C57-ras致癌性转基因小鼠模型的脏器及血液学参数

目的测定自主建立的致癌性转基因动物模型C57-ras小鼠的血液生理生化值和主要脏器重量,计算脏器系数并作统计学分析。方法选取同窝C57-ras转基因阳性和阴性小鼠,雌雄各半,采血,测量血液生理指标和血清生化指标,并称主要脏器重量。结果 C57-ras转基因阳性雌鼠和阴性雌鼠间比较,NEUT、NEUT%存在显著性差异（P〈0.05）,PCT存在极显著性差异（P〈0.01）。C57-ras转基因阳性雄鼠和阴性雄鼠间比较,RBC、HCT、PLT、PCT存在显著性差异（P〈0.05）,MON%存在极显著性差异（P〈0.01）。血清生化指标中,ALT和TG存在显著性差异（P〈0.05）。主要脏器重量和脏器系数比较结果显示,除C57-ras转基因阳性雌鼠和阴性雌鼠在肺重量存在极显著性差异（P〈0.01）外,其余均无显著性差异（P〉0.05）。结论新建C57-ras致癌性转基因小鼠模型和正常C57BL/6小鼠的主要生物学特性基本一致,利于该模型在致癌性安全性评价等领域的实际应用。     

转基因EGFP小鼠的主要脏器重量及脏器系数

目的测定转基因C57BL／6-Tg（ACTB—EGFP）1osb／J（EGFP）小鼠主要脏器重量和脏器系数。方法实验选用5～6周雄性、6～7周雌性小鼠各15只,用sartorius电子天平分别测定体重和9个主要脏器重量,计算脏器系数,并对雌雄脏器重量和脏器系数之间进行比较。结果雌雄小鼠脏器重量间比较,雄性鼠体重明显大于雌性的体重（P〈0．01）;心、肝、肺、肾、肾上腺的重量间差异极显著（P〈0．01）;脾脏比较差异显著（P〈0．05）;雌雄间脏器系数比较,肺、脑、肾上腺间差异极显著（P〈0．01）,心、肝、脾、肾脏间差异不显著（P〉0．05）。结论转基因EGFP小鼠不同性别间脏器重量及脏器系数间有一定的差异,为相关研究打下了基础。     

Fmr1基因敲除小鼠脏器重量和脏器系数的比较分析

目的通过对Fmr1基因敲除小鼠雌雄两性和FVB小鼠的脏器重量和脏器系数进行比较分析,了解其脏器重量的差异,探讨Fmr1基因对动物生长发育等方面的影响。方法分别测定Fmr1基因敲除小鼠雌雄两性和FVB小鼠内脏器官的绝对重量和脏器系数,并进行统计学处理和分析。结果相同年龄的Fmr1基因敲除小鼠雄性的体重、心、肺、肝和肾的绝对重量均极显著的大于雌性（P〈0.01）。雌雄间脏器系数除肾脏（P〈0.05）和脑（P〈0.01）外,其余无显著差异。与FVB小鼠比较,Fmr1基因敲除小鼠心脏较轻（P〈0.01）,肾脏（P〈0.01）、体重和脑较重（P〈0.05）。脏器系数肾脏较大（P〈0.01）,心脏（P〈0.01）、脑和脾（P〈0.05）较小。结论Fmr1基因可影响动物的某些脏器重量和脏器系数。     

c—Ha-ras在转基因小鼠模型C57-ras各组织中的表达谱分析

目的：分析转基因c-Ha-ras在C57-ras癌症小鼠模型中的组织表达谱及时空表达差异。方法：利用半定量及荧光定量RT-PCR法,分析不同首建鼠系、不同周龄小鼠各脏器中转基因c-Ha-ras的表达。结果：转基因c-Ha-ras在心、肝等13种组织器官中均有表达,在肺脏中表达最高,在肝脏中表达最低,No.2、No.3和No.5等3个首建鼠均呈现相似的变化规律;转基因在No.5首建鼠中表达水平最高,而在同一个首建鼠系中,12周龄时表达高于8周龄和24周龄。结论：转基因c-Ha-ras在各脏器中能高效表达,并间接表明该转基因能稳定遗传,为C57-ras癌症小鼠模型用于新药临床前致癌性评价提了供理论支持。     

