CD105 shRNA对激光诱导的脉络膜新生血管的干预作用及其机制

目的:观察CD105shRNA对激光诱导的大鼠脉络膜新生血管的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:40只BN大鼠单眼采用半导体激光建立CNV模型。随机取20只大鼠于建模后1天使用Pgenesil-eng2转染大鼠视网膜和脉络膜作为实验组。在建模后第14天行FFA检查,观察实验组与对照组视网膜激光斑的渗漏情况。各取5只实验组和5只对照组大鼠,行脉络膜铺片,检测并比较脉络膜新生血管渗漏面积。另32只BN大鼠任取一眼建立CNV模型,其中任取20只大鼠于建模后次日进行Pgen-esil-eng2转染,作为实验组。12只建模眼作为对照组,未建模眼作为空白对照组。于基因转染后1w,2w,3w和4w各取5只实验组大鼠和3只对照组大鼠眼球,获取每个时间点实验组、对照组和空白对照组的脉络膜组织。检测各组每个时间点CD105和VEGF在mRNA水平的表达。结果:FFA显示光凝后第14天时,对照组的渗漏率为63.2%,实验组为24.6%。实验组的BN大鼠眼底渗漏点数较对照组少,渗漏强度较弱。两组间比较有显著性差异。脉络膜铺片结果显示:2周时对照组大鼠的CNV面积为(31.22±1.46)×103μm2,实验组大鼠的CNV渗漏面积为(14.46±0.82)×103μm2,两组间比较有显著性差异。RT-PCR结果显示:实验组VEGF mRNA及CD105 mRNA的表达变化规律与对照组相似,但各个时间点的表达量较对照组均明显下降,其中实验组VEGFmRNA于2w时的表达约为对照组的36.7%;实验组CD105 mRNA在第2w时约为对照组的21.68%。结论:通过沉默CD105基因的表达可以抑制大鼠CNV的生成,下调VEGF的表达可能是其作用机制之一。CD105基因有望成为CNV的基础研究热点和临床治疗的新靶点。     

激光诱导大鼠CNV形态变异性的体内和体外特性研究

532 nm激光光凝是诱导啮齿类动物脉络膜新生血管(CNV)的一种既定方法。本研究旨在评价激光诱导CNV在体内和体外随时间变化的形态变异程度,为今后CNV相关研究提供观察指标。本实验首先对棕色挪威(BN)大鼠进行激光造模,随后,根据不同时间点对其进行体内眼底照相、光学相干断层扫描(OCT)、眼底荧光血管造影(FFA)和吲哚菁绿血管造影(ICGA),最后,应用组织病理检查进行体外验证。结果发现,光凝后第7天出现CNV,第21天的CNV总发生率最高。FFA呈典型圆盘状强荧光渗漏,ICGA显示光凝区周边强荧光,中央低荧光,呈花环状形态。光学显微镜下可见,造模后第7天,视网膜下CNV形成,第7~21天,CNV中央厚度逐渐增加,第28天,CNV中央厚度保持相对稳定。这提示,532 nm激光诱导BN大鼠CNV模型造模时间短,成功率高。这种造模方式可以广泛应用于临床前实验研究,为进一步研究CNV发病机制提供了思路。     

白介素-1受体拮抗剂抑制角膜新生血管及血管内皮生长因子表达的研究

为了探讨白介素-1受体拮抗剂(interleukin 1 receptor antagonist,IL_1ra)对大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及其对CNV生长的作用,采用角膜缝线法建立大鼠CNV模型,分成正常对照组、单纯角膜缝线组和缝线加IL_1ra结膜下注射组三组,于术后1w、2w分别计算各组CNV面积,观察CNV生长情况;术后1w各组随机处死4只大鼠,取角膜组织采用RT_PCR检测VEGF的表达。结果表明,正常对照组无CNV生长,VEGF低表达;单纯缝线组CNV生长旺盛,VEGF高表达,CNV面积、VEGF mRNA相对吸光度值与其他两组相比有极显著差异(p<0.01);IL_1ra组CNV生长稀疏,VEGF表达较低,但仍高于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.01)。     

