家兔支气管败血波氏杆菌重组百日咳杆菌粘附素（PRN）蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

目的表达支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列（AY376325）设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pGEX-4T-1中,以E.coli BL21（DE3）为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白PRN作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等,建立检测支气管败血波氏杆菌抗体的间接ELISA方法。结果成功克隆了prn全基因序列,并在E.coliBL21（DE3）中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白PRN具有良好的抗原性。应用重组蛋白PRN为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白PRN抗原的包被浓度为500ng/mL,最适血清稀释度为1∶40。结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。     

GFP转基因裸鼠脾脏组织学观察

目的探讨GFP基因导入对BALB/c荧光裸鼠脾脏组织学及免疫功能的影响。方法取不同日龄（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）BALB/c荧光裸鼠及BALB/c普通裸鼠各32只,雌雄各半,处死取脾脏,对脾脏的绝对重量、脾脏指数进行测量分析,对脾脏的组织学改变进行观察,并对脾脏淋巴细胞数进行统计分析。结果与14日龄荧光裸鼠相比,28日龄荧光裸鼠脾脏指数明显较高（P〈0.05）。与14日龄荧光裸鼠相比,49日龄、70日龄荧光裸鼠淋巴细胞数明显变少（P〈0.05）。与普通裸鼠（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）相比较,相同日龄荧光裸鼠（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）淋巴细胞数明显减少（P〈0.05）。结论 GFP基因对不同日龄荧光裸鼠的脾脏发育及其功能有一定影响。     

兔支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立及应用

目的建立一种简便、快速、敏感、特异的适用于支气管败血波氏杆菌的PCR检测方法。方法根据兔支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica）的fim2基因序列设计了一对特异性引物，进行PCR扩增、特异性和敏感性试验，并将其应用于临床样品的检测。结果利用该PCR方法扩增出425bp的目的基因片段，该产物序列与GeneBank上公布的基因序列同源性为100％。特异性试验表明，该方法对大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌、魏氏梭菌和金黄色葡萄球菌均无交叉性反应；并且最小可检出菌液浓度为3．6CPU。用该PCR方法检测了从江苏、山东等地采集的146份兔鼻拭子，结果检出支气管败血波氏杆菌阳性92例，阳性率为63．01％。结论建立了快速检测支气管败血波氏杆菌的PCR方法。     

不同术式对雌兔内分泌和骨代谢的影响

目的观察不同子宫、卵巢切除术式对兔术后早期内分泌激素和骨代谢的影响。方法45只健康成年雌兔随机分为5组,Ⅰ组：单纯子宫全切除组;Ⅱ组：子宫全切＋单侧卵巢切除组;Ⅲ组：子宫全切＋双侧卵巢切除组;Ⅳ组：双侧卵巢切除组;Ⅴ组：对照组。测量术前、术后1、2、3个月的体重、雌二醇（E2）、甲状旁腺素（PTH）、血钙、血清碱性磷酸酶（ALK）和骨密度（BD）。结果术后第2、3个月,Ⅲ组、Ⅳ组出现烦躁不安和体重减轻的实验兔要显著高于Ⅰ组和Ⅱ组;术后第2个月,Ⅱ组E2浓度（17．66±6．06）pg／mL,显著降低,术后第3个月,血钙增高（3．86±0．11）mmol／L,第2椎骨骨密度显著降低,与对照组相比（P〈0．05）,有显著差异;Ⅱ组术后第3个月PTH增高,但与对照组相比无显著差异（P〉0．05）。Ⅲ组、Ⅳ组术后第2个月起,E2、PTH、血钙、ALT和BD,与对照组相比均有显著改变。结论子宫切除术会影响雌兔内分泌的变化,只保留单侧卵巢时不能维持相应的正常生理功能。     