利用荧光定量PCR分析c-Ha-ras基因在C57-ras转基因小鼠中的拷贝数

目的:利用real-time PCR建立检测C57-ras转基因小鼠中外源c-Ha-ras基因拷贝数的简便方法,为药物安全性评价C57-ras转基因小鼠模型的繁殖和筛选提供数据支持。方法:以自建的人原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠为研究对象,利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR的绝对定量法测定3个C57-ras转基因小鼠系的c-Ha-ras基因Ct值,通过与内参基因GAPDH比较计算获得转基因的拷贝数。结果:内参基因GAPDH的标准曲线为lg NGAPDH=-2.852Ct+26.236,外源基因c-Ha-ras的标准曲线为lg NRAS=-3.068Ct+39.186;经计算,NO.2、NO.3、NO.5系的F6代拷贝数分别为4、4和3,并且系内不同个体间拷贝数一致。结论:利用SYBR GreenⅠreal-time PCR技术建立了检测C57-ras转基因小鼠中外源基因拷贝数的方法,该方法操作简单,节约成本,为C57-ras致癌性模型的选留和应用提供了基础和技术手段,也为其他类似转基因品系中转基因拷贝数的确定提供了一种参考方法。     

野生成年树鼩主要脏器重量及脏器系数的测定分析

目的对野生成年树鼩的体重和主要脏器重量进行测定,计算其脏器系数。方法测定60只野生成年树鼩体重及11个主要脏器重量,并计算其脏器系数。进行脏器重量、脏器系数的性别间比较分析及Kendall和谐系数分析。结果性别间比较心、肺重量差异极显著（P〈0.01）,脑、肾上腺、胰腺重量之间差异显著（P〈0.05）;肾上腺、胰腺系数差异有极显著性（P〈0.01）,心、肺、肾系数之间差异均达到了显著水平（P〈0.05）。Kendall和谐系数（W）分析表明,动物与其个体各主要器官整体发育协调性较好。结论野生成年树鼩心重量、肺重量、脑重量、肾上腺重量、胰腺重量、肾上腺系数、胰腺系数、心系数、肺系数、肾系数性别间存在差异。     

棉花脂肪酸脱氢酶FAD2能够实现转基因小鼠n-6脂肪酸的内源性生物合成

脂肪酸脱氢酶FAD2（fatty acid desaturase-2）是一种将油酸（18：1）脱氢生成亚油酸（18：2n-6）的植物脱氢酶.在前期研究fad2转基因小鼠模型的基础上,本文新构建CMV promoter/fad2cDNA/SV40poly A真核表达载体,通过显微注射技术,生产出转基因小鼠.7只妊娠受体合计移植184枚受精卵,出生63只（34.2%）健康的成年小鼠.PCR和Southern blotting结果显示,有10只小鼠整合了外源基因,总的转基因效率是15.9%（10/63）.随后,转基因小鼠与C57BL/6小鼠杂交选育,建立了10个转基因家系.最后,以6周龄的转基因后代同窝雌鼠作为样本（包括转基因阳性和阴性雌鼠）,利用微量气相色谱方法,分析了腿部肌肉组织和肝脏组织的多种n-6脂肪酸的百分含量,结果显示,只有1个（10%）家系的转基因小鼠表达了外源基因,能够有效地改变目标脂肪酸的成分.其中肌肉组织中油酸百分含量（8.580±1.232）与野生型小鼠（10.812±1.244）没有区别（P≥0.05） 但是,亚油酸的含量（15.653±0.557）,明显（P〈0.05）高于野生型小鼠（13.168±0.634）,相对含量提高了19% 同时,下游的花生四烯酸（20：4n-6）的含量（12.850±1.479）也明显（P〈0.01）高于野生型小鼠（6.871±0.665）,相对含量更是提高了87% 转基因肝脏组织的亚油酸（15.962±0.552vs15.200±0.170）和花生四烯酸（12.607±0.623vs11.601±0.492）含量也明显高于野生型小鼠组织（P〈0.05）.本实验表明,植物fad2基因能够有效地促进转基因小鼠自身生物合成n-6脂肪酸.在国际上首次成功地建立了fad2转基因小鼠的表达模型,为相关疾病的研究奠定了基础.     