姜黄素抑制小鼠脉络膜新生血管的实验研究

目的：观察姜黄素对激光诱导的小鼠脉络膜新生血管（choroidalneovascularization,CNV）形成的影响。方法：60只雄性C57BL／6小鼠,随机分为对照组、10mg／kg姜黄素治疗组、30mg／kg姜黄素治疗组,每组20只。采用激光诱导产生小鼠CNV模型。由光凝前3天开始,至光凝后14天,两个治疗组每天分别给予腹腔注射相应剂量的姜黄素,对照组腹腔注射二甲亚砜溶液（溶剂）。光凝后第3天通过免疫组化和ELISA检测血管内皮生长因子（vesselendothelialgrowthfactor,VEGF）的表达;第14天通过组织学检查以及荧光素标记的葡聚糖的血管灌注检测CNV的面积,荧光血管造影评价CNV的渗漏程度。结果：光凝后第14天,组织学检查显示姜黄素能够有效缩小激光诱导的CNV;荧光素标记的葡聚糖血管灌注后测量色素上皮-脉络膜铺片上CNV的面积,和对照相比,姜黄素能显著减小激光诱导的CNV的面积（P〈0．05）;荧光血管造影显示姜黄素能有效抑制CNV的渗漏（P〈O．05）。和10mg／kg姜黄素治疗组相比,30mg／kg姜黄素治疗组小鼠CNV面积缩小和渗漏程度减弱（P〈0．05）。光凝后第3天,VEGF免疫组化和ELISA结果显示姜黄素显著抑制色素上皮一脉络膜复合体中VEGF（P〈0．01）的表达,高刺量组有更强的抑制作用（P〈0．01）。结论：姜黄素可以有效地抑制小鼠CNV的形成,下调VEGF的表达可能是姜黄素抑制CNV的作用机制之一。因此我们推测姜黄素对并发CNV的AMD患者可能具有治疗作用。     

MEF2C在湿性年龄相关性黄斑变性中的表达及其对脉络膜新生血管和巨噬细胞极化的影响

摘要 目的：揭示肌细胞增强因子2C（MEF2C）在湿性年龄相关性黄斑变性（AMD）中的表达及其对脉络膜新生血管（CNV）和巨噬细胞极化的影响。方法：通过qRT-PCR法检测30例湿性AMD患者（AMD组）和30例健康体检者（健康对照组）的血清MEF2C水平。将MEF2C过表达慢病毒（MEF2C-LV组）和阴性对照过表达慢病毒（NC-LV组）转染至恒河猴脉络膜血管内皮细胞系（RF/6A）。转染后,将RF/6A细胞分为常氧组（Normoxia组）、低氧组（Hypoxia组）、低氧+NC-LV组（Hypoxia+NC-LV组）、低氧+MEF2C-LV组（Hypoxia+MEF2C-LV组）。转染及缺氧处理后,分别测定各组细胞进行Matrigel小管。通过激光诱导CNV C57BL/6J小鼠模型,将建模成功的C57BL/6J小鼠随机分为模型组、NC-LV组和MEF2C-LV组,每组10只,未建模的小鼠作为对照组。然后对NC-LV组和MEF2C-LV组小鼠玻璃体腔注射NC-LV或MEF2C-LV,对照组和模型组小鼠不进行治疗。治疗7 d后进行眼底荧光血管造影（FFA）和眼球苏木精伊红（HE）染色。通过qRT-PCR和Western blot检测MEF2C、VEGFA、VEGFR2、IL-12p35、IL-12p40和IL-10的mRNA和蛋白表达。结果：与Healthy组相比,AMD组患者的血清MEF2C水平显著降低（1.00±0.23 vs 0.48±0.29,t=7.689,P<0.001）。与Normoxia组相比,Hypoxia组的闭合管腔数量增加（P<0.05）。与Hypoxia组相比,Hypoxia+MEF2C-LV组的闭合管腔数量减少（P<0.05）。与模型组相比,MEF2C-LV组视网膜和脉络膜病变程度减轻,结构基本恢复正常,脉络膜组织厚度降低,血管生成减少。与模型组相比,MEF2C-LV组的CNV相对荧光强度降低,脉络膜组织中MEF2C、VEGFA和VEGFR2的mRNA和蛋白表达水平均降低（P<0.05）。与模型组相比,MEF2C-LV组脉络膜组织中IL-12p35和IL-12p40的mRNA和蛋白表达水平均升高,IL-10均降低（P<0.05）。结论：MEF2C在湿性AMD患者血清中低表达,上调MEF2C可抑制脉络膜血管生成,并促进巨噬细胞从M2型向M1型的转换。     

