自体干细胞对常规血运重建失败的重度肢体缺血患者的疗效观察

目的回顾性分析自体干细胞移植治疗常规血运重建失败的重度肢体缺血患者的有效性。方法收集2009年5月至2015年12月复旦大学附属中山医院血管外科14例卢瑟福4~5级肢体缺血患者,术前均曾接受常规血运重建治疗,包括人工血管旁路术、动脉支架植入术等,中位年龄(48±15)岁,术后缺血无显著改善,或短期内复发。接受GCSF动员5 d后,进行外周血单个核细胞采集,获得移植物后,肌肉注射于缺血肢体。接受纯化CD34~+细胞移植治疗共计11例,外周血单个核细胞移植治疗共计3例。术后12个月保肢率使用Kaplan-Meier生存分析法分析,治疗前后疼痛评分、无痛步行时间差异比较采用配对t检验。结果 14例均获随访,平均(42±25)个月(12~74个月),1例死亡,2例截肢,死亡及截肢患者均为老年下肢动脉硬化闭塞症患者。术后2年总体生存率92.86﹪(13/14),无截肢生存率78.57﹪(11/14)。术前平均无痛步行时间(3±2)min,术后6个月(12±8)min,较术前显著改善(P0.05,F=14.95)。术前平均Wong-Baker疼痛评分为7±1,平均静息痛缓解起始时间为术后(3±1)周,术后6个月疼痛评分为1±1,较术前显著改善(P0.05,F=18.00)。结论自体干细胞移植治疗常规血运重建失败的重度肢体缺血患者安全有效。     

粒细胞集落刺激因子对失代偿期肝硬化患者骨髓干细胞的动员效果及安全性观察

目的观察失代偿期肝硬化患者行自体骨髓干细胞移植前粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对骨髓干细胞的动员效果及安全性。方法在51例失代偿期肝硬化患者行自体骨髓干细胞经肝动脉移植术前,连续2 d给予G-CSF 4μg/（kg·d）动员骨髓干细胞。抽取骨髓的当日化验血常规、肝肾功等指标;从患者髂后上棘抽取骨髓150-200 ml,分离收集骨髓单个核细胞并计数,应用流式细胞仪检测CD34＋细胞并计数,观察应用G-CSF期间不良反应的类型和发生率。患者治疗前后比较采用配对t检验进行统计学分析。结果G-CSF皮下注射后,外周血白细胞由术前（3.31±0.96）×10^9/L升至（11.35±1.92）×10^9/L（P〈0.01）,骨髓单个核细胞数（1.91±0.83）×10^9/kg,CD34＋细胞为（2.02±1.29）×10^7/kg;患者皮下注射后,发热率17.6﹪,体温最高38℃,停药后降至正常;腹部胀痛3例,四肢皮肤散发皮疹2例,均未给予特殊处理,2-3 d后恢复正常。结论给予G-CSF皮下注射后提取骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的是一种临床确切有效的、安全的干细胞动员方法。     

zVAD-fmk对未成熟树突状细胞诱导初始性CD4＋T细胞分化为调节性T细胞影响的体外研究

目的 研究 Caspase 通路在未成熟树突状细胞（imDC）诱导同种异体 CD4＋ T 细胞转化为调节性 T 细胞（Treg）中的作用及探讨免疫耐受机制建立可能的分子机制.方法 将人外周血分离、培养出的imDC 与健康胎儿脐血中分离CD4＋ T 细胞混合培养,同时加入zVAD-fmk,以流式细胞仪检测CD4＋CD25＋ T 细胞（Treg 细胞）转化率.结果 （1）imDC 的鉴定：外周血经诱导后分离的imDC,以流式细胞仪检测细胞表面分子,imDC 表面分子表达的结果：CD80（7.27 ± 0.13）、CD83（3.53 ± 0.35）、CD1a（4.29 ± 0.27）;（2）混合培养后CD4＋CD25＋T细胞的转化率结果为：空白组（1.78 ± 0.11）﹪、对照组（22.23 ± 0.77）﹪、低浓度zVAD-fmk 组（21.63 ± 0.82）﹪、中浓度zVAD-fmk 组（12.24 ± 0.54）﹪、高浓度zVAD-fmk 组（12.20 ± 0.96）﹪,结果对照组和低浓度组、中浓度组和高浓度组间比较,P 〉 0.05,其余各组间比较,P 〈 0.05.加入zVAD-fmk 并与imDC 细胞混合培养的T 细胞转化率相对于未加入阻断剂的T 细胞较低,同时Caspase 信号通路对zVAD-fmk 无浓度依赖性.结论 imDC 可以诱导同种异体初始性CD4＋ T 细胞分化为Treg.Caspase 信号通路特异性的阻断剂zVAD-fmk 可以部分抑制Treg 的转化,说明Caspase 信号通路在诱导免疫耐受中可能起了较为重要的作用.     