野生TW近交系小鼠主要生理指标

目的建立野生来源TW（Tianjin Wild,TW）近交系小鼠的主要生理、血常规等指标。方法分别选用F28和F29代TW近交系成年雄性小鼠25只,雌性小鼠31只,检测动物的主要生理、血常规指标。结果TW小鼠体重雌雄差异无显著性,脏器指标中雌雄性比较仅肾脏重量、肾脏系数差异有显著性（P〈0.05）;血常规检测指标中,雌雄小鼠在WBC、MCV、MCH、PLT、MONO等5项指标的均值比较差异具有显著性,其他各项均无差别。与ICR、KM、NIH及BALB/c等通用实验小鼠指标比较,TW小鼠的脾脏、脾脏系数和血小板均高于或多倍高于这些通用小鼠品系。结论TW小鼠在一些主要生理指标上与通用实验小鼠品系不同,呈现自身特点。     

多巴胺D5受体转基因小鼠的建立

目的建立人多巴胺D5受体突变基因F173 L（D5F173L）,S390G（D5S390G）及正常人D5基因（hD5 WT）的转基因小鼠,利用该转基因动物模型来研究D5受体在原发性高血压中的发病机制。方法利用显微注射的技术将插入CMV启动子下游的D5F173L,D5S390G及hD5 WT基因的转基因载体注射入C57BL/6小鼠体内,建立多巴胺D5F173L,D5S390G及hD5 WT的转基因小鼠。通过PCR鉴定转基因小鼠的基因型。利用Western Blotting方法鉴定该受体蛋白在肾脏的表达情况。使用智能无创血压测量仪测量转基因小鼠的血压值。结果分别建立了多巴胺D5F173L,D5S390G及hD5 WT转基因C57BL/6小鼠,Western Blotting方法鉴定结果显示,与非转基因C57BL/6小鼠比较,D5转基因小鼠D5受体在肾脏有较高的表达。3-6月龄D5 F173L转基因小鼠的收缩压、舒张压和平均动脉血压均明显高于多巴胺D5S390G及hD5 WT转基因小鼠（n=6-8,P〈0.05）。结论多巴胺D5受体在原发性高血压发病中具有重要作用,但作用机理还有待于进一步研究。     

东方田鼠头骨和脏器的形态学指标

对实验室封闭群第7、8代东方田鼠（Microtus fortis calamorum)头骨和脏器的形态学指标进行了测量,并探讨了各指标在雌雄间、年龄组间的差异及其与体重的关系。结果表明,头骨大小在亚成年雌雄鼠间无显著差异,成年雄鼠显著大于成年雌鼠;脏器绝对和相对指标雌雄鼠间差异不显著。头骨指标、脏器绝对指标成年鼠显著长于或大于亚成年鼠,肝、肾脏、睾丸相对重量以及盲肠、大小肠相对长度在年龄组间差异显著。头骨和脏器指标（Y）与体重（X）的关系为Y＝aX^b,头骨形态指标、脏器绝对重量或长度与体重正相关,脏器相对重量或长度除睾丸与体重正相关外其余均与体重负相关。     

雌雄金黄地鼠血液生理生化指标的比较分析

目的测定金黄地鼠的血液生理生化参考值,并对两性的参考值进行比较。方法将88只4周龄金黄地鼠,80只8周龄金黄地鼠,采血后,用日本光电MEK-7222K血球分析仪测定血液生理指标,用Olympus AU400全自动生化分析仪测定血清生化指标。结果4周龄金黄地鼠血液生理指标中RBC、HGB、HCT、MCV和RDW性别差异有显著性（P〈0.05）,而WBC、MCH、MCHC、PLT、PCT、MPV和PDW等性别差异无显著性（P〉0.05）;4周龄金黄地鼠血清生化指标中ALB、ALP、GLU、CA、P、CHO和TG性别差异有显著性（P〈0.05）,而ALT、AST、TP、BUN和CREA等性别差异无显著性（P〉0.05）。8周龄金黄地鼠血液生理指标中WBC、LYM、MON、BAS、LYM％、NEUT％、MCH、RBC、HGB、HCT、MCV、PDW和RDW性别差异有显著性（P〈0.05）,而MCHC、PLT、MPV、PCT、NEUT、EOS、BAS、MON％和EOS％等性别差异无显著性（P〉0.05）;8周金黄地鼠血清生化指标中ALT、ALB、BUN、GLU、CREA、P、CHO和TG性别差异有显著性（P〈0.05）,而AST、TP、ALP和CA等性别差异无显著性（P〉0.05）。结论金黄地鼠血液的生理生化值受多种因素影响,部分指标两性问测定值有差异,但多数指标差异不显著。     

