用核糖体ITS区序列验证自然杂交种Meconopsis × cookei G.Taylor

对被认为是自然杂交种的绿绒蒿植物Meconopsis×cookeiG .Taylor及其可能的亲本红花绿绒蒿(M punicea)和五脉绿绒蒿 (M .quintuplinervia)的核糖体DNAITS区进行了序列测定 ,所得序列的长度为 6 6 7～ 6 6 8bp ,其中红花绿绒蒿的序列长度为 6 6 7bp ,另外两个种的序列长度均为 6 6 8bp。利用软件ClustalX对所得序列进行排序和碱基比较 ,排序后的序列长度为 6 6 8bp ,其中ITS1长度为 2 5 4bp ,5 8S长度为 16 2bp ,ITS2长度为 2 5 2bp。整个ITS区序列共有 16个变异位点 ,占序列总长度的 2 4 0 % ,其中ITS1的变异位点 9个 ,占 5 6 2 5 % ,占整个序列长度的 1 35 % ;ITS2的变异位点 6个 ,占 37 5 0 % ,占整个序列长度的 0 89% ;5 8S的变异位点 1个 ,占 6 2 5 % ,占整个序列长度的 0 15 %。分析结果表明 ,M .×cookei同时具有红花绿绒蒿和五脉绿绒蒿的两种ITS序列 ,也就是说M .×cookei与红花绿绒蒿和五脉绿绒蒿之间在ITS基因上的变化规律符合孟德尔遗传学定律 ,从而从分子水平上证明M .×cookei是红花绿绒蒿和五脉绿绒蒿的杂交后代。     

不同居群栽培牡丹rDNAITS区序列分析及鉴别

对我国四个地区牡丹主要栽培品种rDNA ITS区序列进行测定,研究各居群rDNA ITS序列特征及差异,建立不同地区主要牡丹栽培品种的区域性分子标记,参照GeneBank信息(登录号:U27692)利用Clustal X、MEGA 3.1分子进化遗传分析软件对测序结果排序.牡丹ITS全序列长度为652 bp,相对于GenBank中牡丹rDNA ITS全序列在448位少一个C碱基,其中ITS1为267 bp,5.8 S为163 bp,ITS2为222 bp,GC含量为55.7%～56.9%,共有30个变异位点,主要发生在ITS1、ITS2区,5.8S区也存在多个位点的变异.牡丹rDNA ITS区序列特征(SNPs)可用于不同地区主要牡丹栽培品种的鉴别.     

福建橄榄18S-26S rRNA及其ITS片段的克隆与序列分析

利用18S-26S rRNA基因及其ITS片段的PCR扩增、克隆及测序分析,对福建14个橄榄品种进行分子标记及遗传分类。序列分析结果表明:14个品种可分为4个类别,以1号品种为参照,3、4、6、7、8、9、11号品种的ITS1、ITS2和5.8S共634个碱基序列完全一致,与1号仅ITS2上有1个碱基差异,2号和1号品种的ITS1和5.8S序列完全一致,仅ITS2上有2个碱基差异,归为第一类;5号和14号的序列完全一致,与1号在ITS1和ITS2上各有1个碱基差异,归为第二类;10号和12号序列完全一致,与1号在ITS1上有2个碱基差异,归为第三类;13号品种5.8S的序列与1号相同,但在ITS1上有1个碱基差异,在ITS2上有24个碱基差异,归为第四类。使用DNAMAN软件建立的同源关系树说明了不同橄榄品种的变异程度。将橄榄18S-26S rRNA基因及其ITS序列登陆GenBank,登陆号:DQ517524。     