超选择性股动脉内骨髓单个核细胞移植治疗股骨头坏死187例

目的 研究自体骨髓单个核细胞移植对股骨头坏死患者缺血状态的改善程度和治疗效果.方法 选取2004 年7 月至2010 年11 月期间187 例252 髋股骨头坏死患者,应用自体骨髓单个核细胞移植治疗,分别采集 187 例患者骨髓200 -360 ml,采用 Ficoll 密度梯度离心法分离单个核细胞,单个核细胞总数为（2.4 ~ 7.8）× 108 个,流式细胞仪检测 CD34＋ 细胞和 CD133＋ 细胞在所分离出的干细胞悬液中的含量分别为2.47﹪± 0.58﹪和1.29﹪± 0.35﹪,然后将单个核细胞用生理盐水制备成细胞悬液 20 - 30 ml,使用数字减影血管造影技术（DSA）行超选择性股骨头供血动脉内干细胞移植术.按世界骨循环研究学会（ARCO）对骨坏死分期,设自身前后对照观察疗效.移植术后第 3、6、12、24、36 和48 个月,根据髋关节 Harris 评分评价疗效,移植术后6 个月通过复查患者股骨头供血动脉 DSA,观察其新生血管形成情况,以后每隔 6 个月采用影像学方法观察股骨头形态学变化.结果 （1）临床疗效：对接受自体骨髓单个核细胞移植治疗的187 例患者随访 3 ~ 48（24.2 ± 4.5）个月,其中髋关节疼痛缓解者 158 例（占患者总数的 84.5﹪）,髋关节功能改善者 146 例（占患者总数的 78.1﹪）,行走间距延长者 149 例（占患者总数的 79.7﹪）;（2）影像学检查：干细胞移植术后 6 个月187 例患者中54 例行股骨头供血动脉 DSA 检查,48 例显示供血动脉较移植术前明显增多、增粗,血流速度增快,12 ~ 24个月后 72 例患者股骨头区骨质病变获得改善.结论 超选择性动脉内骨髓单个核细胞移植方法简便、安全有效,对因缺血导致坏死的股骨头无再次损伤,能够有效治疗缺血性股骨头坏死.     

系统性红斑狼疮患者外周血调节性T细胞、Foxp3和IL-6的表达

目的探讨系统性红斑狼疮（ systemic lupus erythematosus, SLE）患者外周血CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）、roxp3 mRNA和血浆IL-6表达的意义。方法对38例SLE患者和16例正常人采用流式细胞术检测外周血CD4^＋ CD25^＋ T regs百分率,RT-PCR检测roxp3 mRNA表达,ELISA法检测IL-6水平。结果①SLE活动组和非活动组的CD4^＋ CD25^＋ Tregs水平均显著低于正常对照组（P〈0．01）;②SLE活动组的roxp3 mRNA表达水平明显低于正常对照组（P〈0．05）;③SLE活动组和非活动组血浆的IL-6水平均显著高于正常对照组（P〈0．01）,而且活动组显著高于非活动组（P〈0．05）;④38例SLE患者的CD4^＋ CD25^＋Tregs水平与SLEDAI评分呈显著性负相关（P〈0．01）,F0xp3mRNA水平与CD4^＋ CD25^＋Tregs呈显著性正相关（P〈0．01）,血浆IL-6水平与SLEDAI评分之间呈显著性正相关（P〈0．01）,血浆IL-6水平与CD4^＋ CD25^＋Tregs／CD4^＋细胞比值呈显著负相关（P〈0．05）。结论CD4^＋ CD25^＋Tregs和Foxp3以及IL-6可能在SLE的发生和发展中发挥重要作用。     

