部分16S rDNA序列,GenBank接收号分别为AY842143和AY842144。用Blastn调出与菌株16SrDNA同源的序列,用Clustal W进行多重序列对比,用软件Phylip按Neighbor-Joining方法构建16SrDNA系统发育树。菌株SS01和SS02分别与Cedecea davisae DSM4568、Paenibacillus daejeonensis处于同一分支,相似性分别为98.9%和97.7%,将它们鉴定为Cedecea davisae SS01和Paenibacillus daejeonensis SS02。     

滑膜肉瘤动物模型的分子细胞遗传学研究

用1例日本滑膜肉瘤（SS）患者的瘤组织标本接种裸鼠,获得了肿瘤生长。亲本肿瘤与裸鼠肿瘤在病理组织形态上存在一定差异,但两者的免疫组织化学特征相同。染色体分析表明,SS细胞株存在染色体数目和结构异常,患者外周血淋巴细胞染色体核型为正常女性,46,XX。 ＳＳ细胞株巴氏小体检出率低于对照,其正常X染色体比易位X染色体晚复制17小时。DNA印迹实验表明,SS DNA存在D2S3座位等位片段丢失,D1S57,D17S5和D13S30座位基因的部分缺失,但无DXS7,DXS14,和D2S44座位基因改变。     

THE ARAGONIAN VERTEBRATE FAUNA OF XIACAOWAN,JIANGSU──9. OCHOTONIDAE (LAGOMORPHA, MAMMALIA)

ochotonidaeThomas,l897AlloptoxDaw8on,l96lAlloptoxsihongensis8p.nov.(Figs.lAi6)HolotypeArightp3,V884o.7.Paratypesldp3,V884o.l;3p3,V884o.3,5,6;1p4,V884O.9;2ml/m2,V884o.l2,16;Afragmentof1eftmandiblewithp4,V884O.l8;thefrontpartofrightman-diblewithi2,p3-p4,V884o.24;2I2,V884O.21,23;4P3,V884O-31-33,56;P4,V884o.27;AfragmentofleftupperjawwithP3-M1,V884o-57;2M2,V884o.5o,53.TypelocalityS0nglinzhuang,Sih0ngC0unty,Jiangsu.StratumtypicumandageXiaca0wanFormation,.EarIyMi0cene(Shan-wangian),eq…     

复合诱变选育高效转化DHEA为7α,15α-diOH-DHEA的菌株及其转化工艺优化

结合酮康唑抗性筛选法,采用亚硝基胍和低能氮离子注入复合诱变方法筛选得到一株高效生物转化去氢表雄酮(D H E A)为3β,7α,1 5α-三羟基雄甾-5-烯-1 7-酮(7α,1 5α-d i O H-D H E A)的菌株亚麻刺盘孢C o l l e t o t r i c h u m l i n i S T-1,该突变株在底物D H E A投料浓度为1 0 g/L时产物摩尔得率达到3 4.2%,较出发菌株提高了4 6.2%。在此基础上进行培养基组分的优化,采用P l a c k e t t-B u r m a n实验设计考察转化培养基中各组分对产物摩尔得率的影响,有效筛选出葡萄糖、酵母粉和M g S O4·7 H2O浓度对产物摩尔得率影响显著,继而采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,并利用中心组合响应面设计实验对3个显著性因素的最佳水平进行研究,得到最适转化培养基组分为(g/L):葡萄糖2 6.3 4;酵母粉1 2.1 5;玉米浆3.0 0;F e S O4·7 H2O 0.0 1 5;M g S O4·7 H2O0.1 4;K H2P O40.9 0。采用该优化培养基,菌株C.l i n i S T-1的产物摩尔得率达到4 9.3%,较优化前提高了4 4.2%。     

