大鼠仙台病毒ELISA、间接免疫荧光和免疫印迹三种检测方法比较

目的比较ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）、IFA（immuno-fluorescence assay）和WB（Western blot）三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELISA方法对20份无菌大鼠、227份SPF大鼠以及63份清洁级大鼠送检血清样品进行检测,阳性及可疑样品用WB方法进行了验证。结果 20份无菌大鼠血清样品被3种方法检测为仙台病毒抗体阴性;SPF级大鼠样品被IFA方法判定为阴性,1.32%（3/227）被ELISA方法判定为阳性,其中有2/3被WB确认为阳性;ELISA、IFA和WB在清洁级大鼠样品中检出仙台病毒的阳性率分别为为18.12%、11.34%和15.87%。结论三种检测方法灵敏度从高到低依次为ELISA、WB和IFA。WB方法可作为IFA和ELISA难以确定结果的替代方法。     

大鼠细小病毒H-1株培养方法的建立

目的建立用大鼠胶质瘤细胞系（Rat glial cell line C6）替代大鼠原代胚细胞（primary rat embryocells,RE）培养大鼠细小病毒（Toolan virus,H-1）的方法。方法 将0.8 mL H-1病毒接种C6细胞（75T培养瓶,细胞接种量为2×105/mL,培养过夜）,待细胞病变CPE达＋＋～＋＋＋时,用免疫荧光（FITC）鉴定所培养病毒的抗原,用血球凝集试验（HA）测定培养物上清效价,用DNA测序鉴定所培养的病毒,用96孔板培养法测定H-1病毒的TCID50。结果H-1在接种到C6细胞的第3～4天,细胞发生明显的病变,CPE可达＋＋＋＋,FITC鉴定呈H-1抗原阳性,病毒的培养上清中HA效价为1∶320。测序结果表明：该病毒序列与NCBI中H-1序列同源性达99%,确定为H-1病毒。收获的H-1的TCID50为103.2/0.1 mL。结论用大鼠胶质瘤细胞系（C6）可以替代大鼠原代胚细胞（RE）进行大鼠细小病毒的培养。     

无菌兔、SPF兔和普通兔脏器系数的比较

目的对普通级新西兰兔进行剖宫产,获得无菌兔,比较无菌兔、SPF兔和普通级兔的脏器系数。方法采取剖宫产手术获得无菌兔,在无菌隔离器内人工哺乳饲养。用电子天平和刻度尺测量无菌兔、SPF兔和普通兔心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑等脏器的脏器重量和长度,计算脏器系数。结果经检测无菌兔符合国家标准;无菌级、SPF级和普通级新西兰兔在左颌下腺、右颌下腺、心脏、肺、胆囊、脾脏、左肾上腺、右肾上腺、子宫＋卵巢、左睾丸、胃长、蚓突长度、盲肠长度、盲肠总重、盲肠干重、胃总重、胃干重等17项指标差异显著（P〈0.05）;脑、肝脏、左肾、右肾、胰脏、右睾丸、胃宽、小肠长度、直肠长度、大肠长度等10项指标差异不显著（P〉0.05）。结论不同等级微生物环境对新西兰兔脏器系数有显著影响。     

实验动物产生波动性不对称的影响因素

饲养方式、社会环境和化学污染是影响动物发育不稳定的重要环境胁迫因素,会使动物种群的适应和竞争能力等指数降低。而波动性不对称FA（Fluctuating asymmetry）的水平可用来指示某一种群对这种环境压力的进化和适应能力。FA的测量方法比常规的参数更加灵敏,而且可将环境压力的影响定量化,同时其测定和分析都比较简单,不需要昂贵的设备和试剂,使研究和监测成本大大降低。     

小鼠仙台病毒ELISA抗体检测规范化试剂盒的研制与应用

目的按照实验动物国家标准和农业部对于兽医诊断制品的要求研制小鼠仙台病毒抗体检测试剂盒,并在临床检测中分析其适用性。方法建立仙台病毒的种子批和BHK-21细胞的细胞库;标化仙台病毒生产工艺、抗原蛋白纯化工艺;优化ELISA反应板体系;标化质控血清。使用规范化的ELISA试剂盒对我单位672份送检血清样品进行检测,使用IFA和Western blot方法进行复检。结果病毒的种子批检验表明在-80℃保存半年以上毒力稳定;病毒生产和抗原纯化工艺的标准化提高了抗原生产的稳定性;对照体系的设定降低了环境等变量对于结果判定的影响。在对临床样本的检测过程中发现3种方法的灵敏度ELISA高于Western blot高于IFA。结论规范化的小鼠仙台病毒ELISA抗体检测试剂盒能对小鼠仙台病毒感染状况作出准确判断,具有一定的稳定性和结果可重复性。     