建立适用于旋毛虫抗肿瘤相关基因筛选的动物模型

目的为利用抑制消减杂交（SSH）法筛选旋毛虫抗肿瘤相关基因,建立理想的动物模型获取可靠的实验样本。方法Balb／c小鼠随机分为检测组（Tester）和驱动组（Driver）,Tester为经口服感染旋毛虫250条、400条和550条组,Driver为不接种组,在感染后11d,两组同时在皮下分别接种SP^2/0细胞2×10^6个,只,检测组和驱动组小鼠荷瘤后,于20d后处死,采集两组肿瘤组织和脾脏组织,用天平称量肿瘤块的重量,游标卡尺测量肿瘤块3个互相垂直直径进行体积比较;为了检测两组小鼠免疫情况,又采用流式细胞术检测体内T淋巴细胞的动态变化,以便评估所需样本的可靠性。结果将肿瘤组织与正常组织分离后,经统计分析比较两组肿瘤块重量和体积大小的差异均极为显著（P〈0．01）通过检测T淋巴细胞亚类,FACS共检测1×10^5个细胞,分别得到脾细胞中CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞的数量,感染组小鼠机体的CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋和CD4^＋／CD8^＋显著增高,在接种不同剂量的旋毛虫后荷瘤,小鼠脾脏特异的T淋巴细胞亚类：CD3^＋差异显著（P〈0．05）;CD4^＋差异显著（P〈0．05）;CD8^＋差异显著（P〈0．05）;CD4^＋／CD8^＋差异显著（P〈0．05）。通过以上指标的测定,我们认为所建立的动物模符合SSH的实验要求。结论建立的旋毛虫抗实体瘤动物模型,可用于旋毛虫抗肿瘤差异基因筛选的实验起始材料,为进一步研究旋毛虫抗肿瘤分子机制创造条件。     

自体CIK细胞治疗21例中晚期恶性实体瘤的肿瘤标志物变化观察

目的观察自体细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）过继免疫疗法治疗中晚期恶性实体肿瘤的临床疗效及肿瘤标志物变化,初步对该疗法作出评价。方法取中晚期恶性实体肿瘤患者自体外周血50ml,根据文献报道方法体外诱导扩增CIK细胞。培养约14d后,一次性回输入患者体内,观察患者CIK细胞回输前2周及回输后4周左右外周血免疫指标变化、肿瘤标志物变化、生活质量及Karnofsky评分变化,随访1年观察1年生存率。采用t检验及寿命表法进行统计分析。结果在21例接受CIK回输治疗的患者中,治疗前出现有代表意义的肿瘤标志物异常升高的患者有14例,1次回输后有8名患者出现肿瘤标志物下降,其中1名患者降至正常范围;免疫指标在CIK细胞回输后4周较回输前2周均无有统计学意义,其中CD3由70.81﹪±10.52﹪升至71.91﹪±11.09﹪,t=0.762,P=0.455;CD4由39.06﹪±11.03﹪升至39.21﹪±8.74﹪,t=0.093,P=0.927;CD8由28.75﹪±8.22﹪升至29.88﹪±10.13﹪,t=0.895,P=0.382;CD16^＋CD56^＋（即NK细胞）由15.73﹪±9.52﹪升至15.37﹪±6.66﹪,t=-0.173,P=0.865;EORTCQLQ-C30（vertion3.0）评分中总体健康状况（globalhealth）由（41.67±17.28）分上升至（46.43±17.19）分,P=0.076;以上各指标治疗前后差异均无统计学意义。但功能子量表中的躯体功能（physicalfunctioning）单项[由（62.94±17.48）分上升至（66.67±17.37）分,P=0.012]和症状子量表中的疲倦（fatigue）[由（51.33±20.03）分下降至（43.38±16.81）分,P=0.012]、疼痛（pain）[由44.44﹪±19.24﹪下降至（36.51±14.55）分,P=0.038]及食欲丧失（appetiteloss）[由（52.38±19.92）分下降至（38.09±21.82）分,P=0.016]单项差异均有统计学意义（P〈0.05）;卡氏评分由[（61.42±3.59）分上升至（62.38±4.36）分,t=1.000,P〉0.05];随访1年内有3名患者死亡,生存率约85.7﹪。结论自体CIK细胞回输治疗后肿瘤标志物有明显改变,同时对缓解晚期恶?     