不同条件下几种虫生真菌对棉铃虫的侵染致病效应

用 5种真菌共 10个菌株 ,分别对不同虫龄和生理状态的棉铃虫幼虫 ,采用不同的孢子剂量 ,设置不同的温度进行了毒力测定 ,结果表明 :(1)球孢白僵菌和莱氏野村菌两个菌种对棉铃虫有明显的防治效果 ,且前者优于后者 ;在白僵菌中 5 S0 3菌株毒力最高 ,对棉铃虫 1- 2龄幼虫的致死中时 (L T50 )为 6 .70 - 7.0 2 d,校正死亡率为 86 .96 % - 91.30 % ,僵虫率为 2 0 .0 0 % - 36 .6 7%。 (2 )同一菌株对不同生理状态的棉铃虫毒力差异显著 ,刚脱皮幼虫极易受感染 ,僵虫率高达 85 .71% ,;同一菌株 (5 S0 3)对棉铃虫 1- 2龄与 3- 4龄幼虫的校正死亡率相差 35 %以上 ,L T50 相差 4 d多 ,低龄幼虫较为敏感。 (3) 5 S0 3防治棉铃虫的最适浓度为 7.8× 10 7孢子 / m l,最适温度为 2 0 - 2 5℃。     

浦乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面S＋PreS1融合抗原的理化和生物学性状

研究了哺乳动物细胞（转基因GdSS1-18细胞系）分泌的乙型肝炎（乙肝）病毒表面S＋PreS1融合抗原（SS1）纯品的理化及生物学性状,结果表明,经HPLC柱层近呈现一个对称峰,证明HBsAg颗粒所带电荷的均一性;SDS－PAGE出现P24及P27条带,未出现Gp30的条带,凝扫描分析其各条带分别各占22．3％,77．7％、0％、Western blot试验证实,P27和Gp30能与S及S1抗体结合,而P24条带仅能与S抗体结合,表明,S、PreS1是特异性条带;N－末端的氨基酸序列和与所用目的基因编码的序列相同;乙肝SS1融合抗原在4℃储存较稳定。动物实验结果表明：与单纯含S基因的参比疫苗相比,含SS1融合基因疫苗免疫Balb/c小鼠既产生S抗体,又产生S1抗体,S抗体的ED50滴度与参比疫苗相似,S1抗体产生早于S抗体。     

哺乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面S+PreS1融合抗原的理化和生物学性状

研究了哺乳动物细胞(转基因GdSS1-18细胞系)分泌的乙型肝炎(乙肝)病毒表面S+PreS1融合抗原(SS1)纯品的理化及生物学性状,结果表明:经HPLC柱层析呈现一个对称峰,证明HBsAg颗粒所带电荷的均一性;SDS-PAGE出现P24及P27条带,未出现Gp30的条带,凝胶扫描分析其各条带分别各占22 3%、77 7%、0%;West ernblot试验证实,P27和Gp30能与S及S1抗体结合,而P24条带仅能与S抗体结合,表明S、PreS1是特异性条带;N-末端的氨基酸序列与所用目的基因编码的序列相同;乙肝SS1融合抗原在4℃储存较稳定。动物实验结果表明:与单纯含S基因的参比疫苗相比,含SS1融合基因疫苗免疫Balb/c小鼠既产生S抗体,又产生S1抗体,S抗体的ED50滴度与参比疫苗相似,S1抗体产生早于S抗体。     

野生马氏珠母贝子一代的遗传多样性

分析了海南省三亚与广西省北海两地野生贝群体内交配所得子代两群体 (SS、BB)和群体间交配(SS♀ ×BB♂ →BS)所得子代群体 (BS)各 8个个体的遗传多样性。筛选的 2 0个含 1 0碱基的随机引物中 ,其中 1 4个产生稳定的可重复的多态扩增结果 ,共检测出 1 2 4个位点。用修正的Shannon表型多态性指数量化三个群体的遗传多态度 ,SS、BB、BS三群体的多态度分别为 0 2 47,0 2 3 7,0 2 61。SS与BB ,SS与BS ,BB与BS三群体间的遗传相似度分别为 87 2 4% ,80 3 9% ,83 90 %。讨论了不同地域之间进行马氏珠母贝育种及遗传多样性保护工作的可行性