实验兔三个封闭群微卫星DNA多态性遗传分析

目的 对日本大耳白兔、青紫蓝兔、新西兰兔三个封闭群体开展群体遗传学分析.方法 利用10个微卫星位点,进行Hardy-Weinberg平衡(HWE)检验,统计三个种群的基因频率、观测杂合度、期望杂合度、F值和遗传距离.结果 青紫蓝品种在12L1E11位点,新西兰品种在INRACCDDV0087位点与INRACCDDV0203位点,日本大耳白兔在Sat12位点与INRACCDDV0203,P＜0.05,显著偏离HWE,多数表现为杂合子缺陷;三个群体在Sat13、So144、6L1F10、7L1F1、12L4A1、INRACCDDV0016点上均符合HWE;各位点平均等位基因数5.9,种群整体基因频率差别较大,其范围为0 -0.9060;三个种群的平均观测杂合度为0.6204,平均期望杂合度为0.6178;群体间分化系数(Fst)平均为0.0750,日本大耳白兔和青紫蓝兔遗传距离最近为0.1223,青紫蓝兔与新西兰兔遗传距离最远为0.1934.结论 三个种群的遗传结构均表现出遗传稳定性和均一性,在10个微卫星位点上呈现高度多态性,种群间遗传分化明显.     

实验动物的环境与福利

实验动物在生物科学研究领域中的应用不断发展,其饲养环境和福利保障的问题已越来越被国际所关注。实验动物的环境与福利不仅是对动物本身的保护,更重要的是对动物试验结果的保证。本文详细论述了大环境（温度、湿度、气流等方面）及小环境（笼具、饲养密度、垫料）对实验动物福利的影响,通过总结国内外的研究概况,旨为我国改善和提高实验动物的福利提出一些思路。     

无菌大鼠血液学及血液生化指标正常参考值的测定

目的人工培育Wistar无菌大鼠,观测F1和F2代无菌大鼠血液学及血液生化指标差异。方法对清洁级Wistar大鼠进行子宫摘除,隔离器内剥离子宫壁获得大鼠胎仔,人工哺育为无菌大鼠。待其繁殖后,采用全自动血液生化分析仪、全血细胞计数仪测定F1和F2代无菌大鼠的血液学及血液生化指标。结果不同代数无菌大鼠的血液学和血液生化指标存在显著差异,其中有差异的血液学指标包括RBC、HGB、HCT、MCV、MCHC、RDW、MPV、NE%、LYM%、EO%、BA%、NE#、LYM#、EO#、BA#（P〈0.05）;有差异的血液生化指标包括ALT、ALB、LDH、CHO、TBIL、HDL-C、LDL-C、GLO、GLU、ALP、A/G、UA、P（P〈0.05）。同时这些差异又因性别和年龄而不同。结论代数、性别、年龄对无菌大鼠的血液学及血液生化指标有较大影响。     

SPF级与普通级新西兰兔血液学参数的比较

目的对普通级新西兰兔进行剖宫产,获得SPF兔,比较SPF兔和普通级兔血液学参数。方法采取剖宫产手术培育成无菌兔,接种正常寄生菌使之SPF化。耳缘静脉采血,自动生化分析仪测定SPF兔、普通级兔血液学参数。结果经检测SPF兔符合国家SPF兔标准;SPF兔和普通级新西兰兔白细胞数、血红蛋白、红细胞容积、中性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比、嗜碱性粒细胞百分比、中性粒细胞数、单核细胞数、嗜酸性粒细胞数、嗜碱性粒细胞数、总蛋白、球蛋白、白蛋白/球蛋白、谷酰转肽酶、葡萄糖、钙、高密度脂蛋白胆固醇等参数差异极显著（P〈0.01）;血小板数、淋巴细胞百分比、肌酐差异显著（P〈0.05）;红细胞数、平均红细胞体积、平均血红蛋白含量、平均血红蛋白浓度、红细胞体积分布宽度、平均血小板体积、单核细胞百分比、淋巴细胞数、白蛋白、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素、碱性磷酸酶、尿素氮、尿酸、磷、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、磷酸肌酸激酶、乳酸脱氢酶差异不显著（P〉0.05）。结论不同等级微生物环境对新西兰兔血液学指标有显著影响。     

实验动物设施及环境钠式试剂法测定空气中氨浓度的修改建议

我们在日常实验动物设施建设和环境控制检测中发现《实验动物设施及环境GB 14925-2001》附录中对于按其浓度的检测方法存在缺陷,动态检测氨浓度指标,通常在1～7 mg/m^3范围之内,极少有出现在7～14 mg/m^3的情况。在此提出来供参考。