小梁切除术中应用丝裂霉素C对角膜内皮细胞的影响

目的：观察小梁切除术中应用丝裂霉素C（MMC）对角膜内皮细胞的影响。方法：收集2010年9月2011年5月在我院行小梁切除术的青光眼患者60例（78眼）,随机分为术中应用丝裂霉素c的36例（46眼）患者为A组,术中不用丝裂霉素c的24例（32眼）为B组。分别观察术前、术后1个月和术后3个月两组眼压（10P）、角膜内皮细胞的密度（co）、平均细胞面积（AVG）及细胞面积变异系数（cv）,分析其数量的改变及两组间的差异。结果：A组术前眼压为（35．4±13．7）mmHg,B组术前眼压为（32．5±13．5）mmHg差异无统计学意义（P〉0．05）,A组术后1个月及术后3个月眼压分别为（15．7±3．7）mmHg、（17．0±3．2）mmHg,均低于B组的（19．4±3．7）mmHg、（20．2±2．1）mmHg,差异有统计学意义（P〈0．05）。A组术前、术后1个月及术后3个月角膜内皮细胞密度分别为（2475±484）个／mm2、（2199±373）个／mm2、（2164±332）个／mm2;平均细胞面积分别为（431．4±67．6）μm2、（480．6±66．8）μm2、（463．8±46．2）μm2;细胞面积变异系数分别为（31．1±7．4）％、（34．4±6．3）％、（31．2±7．5）％;术后1个月及术后3个月各参数与术前比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。B组术前、术后1个月及术后3个月角膜内皮细胞密度分别为（2342±94）个／mm2、（2185＋215）个／mm2、（2074218）个／mm2;平均细胞面积分别为（453．9土94．8）μm2、（516.3±100．8）μm2、（499．81＋106．4）μm2;细胞面积变异系数分别为（30．2土3．0）％、（32．7±2．9）％、（31．4±4．3）％;除术后3个月角膜内皮细胞与术前比较有意义（P〈0．05）外,余参数术后1个月及术后3个月与术前比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。术后1个月A组的角膜内皮细胞丢失率为10．4％高于B组的6．1％,差异有统计学意义（P〈0．05）;术后3个月A组的角膜内皮细胞丢失率为11．1％高于B组的10．0％,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：小梁切除术中用丝裂霉素C的降压效果比不用丝裂霉素C的效果好,但短期内前者角膜内皮细胞的丢失率高于后者。     

siRNA沉默t-bet基因对CD4、CD8T淋巴细胞亚群IFN-γ产生的影响

利用化学合成针对人t-bet基因的小干扰RNA（siRNA）,转染体外培养的人外周血单个核细胞,利用流式细胞仪分选纯化CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞,半定量RT-PCR检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞中t-betmRNA的表达变化,流式细胞术检测转染前后IFN-γ产生的变化情况。探讨转录因子t-bet对人CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚群IFN-γ产生的调控作用。与对照组相比,转染后的人CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞t-betmRNA表达水平明显下降;转染siRNA后,CD4＋T淋巴细胞中IFN-γ＋细胞比例为（18.46±6.86）%,与对照组（50.20±5.91）%比较有显著性差异（P〈0.01）;CD8＋T淋巴细胞IFN-γ＋细胞比例为（74.18±9.33）%,和对照组（76.51±6.49）%比较差异不明显（P〉0.05）。体外转录合成的siRNA可有效降低人CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞t-bet的基因表达;转录因子t-bet对人不同淋巴细胞亚群IFN-γ的产生所起作用不同。     