年龄相关性黄斑变性患者黄斑区脉络膜新生血管特征分析

目的:探讨年龄相关性黄斑变性黄斑区脉络膜新生血管(CNV)的特征。方法:对41例(41只眼)年龄相关性黄斑变性患者CNV进行荧光素眼底血管造影(FFA)和相干光断层扫描(OCT)检查,并对两种不同的图像检查结果进行对比分析。结果:FFA发现典型CNV29眼,FFA早期黄斑区可见边界清晰的高荧光区,FFA晚期荧光扩大并增强;隐匿型CNV10眼,FFA早期可见边界欠清的强荧光,FFA晚期持续为荧光素渗漏或染色,边界多不清晰。OCT发现典型CNV33眼,显示CNV多位于视网膜神经上皮层下,呈边界清晰的纺锤形或圆形强反射,隐匿型CNV8眼,表现为视网膜色素上皮层平面不规则增强紊乱的反射信号。两种检查对黄斑区CNV的检出率对比差异无统计学意义(P0.05)。结论:结合FFA和OCT的图像特征对年龄相关性黄斑变性黄斑区脉络膜新生血管形态学改变进行对比分析,有助于明确病变的性质,为临床诊疗提供帮助。     

PDE2A通过影响脉络膜血管生成和NADPH氧化酶/ROS/NF-κB通路参与年龄相关性黄斑变性

摘要 目的：探究磷酸二酯酶2A（Phosphodiesterase 2A,PDE2A）在年龄相关性黄斑变性（Age-related macular degeneration,AMD）中的可能作用及其对脉络膜新生血管（Choroidal neovascularization,CNV）形成的影响。方法：通过qRT-PCR法检测36例湿性AMD患者（AMD组）和36例健康体检者（Healthy组）的血清PDE2A水平。将恒河猴脉络膜血管内皮细胞系（RF/6A）分为Normoxia组、Hypoxia组、Hypoxia+NC组、Hypoxia+PDE2A组。使用Lipofectamine2000分别将NC-shRNA和PDE2A-shRNA慢病毒转染入Hypoxia+NC组和Hypoxia+PDE2A组,转染后,根据分组情况,在RPMI 1640培养基中添加200 mM CoCl₂来对RF/6A细胞进行低氧处理。建立了激光诱导的CNV小鼠模型后,将36只建模成功的小鼠随机分为Model组、NC-shRNA组和PDE2A-shRNA组,每组12只。选取12只未建模的小鼠作为Control组。分别对NC-shRNA组和PDE2A-shRNA组小鼠玻璃体腔注射相应慢病毒,共治疗7 d。然后对小鼠进行眼底荧光血管造影（fundus fluorescein angiography,FFA）检查和眼球HE染色。使用相应试剂盒检测小鼠脉络膜组织中ROS、SOD、MDA的含量。通过qRT-PCR或Western blot检测RF/6A细胞或脉络膜组织中PDE2A、VEGFA、VEGFR2、HIF-1α、NOX2、NOX4和NF-κB p65的表达。结果：与Healthy组相比,AMD组患者的血清PDE2A水平显著升高（1.00±0.23 vs 3.09±1.46, P<0.001）。与Hypoxia组相比,Hypoxia+PDE2A组RF/6A细胞的闭合管腔数量减少（P<0.05）,PDE2A、VEGFA、VEGFR2和HIF-1?琢的mRNA和蛋白表达水平均降低（P<0.05）。与Model组相比,PDE2A-shRNA组CNV小鼠脉络膜病变明显减轻,血管生成和脉络膜增明显减少,CNV相对荧光强度降低（P<0.05）,脉络膜组织中的PDE2A、VEGFA、VEGFR2和HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平均降低（P<0.05）。与Model组相比,PDE2A-shRNA组小鼠脉络膜组织中的ROS和MDA含量均降低,SOD含量升高（P<0.05）。与Model组相比,PDE2A-shRNA组小鼠脉络膜组织中的NOX2、NOX4和细胞核NF-κB p65蛋白相对表达量均降低（P<0.05）。结论：PDE2A通过影响脉络膜血管生成和NADPH氧化酶/ROS/NF-κB通路参与年龄相关性黄斑变性。     