人工饲养树鼩血液学及生化指标正常值测定及分析

目的建立人工饲养健康树鼩血液学和血液生化指标的正常值参考范围,并探讨与不同物种的血液学和血液生化值的差异及相互关系。方法应用全自动血细胞仪和生化分析仪测定140只健康成年树鼩的血液学及血液生化指标。结果雌性与雄性比较,LYM％、PLT、RDW％、GLU、CREA的差异具有显著性（JP〈0．05）,11P、CHOL、TG的差异具有极显著性（P〈0．01）,其他指标的差异不具显著性,部分指标与恒河猴、大鼠及人的相应指标存在一定的差异。结论本文建立了健康树鼩的血液学及生化指标的正常值参考范围,可为应用该动物进行科学研究时提供参考。     

先天性白内障大鼠血液生化及血液流变学分析

目的：测定先天性白内障大鼠血液常规、生化正常值及血液流变学变化。方法采用XS-800i血常规分析仪和OLYMPUS AV2700生化自动分析仪对185～211 g大鼠共计90只进行血液常规和生化检测及用SA-6600自动血流变测试仪对血液进行流变学的测定。结果血像检测结果是白内障与正常对照同性比较无差异显著性（P ＞0.05）;小眼白内障与正常对照同性比较红细胞宽度（RDW）间差异显著（P ＜0.01或 P ＜0.05）。血生化检测结果是白内障大鼠与正常对照组同性间比较白蛋白（ALB）差异显著（P ＜0.01或P ＜0.05）雌性与对照组比较尿素（Ure）差异显著（P ＜0.01）,小眼白内障雌性与正常对照比较肌酐（Cr）差异非常显著（P ＜0.01）。白内障、小眼白内障大鼠的红细胞是雄性的低于雌性（P ＜0.05,P ＜0.01）而血小板是雄性的高于雌性（P ＜0.01）,肌酐是雄性低于雌性P ＜0.01）,正常组雄雌间无差异;血液流变学各组间无差异显著性。结论白内障大鼠与正常组大鼠间某些血常规及生化指标有一定的差异,该数据为该鼠在这领域的使用提供参考。     

无菌大鼠血液学及血液生化指标正常参考值的测定

目的人工培育Wistar无菌大鼠,观测F1和F2代无菌大鼠血液学及血液生化指标差异。方法对清洁级Wistar大鼠进行子宫摘除,隔离器内剥离子宫壁获得大鼠胎仔,人工哺育为无菌大鼠。待其繁殖后,采用全自动血液生化分析仪、全血细胞计数仪测定F1和F2代无菌大鼠的血液学及血液生化指标。结果不同代数无菌大鼠的血液学和血液生化指标存在显著差异,其中有差异的血液学指标包括RBC、HGB、HCT、MCV、MCHC、RDW、MPV、NE%、LYM%、EO%、BA%、NE#、LYM#、EO#、BA#（P〈0.05）;有差异的血液生化指标包括ALT、ALB、LDH、CHO、TBIL、HDL-C、LDL-C、GLO、GLU、ALP、A/G、UA、P（P〈0.05）。同时这些差异又因性别和年龄而不同。结论代数、性别、年龄对无菌大鼠的血液学及血液生化指标有较大影响。     

慢加急性重型乙型病毒性肝炎患者血清干扰素γ水平的检测及临床意义

目的：探讨血清干扰素-γ（IFN-γ）在慢加急性重型乙型病毒性肝炎（acute．on．chronihepatitisBloverfailure,ACHBLF）发病中的作用,旨在为ACHBLF的诊治提供理论参考。方法：采用ELSIA法测定30例ACHBLF患者和30例CHB患者血清IFN-γ水平,采用全自动生化仪检测肝功能常规指标。结果：AcHBLF组IFN-γ水平显著高于CHB组,相比较有显著性差异（P〈0．05）;ACHBLF组TBIL、ALT水平显著高于CHB组,相比较有显著性差异（P〈0．05）;ACHBLF组PTA水平显著低于CHB组,相比较有显著性差异（P〈0．05）;ACHBLF患者的IFN．叮水平与TBIL呈显著正相关（r=0．818,P〈0．01）,与PTA呈显著负相关（r=0．529,P〈0．05）,而与ALT无明显相关性（r=0．172,P〉0．05）。结论：IFN-γ参与ACHBLF的发病,并且是ACHBLF病情严重程度的重要指标之一。     