高压氧对正常及SIRS大鼠脾T淋巴细胞的影响

本实验以SIRS为基础,以免疫功能和炎症反应中具有代表性的脾T淋巴细胞为研究对象,观察高压氧对正常机体以及SIRS状态机体的影响并探讨其可能的机制。健康雄性SD大鼠40只,体重约140~180 g,随机分为5组,每组8只。A组：腹腔注射生理盐水（5 mL/kg）;B组：腹腔注射等量生理盐水,做3次高压氧;C组：腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液（500 mg/kg）;D组：腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液（500 mg/kg）,做1次高压氧治疗;E组：腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液（500 mg/kg）,做3次高压氧治疗。采用流式细胞仪计算大鼠脾脏淋巴细胞数量及比例。高压氧治疗（B组）降低正常大鼠外周血CD4＋T细胞百分比（P〈0.01）,对CD8＋T细胞无影响,因此CD4＋/CD8＋T细胞比值下降（P〈0.05）。酵母多糖腹腔注射（C组）使大鼠外周血CD4＋、CD8＋T细胞均减少（P〈0.01）,但CD4＋/CD8＋T细胞比值不变。1次和3次HBO治疗（D和E组）可使酵母多糖所致CD4＋T细胞减少（C组）明显恢复（P〈0.01,P〈0.05）,故CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋比值升高（P〈0.01,P〈0.05）,HBO几乎不影响CD8＋T细胞比例（P〉0.05）。酵母多糖导致大鼠脾脏CD4＋和CD8＋T细胞比例减少;高压氧可减少正常大鼠脾脏CD4＋T细胞比例,而增加SIRS脾脏的CD4＋T细胞比例,而对CD8＋T细胞无影响。     

青霉素联合中药治疗隐性梅毒临床分析

目的探讨土茯苓、金银花等中药对隐性梅毒的疗效和免疫功能变化。方法将67例隐性梅毒患者分为青霉素联合大剂量土茯苓、金银花等中药辨证治疗组（治疗组）33例,单纯青霉素治疗组（对照组）34例,并观察两组患者血清RPR有效率和阴转率,检测其免疫功能变化。结果治疗组与对照组RPR有效率和阴转率比较,差异显著（P〈0.01）;CD4＋CD25＋T细胞比较,治疗组（7.62±1.45）%,对照组（11.04±2.85）%（P〈0.01）;CD4＋CD25＋CD28＋T细胞比较,治疗组（88.55±6.57）%,对照组（90.74±5.86）%（P〉0.05）;CD4＋CD25＋CD152＋T细胞比较,治疗组（3.83±1.64）%,对照组（3.62±1.93）%（P〉0.05）。结论土茯苓、金银花对隐性梅毒治疗有效,可提高RPR有效率和阴转率,降低了CD4＋CD25＋T细胞数量,而活性功能不变,从而改善免疫抑制,提高疗效。     

