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邵惠训 《中国生物工程杂志》1990,10(6):62-63
聚合酶链反应(Polymerase Chain reaction,PCR)又称体外基因放大技术,是一种在体外将特异性DNA序列进行高效扩增的方法。DNA或RNA均可作为模板(template),进行扩增。由于逆转录酶的作用,将mRNA转化为cDNA。模板DNA热变性解链,两个寡核苷酸引物(oligonucleotide primers)分别连结在待扩增的DNA片段两侧。在DNA 相似文献
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利用聚合酶链反应扩增基因片段 总被引:2,自引:1,他引:1
聚合酶链反应(PCR)是一种模拟天然DNA复制过程的核酸扩增法,具有敏感特异、产率高、操作简单、容易自动化等特点。由于它有成指数倍(2~n)扩增靶序列的能力,又被称之为“无细胞分子克隆”或“试管内分子克隆”。我们以化学合成的寡核苷酸的粗提物为引物,含目的基因片段的重组质粒DNA为模板,利用PCR技术成功地扩增出数百至3544bp的特异性 相似文献
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AM真菌DNA的提取与PCR-DGGE分析 总被引:22,自引:0,他引:22
分别从丛枝菌根(AM)真菌的单孢、宿主植物根系及土壤样品中提取DNA,对AM真菌的18SrDNA中NS31/Glol区进行Nested PCR特异性扩增,表明Nested PCR能很好地以微量DNA为模板扩增出目标产物;对扩增产物进行DGGE电泳,3种样品表现出不同的DGGE指纹图谱特征。本文认为,将Nested PCR与DGGE技术相结合,可以成为AM真菌分子生态学研究的有效途径。 相似文献
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利用Taq DNA聚合酶既具有DNA聚合酶活性义具有反转录酶活性的特点,探索了在Taq DNA聚合酶单独作用下以双链RNA为模板进行PCR反应的条件。结果表明靶序列长度为277 bp、369 bp、987 bp时,均可直接进行PCR扩增;短片段序列扩增的退火温度在47.0℃、47.9℃、50.2℃、52.6℃、54.9℃、56.7℃条件下,均可有效扩增,而长片段序列扩增的退火温度在50.2℃、52.6℃、54.9℃、56.7℃条件下,也可扩增出相应的靶序列。这一结果提示利用Taq DNA聚合酶可以dsRNA为模板直接扩增目的片段,尤其是短片段的扩增。 相似文献
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以报道的植原体 (Phytoplasma)16SrDNA基因保守序列为依据,设计合成了两对引物对R16mF2/ R16mR2和R16F2/ R16R2,以甘薯丛枝病(SPWB)带病植株的叶脉中提取的DNA为模板,应用聚合酶链式反应(PCR)技术和巢式PCR(Nested- PCR)技术对甘薯丛枝病病原进行分子检测。结果表明PCR扩增出了1.5 kb的特异片段,在PCR基础上的巢式PCR扩增出了1.2 kb的特异片段。灵敏度实验显示该方法所需PCR模板DNA量为0.1073 ng/μl,在PCR基础上的巢式PCR可以将灵敏度提高约10000倍,所需模板DNA仅为0.01073 pg/μl,在甘薯丛枝病的检测中是一种快速、灵敏、可靠的方法。 相似文献
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特异性DNA倍增技术(PCR)及其应用 总被引:1,自引:0,他引:1
特异性DNA倍增技术(PCR)是近年来发展的一种新技术,具有快速、简便、灵敏、特异性高和重复性好等优点,尤其适合于临床分子生物学检测。PCR技术包括三个循环过程:(1)模板DNA的变性,(2)模板DNA-引物的复性,(3)DNA聚合酶作用下的引物链的延伸。本文对耐高温Taq DNA聚合酶、PCR的反应体系、PCR产物特异性的影响因素和PCR技术的应用等几个方面进行了综述。 相似文献