壳聚糖纳米基因载体介导IL-10和HGF基因重组体在大鼠活体肝移植中的研究

目的：研究hIL-10和HGF重组体对大鼠活体肝移植术后急性排斥反应的抑制作用。方法：以DA大鼠（RT1a）为供体．Lewis大鼠（RT11）为受体建立异种肝移植鼠模型,实验组于移植后1天及7天,腹腔内注射T—HGF和T-hIL-10重组体（100μg／ml）100μl,对照组注射等量生理盐水。移植后1,7,10,20天取大鼠尾静脉血,ELISA法测定血清HGF、IL-10水平,RT-PCR测定肝细胞HGF、IL-10m RNA的表达水平,常规肝功能测定,活体肝移植动物生存期观测。结果：实验组鼠肝细胞有HGF和IL-10 mRNA表达,对照组肝细胞未见表达。对照组大鼠HGF和IL-10水平一直维持在较低水平,实验组大鼠HGF和IL-10水平明显高于对照组（P〈0．05）。注射重组体的实验组平均生存时间为（19±0．9）天,20天时存活只数为6只,存活率75％;对照组平均生存时间为（8．6±0．5）天,20天时存活只数为2只,存活率75％（P〈0．05）。对照组未注射重组体,ALT和AST值持续升高,注射重组体后ALT和AST值亦有升高,但明显低于对照组（p〈0．05）。结论：活体肝移植大鼠导入IL—10和HGF基因重组体后可抑制移植术后急性排斥反应．     

miR-21对心肌缺血大鼠心肌细胞TLR-4/NF-κB通路的影响

摘要 目的：探究微小核糖核酸-21（miR-21）对心肌缺血大鼠心肌细胞Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路的影响。方法：取40只SD大鼠随机分为假手术组（10只）和建模组（30只）,建模组大鼠通过左冠状动脉前降支（LAD）结扎术建立心肌缺血大鼠模型,假手术组大鼠仅开胸后不做其他处理即缝合。将建模成功大鼠随机分为对照组（转染miR-NC慢病毒）、沉默组（转染miR-21 antagomir慢病毒）、过表达组（转染miR-21 mimics慢病毒）,假手术组注射等量生理盐水。苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织损伤情况;原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹法（WB）检测TLR-4、NF-κB、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2关联X蛋白（Bax）信使核糖核酸（mRNA）和蛋白表达及磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）水平。结果：对照组大鼠心肌纤维排列紊乱,大量心肌细胞肿胀坏死并伴随炎症细胞浸润,沉默组大鼠心肌组织损伤情况进一步加重,而过表达组大鼠心肌组织损伤现象得到明显改善。与假手术组比,对照组、沉默组、过表达组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平升高,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）;与对照组比,沉默组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA表达与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平升高,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）,过表达组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平降低,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达升高（P＜0.05）。结论：下调miR-21表达可促进TLR-4/NF-κB通路表达,加重心肌缺血大鼠心肌损伤。     

急性肺损伤大鼠肺组织TOLL样受体4及CD14mRNA的表达

目的 探讨内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织TOLL样受体4及CD14 mRNA表达的变化.方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为2组:对照组、LPS模型组,每组再分为4 h和8 h两个亚组.尾静脉注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg)建立大鼠急性肺损伤模型.检测大鼠动脉血气、肺体指数,实时荧光定量PCR测定肺组织TOLL样受体4及CD14 mRNA的表达,并观察肺组织病理变化.结果 与对照组相比,模型组4 h和8 h时大鼠肺组织中的TLR4及CD14 mRNA表达均显著增高(P＜0.05或P＜0.01).病理学观察显示,模型组大鼠肺组织出现出血及坏死.结论 内毒素致急性肺损伤的发病机制可能与TLR4及CD14 mRNA的表达升高有关.     

两种萤火虫荧光素酶活性检测方法的一致性比较

目的：比较2种萤火虫荧光素酶活性检测方法的一致性。方法：分别采用化学发光技术（Che）及活体光学成像技术（Bio）,从细胞和动物水平检测在转染以萤火虫荧光素酶为报告基因的载体pCI-AAA-Fluc-neo后不同时间点,萤火虫荧光素酶的表达强度。结果：在细胞和动物水平,萤火虫荧光素酶的表达强度均随时间推移逐步递减。在HepG2细胞,萤火虫荧光素酶表达持续96h,活性从24h的2781±220mV（1．6×10^6±2．3×10^5光子）降至96h的49±3．5mV（6．4×10^4±2．5×10^4光子）。在动物水平得到相似的结果,BALB／c小鼠萤火虫荧光素酶表达持续20d,其活性从1d的16592±409mV（1．9×10^8±3．6×10^6光子）降至20d的798±139mV（3．37×10^5±3．8×10^4光子）。通过一致性检验,2种检测方法在细胞和动物水平的直线回归方程分别为lgChe=1．186·lgBio-3．764（r=-0．937,P〈0．001）和lgChe=0．451·lgBio＋0．64（r=0．915,P〈0．001）;进一步将理论数据与实验数据进行配对t检验,二者无统计学差异（P〉0．05）。结论：2种检测方法是一致的;从整个实验过程来看,活体光学成像技术较化学发光法更为简便、直观,可量化地对同一个体连续检测,减少了个体间差异和实验动物用量。     