重复远程缺血后适应对急性缺血心肌中骨髓间充质干细胞移植的影响

目的探讨在大鼠急性心肌缺血模型中重复远程缺血后适应对骨髓间充质干细胞(MSC)经心肌注射移植存留率的影响。方法结扎成年雌性SD大鼠的左前降支诱导心肌缺血。雄性SD大鼠来源的骨髓MSC培养至第三代。大鼠缺血30 min后开放结扎的冠状动脉,并经缺血心肌边缘注射4×106个骨髓间充质细胞。60只心肌缺血大鼠随机平均分为再灌注对照(IR)组、远程缺血后适应(RIPo C)组、重复远程缺血后适应(r RIPo C)组和CXCR4抗体拮抗(CXCR4-Ab)组。远程缺血后适应在后肢上实行4个周期5 min缺血和再灌注。重复远程缺血后适应在后肢上每3 d实行4个周期5 min缺血和再灌注。CXCR4抗体拮抗(CXCR4-Ab)组在行r RIPo C前经腹腔注射CXCR4特异的抗体。1个月以后,进行心功能评价、免疫组化寻找标记的细胞、聚合酶联反应检测Y染色体拷贝数计算心肌中细胞存留率,采用方差分析和独立t检验进行统计学分析。结果重复远程缺血后适应的细胞移植组显著改善缺血心脏的左室短轴缩短分数[r RIPo C(25.90±4.33)﹪,RIPo C(20.60±3.50)﹪,IR(16.60±3.20)﹪,CXCR4-Ab(20.00±3.23)﹪,F=11.422,P=0.000]和左室收缩末期内径[r RIPo C(5.24±0.51)mm,RIPo C(5.77±0.44)mm,IR(6.15±0.33)mm,CXCR4-Ab(5.78±0.33)mm,F=8.159,P=0.000]。免疫组化发现重复远程缺血后适应组的心脏内细胞滞留率更高,PCR检测MSC滞留比例[r RIPo C(2.33±0.46)﹪,RIPo C(1.85±0.50)﹪,IR(1.42±0.27)﹪,F=8.189,P=0.000];特异CXCR4抗体阻断降低重复远程缺血后适应诱导的心脏内高细胞滞留率[r RIPo C(2.33±0.46)﹪,CXCR4-Ab(1.82±0.36)﹪,n=10,P=0.014]和心脏收缩功能改善[r RIPo C(25.90±4.33)﹪,CXCR4-Ab(20.00±3.23)﹪,P=0.003]。结论重复远程缺血后适应较单次远程缺血后适应提高经心肌注射移植的骨髓MSC在心脏中的移植存留率。CXCR4受体在重复远程缺血后适应后期诱导的心肌高移植存留率中发挥重要作用。     

总状蕨藻盾叶变种多糖及其硒化产物对小鼠T细胞和NK细胞的调节

一种分离自总状蕨藻盾叶变种的多糖CrvpPS与纳米硒反应之后形成稳定的多糖纳米硒（CrvpPS-nano—Se）系统．实验检测了CrvpPS和CrvpPS—nano-Se对小鼠T淋巴细胞亚群及NK细胞的调节功能．用氢化可的松制造免疫功能低下的小鼠动物模型,给模型小鼠分别连续10天灌胃CrvpPS、蔗糖-纳米硒、CrvpPS—nano-Se溶液和阳性对照药物左旋咪唑,检测脾脏和胸腺指数的变化,并用流式细胞仪检测血中T细胞亚群（CD3^＋,CD4^＋,CD8^＋）和脾脏NK细胞百分比．结果表明,CrvpPS和CrvpPS-nano-Se对胸腺有较大的刺激作用,能使模型小鼠的CD3^＋,CD3^＋CD4^＋,NK细胞百分比以及CD4^＋／CD8^＋明显升高（P〈0．05）,CrvpPS-nano—Se提升CD3^＋,CD3^＋CD4^＋细胞百分比的作用明显优于CrvpPS、蔗糖-纳米硒及左旋咪唑（P〈0．05）．表明CrvpPS对免疫功能低下小鼠的胸腺指数、T细胞亚群和NK细胞百分比具有正向调节作用;其硒化产物CrvpPS-nano-Se对CD3^＋,CD3^＋CD4^＋细胞的调节作用优于单纯多糖和单纯纳米硒．     

肿瘤干细胞标记物CD133与miR-429在大肠癌组织中的表达及其相关性研究

目的：检测CD133不同亚群大肠癌细胞HT-29的miR-429表达情况,探讨miR-429及CD133的表达与肿瘤的发生发展之间的关系。方法：采用荧光活化细胞分选法（FACS）分选出CD133不同亚群细胞,实时荧光定量PCR分别检测两组细胞miR-429的表达,合成miR-429寡核苷酸和阴性对照miRNA并分别转染CD133＋和CD133＋两个亚群细胞。再将细胞种植于非肥胖糖尿病／严重联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠体内构建移植瘤模型,不同时间测量肿瘤体积和重量,RT—PCR及蛋白质印迹检测CD133＋和CD133＋两组肿瘤CD133mRNA和蛋白质表达。结果：血清检出CD133＋细胞为67．9％,miR-429的表达量是CD133＋细胞的（1．83±0．91）倍（P〈0．05）,CD133＋比例与miR-429表达呈负相关（r=0．591,P〈0．05）;miR-429＋／CD133＋组的移植瘤体积及重量与对照组比较有统计学差异（P〈0．05）,且miR-429＋/CD133＋组成瘤时间较对照组晚约2周,但miR-429＋/CD133＋组的移植瘤CD133表达量低,与阴性对照组比较无明显差异（P〉0．05）。结论：miR-429可能作为CD133的负性调控因子,具有抑制肿瘤生长的作用,但miR-429与CD133在肿瘤发生、发展过程中的作用机制有待进一步研究阐明。     