心脏特异表达Calponin 1转基因小鼠的心脏功能分析

目的建立心脏特异表达Calponin 1转基因小鼠,研究Calponin 1对心脏发育及心肌病的调节作用。方法利用心脏特异启动子α-MHC构建转基因表达载体,显微注射法建立Calponin 1转基因小鼠,PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western Blot检测Calponin 1在心脏组织中的表达,心脏超声检测转基因小鼠的心脏结构和功能,HE染色和Masson染色检测转基因小鼠心脏的病理改变。结果 Calponin 1在野生型小鼠心脏中有表达,在扩张型心肌病小鼠的心脏组织表达降低。通过显微注射法,建立了2个心脏组织Calponin 1基因高表达的转基因小鼠系。与野生型小鼠相比,Calponin 1转基因小鼠收缩期左室内径（LVID,systolic）增加28%（P〈0.01,n=12）,舒张期左室内径（LVID,diastolic）增加16.2%（P〈0.01,n=12）,收缩期左室后壁厚度（LVPW,systolic）减小15.7%（P〈0.01,n=12）,舒张期左室后壁厚度（LVPW,diastolic）减小21%（P〈0.01,n=12）,射血分数（ejection fraction,EF）降低11.5%（P〈0.01,n=12）,短轴内径缩短率（fraction shortening,FS）降低14.6%（P〈0.05,n=12）。转基因小鼠心脏组织病理H＆E染色和Masson染色显示,转基因小鼠心室扩张,心肌细胞不均匀肥大,细胞间隙变大,心肌间质纤维增多。结论 Calponin 1在心脏特异过表达引起转基因小鼠心脏左室内径增加,收缩期容积和舒张期容积显著增大,心室壁变薄,射血分数及短轴缩短率降低等扩张性心肌病表型,推测Calponin 1是参与心肌病病理发生的基因之一。     

不同周龄Balb／c小鼠脏器质量及其变化趋势分析

目的：测定不同周龄Balb／c小鼠主要脏器质量、脏器系数,并进行比较。方法：取120只3周龄、5周龄、7周龄的Balb／c小鼠,雌雄各半,精确测量小鼠体重和主要脏器质量,计算脏器系数。结果：①雌性与雄性Balb／c小鼠脏器质量相比较：3周龄时肝、脾有显著差异（P〈0．05）;5周龄时肝有非常显著差异（P〈0．01）,脾、肺有显著差异（P〈0．05）;7周龄时肝、肺及双肾有非常显著差异（P〈0．01）,心、脾有显著差异（P〈0．05）。②雌性与雄性Balb／c小鼠脏器系数相比较：3周龄时肝、脾有显著差异（P〈0．05）;5周龄时肝、脾有非常显著差异（P〈0．01）,膀胱有显著差异（P〈0．05）;7周龄时肺、双肾有非常显著差异（P〈0．01）,脾、膀胱有显著差异（P〈0．05）。结论：随着周龄的增长,Balb／c雌、雄性小鼠之间,存在差异的脏器也在增多。     

绿色荧光裸鼠血液生理生化指标检测分析

目的检测绿色荧光蛋白（green fluorescenc eprotein,GFP）转基因裸鼠血液生理生化指标,为将来的研究提供基础参考值。方法实验选用6～8周GFP转基因裸鼠及对照组BABL／C裸鼠雌雄各30只,取血测定血生化和血常规指标。结果①GFP转基因裸鼠与对照组BABL／C裸鼠比较,白细胞总数（WBC）、尿素（URE）、平均血红蛋浓度（MCHC）、葡萄糖（GLU）差异极显著（P〈0．01）;血红蛋白（HGB）、红细胞分布宽度（RDW）、血小板计数（PLT）、尿酸（uA）差异显著（P〈0．05）,其它指标差异不显著。②GFP转基因裸鼠雌雄间比较,红细胞分布宽度（RDW）、平均血红蛋白含量（MCH）、平均血红蛋浓度（MCHC）、血小板计数（PLT）、球蛋白（G）、胆固醇（TC）、HDL-胆固醇（HDL—TC）差异极显著（P〈0．01）,白蛋白（ALB）、葡萄糖（GLU）差异显著（P〈0．05）,其它指标差异不显著。结论转基因GFP转基因裸鼠的生理生化指标值在雄雌间有一定的差异,为相关的生物医学研究提供了基础数据。