不同荧光定量PCR分析方法检测大鼠脑缺血再灌注损伤中Caspase-3基因的表达研究

目的:应用实时荧光PCR检测大鼠脑缺血/再灌注损伤组织中的Caspase-3基因表达变化,并比较了相对定量与绝对定量分析方法的技术优劣.方法:相对定量实验中,以β-actin基因作为内参,采用Delta-delta Ct法计算目的基因表达变化.而在绝对定量实验中,构建了含Caspase-3基因的重组质粒,以该重组质粒作...     

巨噬细胞对新生隐球菌主要毒性基因表达的影响

目的研究巨噬细胞对新生隐球菌B3501标准株的主要毒性基因表达影响。方法将对数生长期的J774．16巨噬细胞分别与新生隐球菌野生株B3501共孵育4h,收集被J774．16吞噬的B3501作为实验组,提取实验组和在37℃条件下5％二氧化碳单独培养的对照组B3501的RNA,采用实时荧光定量PCR技术,检测J774．16细胞内和对照组B3501的CNLAC1、CAP60、URE1、NMT表达的差异。结果实验组中新生隐球菌的CAP6,CNLAC1,NMT及URE1基因的mRNA在每百万看家基因（GAPDH基因）中的平均含量分别为（2．698±0．084）×10^4,（1．806±0．322）×10^4,（2．267±0．074）×10^4和（4．041±0．271）×10^4;而对照组这4种毒性因子基因含量分别为：（1．139±0．183）×10^6,（9．324±5．028）×10^3,（1．326±0．028）×10^6和（1．307±0．001）×10^6,均远比实验组高,其中以NMT最为明显。结论新生隐球菌被巨噬细胞吞噬后,主要的毒性因子基因表达下降,其中以NMT最为明显,而CNLAC1下降幅度最小。     

纯化自体外周血CD34^＋细胞移植治疗肢体重度缺血的中期疗效

目的探讨纯化CD34^＋细胞移植治疗肢体重度缺血的中期疗效。方法自2009年5月至2011年12月录入30例肢体重度缺血患者,男性29例,女性1例,平均年龄43 ± 12岁（23 - 75岁）,均不具备外科血管重建条件,共治疗31条下肢和4条上肢。G-CSF（5-10μg/kg）动员,第5天采集外周血单个核细胞,分选获得纯化CD34^＋细胞,肢体肌肉局部注射。根据移植细胞数分为3组：低剂量组（105/kg）、中剂量组（5 × 105/kg）和高剂量组（106/kg）。结果随访16 - 48个月,1个月和2个月时Wong-Baker FACES疼痛评分由术前7 ± 2降到3 ± 3（P〈 0.001）和1 ± 2（P〈 0.001）。术后3个月和6个月：最长无痛步行时间由术前的（5 ± 3）min分别延长至（12 ± 6）min（P〈 0.001）和（19 ± 5）min（P〈 0.001）;踝肱指数由术前的0.44 ± 0.20提高至0.62 ± 0.18（P= 0.04）和0.66 ± 0.14（P〈 0.001）;经皮氧分压由术前（26 ± 11）mmHg分别上升至（42 ± 11）mmHg（P 〈 0.001）和（56 ± 12）mmHg（P〈 0.001）。16例溃疡患者愈合11例。Kaplan Meier生存分析法计算16个月保肢率为84﹪（95﹪可信区间为0.63 - 0.94）。3个不同剂量组之间的比较,治疗效果差异无统计学意义,除了1个月时WFPRSC检测结果显示：高剂量组明显优于低、中剂量组。结论纯化自体外周血CD34^＋细胞移植治疗肢体重度缺血性疾病安全、可行,能够较为持久地缓解缺血,挽救肢体,改善患者生活质量。     

Targeted decorin gene therapy delivered with adeno-associated virus effectively retards corneal neovascularization in vivo