双歧杆菌对溃疡性结肠炎小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4~＋ CD25~＋ Foxp3~＋调节T细胞表达的影响

目的探讨双歧杆菌治疗溃疡性结肠炎与CD4＋ CD25＋ Foxp3＋调节T细胞的相关可能机制。方法采用DSS制作UC小鼠结肠炎模型,随机分成3组：正常对照（NC）组,模型（MD）组,双歧杆菌治疗（BbT）组。造模7 d后,给予双歧杆菌后续治疗7 d。评估小鼠疾病活动指数（DAI）,结肠行HE染色及病理学评分（HDS）;流式细胞仪检测外周血和肠系膜淋巴细胞中表达CD4＋ CD25＋ Foxp3＋的Treg细胞的百分比率。结果 BbT组的DAI明显低于模型组（P〈0.05）;MD组HDS明显高于正常组（P〈0.05）;BbT组的HDS明显低于模型组（P〈0.05）;模型组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg细胞占CD4＋T细胞的百分率明显低于正常组（P〈0.05）;BbT组结肠外周血和肠系膜淋巴细胞CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg细胞占CD4＋T细胞的百分率明显高于模型组（P〈0.05）。结论双歧杆菌可以提高CD4＋ CD25＋ Foxp3＋Treg数量,调节机体和肠道免疫功能,对UC发挥了一定的治疗作用。     

甘珀酸干预对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的观察缝隙连接阻断剂甘珀酸对局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响。方法采用大鼠大脑中动脉阻塞再灌流模型（MCAO）,将动物随机分为脑缺血60min再灌注（MCAO）组,脑缺血再灌注加甘珀酸干预（MCAO＋CBX）组和假手术组（sham）。采用尼氏染色显示脑梗死灶并计算梗死灶体积;应用免疫荧光与TUNEL染色法分别观察脑缺血后3d与7d不同时间点缺血边缘区胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达和细胞凋亡情况。结果（1）缺血后3d、7d MCAO＋CBX组大鼠梗死体积小于MCAO组,3d、7d MCAO＋CBX组大鼠梗死体积较MCAO组分别缩小5%和4.6%;（2）缺血后3d、7d于缺血边缘区可见大量TUNEL阳性染色细胞,且MCAO组大鼠缺血边缘区细胞凋亡数目明显多于MCAO＋CBX大鼠（P〈0.001）;（3）缺血后3d和7d组缺血边缘区GFAP表达明显增强,3d的MCAO组与MCAO＋CBX组大鼠缺血边缘区GFAP的表达均较假手术组强（P〈0.05）,7d的MCAO＋CBX组大鼠缺血边缘区GFAP的表达较假手术组强（P〈0.001）,但明显弱于MCAO组大鼠（P〈0.01）;结论缝隙连接阻断剂甘珀酸可减少大鼠大脑中动脉阻塞后脑梗死体积,其机制可能与阻断缝隙连接后缺血边缘区神经元凋亡降低有关,星型胶质细胞的反应性变化参与了该过程。     

肥厚性扁平苔藓皮损中浸润淋巴细胞的研究

目的探讨淋巴细胞浸润在肥厚性扁平苔藓发病机制中的意义。方法采用免疫组织化学SP法对10例肥厚性扁平苔藓患者皮损、20例非肥厚性扁平苔藓患者皮损及10例正常人皮肤中CD3、CD4、CD8、CD20进行检测。结果所有患者皮损均以CD3^＋’T、CD4^＋T、CD8^＋T细胞浸润为主,散在CD20^＋B细胞浸润。肥厚性皮损中浸润T淋巴细胞数少于非肥厚性皮损（P〈0．01）,CD20^＋B细胞占浸润淋巴细胞百分率高于非肥厚性皮损（P〈0．05）。正常人皮肤仅在真皮偶见CD3^＋T细胞。结论肥厚性扁平苔藓皮损T淋巴细胞的减少,B淋巴细胞的增多表达可能与疾病的持续存在及局部过度增殖性改变密切相关。     