先天性白内障大鼠血液生化及血液流变学分析

目的：测定先天性白内障大鼠血液常规、生化正常值及血液流变学变化。方法采用XS-800i血常规分析仪和OLYMPUS AV2700生化自动分析仪对185～211 g大鼠共计90只进行血液常规和生化检测及用SA-6600自动血流变测试仪对血液进行流变学的测定。结果血像检测结果是白内障与正常对照同性比较无差异显著性（P ＞0.05）;小眼白内障与正常对照同性比较红细胞宽度（RDW）间差异显著（P ＜0.01或 P ＜0.05）。血生化检测结果是白内障大鼠与正常对照组同性间比较白蛋白（ALB）差异显著（P ＜0.01或P ＜0.05）雌性与对照组比较尿素（Ure）差异显著（P ＜0.01）,小眼白内障雌性与正常对照比较肌酐（Cr）差异非常显著（P ＜0.01）。白内障、小眼白内障大鼠的红细胞是雄性的低于雌性（P ＜0.05,P ＜0.01）而血小板是雄性的高于雌性（P ＜0.01）,肌酐是雄性低于雌性P ＜0.01）,正常组雄雌间无差异;血液流变学各组间无差异显著性。结论白内障大鼠与正常组大鼠间某些血常规及生化指标有一定的差异,该数据为该鼠在这领域的使用提供参考。     

GFP在绿色荧光裸鼠不同组织中的表达及分析

目的研究外源绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,简称GFP）基因在BALB/c绿色荧光裸鼠主要器官组织中的表达及其差异。方法小动物成像系统和RT-PCR方法检测GFP的组织分布以及荧光表达水平情况。结果经活体荧光影像系统观察及PCR方法检测发现GFP可以在裸鼠多个器官组织中表达,其中在胰腺、心脏、全脑、皮肤、睾丸中表达量较高。结论外源绿色荧光蛋白可以在模型动物体内成功表达且稳定遗传,其中在胰腺组织中高表达。     

转基因EGFP小鼠的主要脏器重量及脏器系数

目的测定转基因C57BL／6-Tg（ACTB—EGFP）1osb／J（EGFP）小鼠主要脏器重量和脏器系数。方法实验选用5～6周雄性、6～7周雌性小鼠各15只，用sartorius电子天平分别测定体重和9个主要脏器重量，计算脏器系数，并对雌雄脏器重量和脏器系数之间进行比较。结果雌雄小鼠脏器重量间比较，雄性鼠体重明显大于雌性的体重（P〈0．01）；心、肝、肺、肾、肾上腺的重量间差异极显著（P〈0．01）；脾脏比较差异显著（P〈0．05）；雌雄间脏器系数比较，肺、脑、肾上腺间差异极显著（P〈0．01），心、肝、脾、肾脏间差异不显著（P〉0．05）。结论转基因EGFP小鼠不同性别间脏器重量及脏器系数间有一定的差异，为相关研究打下了基础。     

不同品种实验兔血液流变学特性

目的分析比较市售中国白兔与我院自繁培育的封闭群新西兰白兔血液流变学特性的差异。方法采集新西兰白兔和中国白兔的血液样品,分别检测比较其WBV（高、中、低切变率）、PV、HCT、ESR等14项血液流变学指标。结果 （1）新西兰白兔与中国白兔不同性别间血液流变学特性没有显著性差异（P〉0.05）;（2）新西兰白兔和中国白兔血液流变学指标中,血浆粘度ηP,还原粘度低切Rls,还原粘度中切Rms,还原粘度高切Rhs及红细胞电泳指数RIE5个指标间有显著差异（P〈0.05）。其余9项指标差异不显著（P〉0.05）。结论实验兔的血液流变学特性与品种有一定的相关性。     

玩具对小鼠生长发育及繁殖性能的影响

目的：探讨玩具对实验小鼠生长发育及繁殖性能的影响。方法选取7-8周龄ICR小鼠,在生产过程中加入玩具进行干预,观测其对小鼠生长发育及繁殖性能方面指标的影响。结果除产仔数外,实验组各项繁殖性能指标均优于对照组,且差异显著（ P ＜0.05）。并且随干预时间延长,差异的显著性有进一步增加的趋势。实验组小鼠的生长发育水平相比于对照组有明显变化,且表现出有随干预时间延长而产生差异的趋势,但目前尚无统计意义（ P ＞0.05）。结论玩具对ICR小鼠的生长发育及繁殖性能有一定程度的积极影响,在小鼠的生产和饲育过程中值得借鉴。