Decorin, small leucine-rich proteoglycan, has been shown to modulate angiogenesis in nonocular tissues. This study tested a hypothesis that tissue-selective targeted decorin gene therapy delivered to the rabbit stroma with adeno-associated virus serotype 5 (AAV5) impedes corneal neovascularization (CNV) in vivo without significant side effects. An established rabbit CNV model was used. Targeted decorin gene therapy in the rabbit stroma was delivered with a single topical AAV5 titer (100 μl; 5×10(12) vg/ml) application onto the stroma for two minutes after removing corneal epithelium. The levels of CNV were examined with stereomicroscopy, H&E staining, lectin, collagen type IV, CD31 immunocytochemistry and CD31 immunoblotting. Real-time PCR quantified mRNA expression of pro- and anti-angiogenic genes. Corneal health in live animals was monitored with clinical, slit-lamp and optical coherence tomography biomicroscopic examinations. Selective decorin delivery into stroma showed significant 52% (p<0.05), 66% (p<0.001), and 63% (p<0.01) reduction at early (day 5), mid (day 10), and late (day 14) stages of CNV in decorin-delivered rabbit corneas compared to control (no decorin delivered) corneas in morphometric analysis. The H&E staining, lectin, collagen type IV, CD31 immunostaining (57-65, p<0.5), and CD31 immunoblotting (62-67%, p<0.05) supported morphometric findings. Quantitative PCR studies demonstrated decorin gene therapy down-regulated expression of VEGF, MCP1 and angiopoietin (pro-angiogenic) and up-regulated PEDF (anti-angiogenic) genes. The clinical, biomicroscopy and transmission electron microscopy studies revealed that AAV5-mediated decorin gene therapy is safe for the cornea. Tissue-targeted AAV5-mediated decorin gene therapy decreases CNV with no major side effects, and could potentially be used for treating patients.     

Role of mesenchymal stem cells on cornea wound healing induced by acute alkali burn

The aim of this study was to investigate the effects of subconjunctivally administered mesenchymal stem cells (MSCs) on corneal wound healing in the acute stage of an alkali burn. A corneal alkali burn model was generated by placing a piece of 3-mm diameter filter paper soaked in NaOH on the right eye of 48 Sprague-Dawley female rats. 24 rats were administered a subconjunctival injection of a suspension of 2×10(6) MSCs in 0.1 ml phosphate-buffered saline (PBS) on day 0 and day 3 after the corneal alkali burn. The other 24 rats were administered a subconjunctival injection of an equal amount of PBS as a control. Deficiencies of the corneal epithelium and the area of corneal neovascularization (CNV) were evaluated on days 3 and 7 after the corneal alkali burn. Infiltrated CD68(+) cells were detected by immunofluorescence staining. The mRNA expression levels of macrophage inflammatory protein-1 alpha (MIP-1α), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) were analyzed using real-time polymerase chain reaction (real-time PCR). In addition, VEGF protein levels were analyzed using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). MSCs significantly enhanced the recovery of the corneal epithelium and decreased the CNV area compared with the control group. On day 7, the quantity of infiltrated CD68(+) cells was significantly lower in the MSC group and the mRNA levels of MIP-1α, TNF-α, and VEGF and the protein levels of VEGF were also down-regulated. However, the expression of MCP-1 was not different between the two groups. Our results suggest that subconjunctival injection of MSCs significantly accelerates corneal wound healing, attenuates inflammation and reduces CNV in alkaline-burned corneas; these effects were found to be related to a reduction of infiltrated CD68(+) cells and the down-regulation of MIP-1α, TNF-α and VEGF.     

表达人TCRα转基因小鼠1型糖尿病模型的建立及其免疫机制的初步研究

目的建立T细胞介导的1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)动物模型,为进一步研究该病发病免疫机理奠定基础。方法将雌雄各10只系统表达人T细胞受体α基因(T cell receptor,TCRα)小鼠随机分为模型组和对照组,其中模型组小鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)每次100 mg/(kg·bw),间隔1 d后再注射一次,对照组注射等量的生理盐水;注射后每周测定一次血糖和体重,当出现重度糖尿病临床表现时处死,其余小鼠注射后8周处死,观察胰腺组织病理学改变,并进行外周血淋巴细胞亚群,以及血清胰岛素和细胞因子的测定。结果模型组小鼠发病率为10/10,对照组为0/10;模型组外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平较对照组均有显著降低(P<0.01),B细胞表型CD19+水平与对照组差异无显著性(P>0.05);注射STZ后约8周,模型组血清胰岛素、IFN-γ、TNF-β较对照组差异有显著性(P<0.01),IL-2高于对照组但差异无显著性(P>0.05)。结论在系统表达人TCRα基因小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)后2～8周可建立稳定1型糖尿病的小鼠模型。