非霍奇金淋巴瘤患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞亚群变化初探

目的：检测非霍奇金淋巴瘤（non—Hodgkin’s lymphoma,NHL）患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋regulatoryTcell,Treg）的改变,探讨Treg与NHL的相关性。方法：病例组（n=60）为本院收治的初诊NHL患者,对照组（n=60）为本院健康体检者,用流式细胞技术联合标记CD4、CD25检测对照组及病例组化疗前、化疗后的外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞的分布特点。结果：（1）病例组化疗前外周血中CD4＋细胞比例显著低于对照组（P〈0．05）,CD4＋CD25＋调节性T细胞比例显著高于对照组（P〈0．05）;（2）病例组化疗后,CD4＋细胞比例明显高于化疗前（P〈0．05）,CD4＋CD25＋调节性T细胞比例明显低于化疗前（P〈0．05）;（3）病例组化疗后CD4＋细胞比例与对照组无显著差异（P〉0．05）,而CD4＋CD25＋调节性T细胞比例显著高于对照组（P〈0．05）。结论：非霍奇金淋巴瘤患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞比例升高,存在机体免疫抑制,化疗可降低CD4＋CD25＋调节性T细胞比例。     

同种异基因骨髓移植GVHD动物模型的建立及其病理生理学机制初探

目的：建立稳定的异基因骨髓移植GVHD（移植物抗宿主病）动物模型,并初步了解其病理生理学机制。方法：以BALB／c（H-2^d）雌性小鼠为受者,接受8Gy致死剂量的。Co全身照射后,输注雄性C57BL／6（H-2^b）供鼠的脾细胞和骨髓细胞,观察受鼠的体征、造血功能恢复及生存时间的变化,并进行病理学、嵌合体和T细胞亚群及相关细胞因子的检查。结果：模型组小鼠在移植后出现了典型的GVHD症状;肠、肝、脾、皮肤的病理学分析均属于Ⅳ度GVHD;嵌合体植入成功;以7、14和21d为检测时间点,发现模型组鼠体内T细胞亚群移植后较移植前CD3^＋CD4^＋T细胞数量减少,CD3＋CD8＋T细胞显著升高,CD4^＋和CD8^＋T细胞比例严重倒置,随着时间变化比值会逐渐升高,但仍然处于较显著的倒置水平;血清中IFN-γ、TNF-α在移植后＋7d表达显著增高,尤其是IFN-γ的表达在＋7d达峰值;IL-4和IL-10的水平在移植前后几乎没有变化。结论：建立了稳定的GVHD动物模型;此模型发病过程中,CD8^＋T细胞介导的CTL细胞毒性作用可能要大于CD4＋Th介导的细胞因子效应;IFN-γ、TNF-α炎症因子在GVHD的早期发挥重要作用;IL-4、IL-10的低水平分泌与急性GVHD的高发病率有关。     

外周血CD4^＋、CD8^＋及CD56^＋细胞在肺癌靶向治疗患者中的表达意义

目的：探讨埃罗替尼靶向治疗前后非小细胞肺癌患者外周血CD4^＋,CD8^＋和CD56^＋的表达及其临床意义。方法：流式技术检测30例EGFR突变的非小细胞肺癌患者埃罗替尼一线靶向治疗前后,外周血T细胞亚群的表达情况及疗效。结果：靶向治疗1个月后,与治疗前相比较非小细胞肺癌患者外周血T细胞亚群CD4^＋CD8^＋以及CD56^＋表达数量有统计学差异（P〈0．05）。其中,CD4^＋表达上升,CD8^＋和CD56^＋表达下降。结论：埃罗替尼靶向治疗可以改善非小细胞肺癌患者细胞免疫功能,观察外周血T细胞亚群表达情况有助于评价埃罗替尼靶向治疗的疗效和预后。