基于核rDNA的ITS序列在种子植物系统发育研究中的应用

种子植物核rDNA是高度重复的串联序列,由于同步进化的力量．大多数物种中这些重复单位间已发生纯合或接近纯合。5．8S rDNA把核rDNA的内转录间隔区分为ITS1和ITS2两部分．在被子植物中ITS1的长度为165～298bp,ITS2的长度为177～266bp,而在裸子植物中ITS片段较长。且其长度变化主要由ITS1的长度变异所致。可对这两个片段PCR产物进行直接测序或克隆测序。由于ITS序列变异较快．能够提供较丰富的变异位点和信息位点,已成为被子植物较低分类阶元的系统发育和分类研究中的重要分子标记,为探讨多倍体复合体网状进化关系,异源多倍体的起源提供了重要的系统学信息．但它一般不适合科以上水平的系统学研究。裸子植物中ITS片段较长,重复序列间的纯合程度不同,测序比较困难．因此对探讨裸子植物系统发育和分类受到了一定的限制,但近年来有所发展。     

中药乌头及其近缘种的rDNA—ITS序列分析

运用PCR扩增产物直接测序的方法对云南、安徽的乌头及其近缘种植物的ITS区碱基序列测定。表明核糖体DNA中ITS区的完整序列（包括ITS1,ITS2和5．8s）,4种乌头属植物的ITS1序列长度为249bp,云南鸟头和安徽乌头及黄山鸟头ITS2序列长度为189bp,赣皖乌头ITS2序列长度为217bp。运用Mega2软件进行系统分析得到系统进化树。ITS序列特征是乌头鉴别的有效分子标记。     

不同产区厚朴nrDNA ITS序列分析及亲缘关系鉴定

以陕西、四川、浙江、重庆、福建、广西主产区的11个种源厚朴为材料,采用PCR直接测序法,测定不同产区厚朴的核糖体DNA ITS区序列,并结合GeneBank中相关植物的ITS序列（以同属近缘物种辛夷为外类群）,应用Kimura 2遗传距离与NJ系统树分析法对不同产区厚朴的亲缘关系进行分析。结果表明：11个产区厚朴的ITS全序列长度介于593～600 bp,其中,ITS1长度为214～217 bp,G+C含量为54.42%～5535%,ITS2长度为215～219 bp,G+C含量为59.82%～60.95%;ITS序列共有36个变异位点,均出现在ITS1（7个）和ITS2（29个）序列中,虽然位点变异与部分叶形变化出现吻合,但无必然联系;序列间遗传分化距离为0.000～0.02792,11个产区厚朴构成3个分支,显示出产区间厚朴的亲缘关系,其中陕西洋县（SXYX）、陕西西乡（SXXX）、福建武夷山（FJWYS）及四川彭州（SCPZ）四个产区ITS序列完全一致。nrDNA ITS序列分析可作为厚朴不同产区亲缘关系鉴定的手段。     

福建青梅rDNA ITS区克隆与序列分析

利用PCR法对青梅ITS1、5.8S、ITS2序列扩增后克隆测序,用软件DNAMAN和MEGA3.1分析测序结果,研究18个福建青梅样品的核糖体ITS碱基序列差异。获得青梅18个样品rDNA中的ITS和5.8S完全序列,ITS1、5.8S和ITS2序列长度分别为223~224bp、164bp和241~246bp,5.8S较为保守。根据测序结果,以UPGMA法建立系统发生树,从分子水平说明18个样品间的变异程度,并将福建青梅差异较大的14条rDNA ITS序列登录GenBank,获得登录号:EF523482-EF523493、EF529435和EF529436。     

基于ITS序列的不同产地裂叶荆芥系统发育分析

采用PCR法扩增来自国内5个不同产地的裂叶荆芥ITS全序列,测序后以产自河北的裂叶荆芥代表中国裂叶荆芥与来自不同国家的裂叶荆芥ITS序列进行比较,构建分子系统发育树,探讨国内5个不同产地及不同国家的裂叶荆芥的亲缘关系和系统进化。结果表明:国内5个不同产地的裂叶荆芥ITS1和ITS2序列均有较高的G/C含量;5个产地的裂叶荆芥的扩增序列长度均为749bp,且序列完全相同;其中ITS1序列长231bp,5.8S序列长168bp,ITS2序列长236bp。中国裂叶荆芥与日本、韩国裂叶荆芥ITS序列一致性为100%,与美国裂叶荆芥ITS序列一致性为99.0%。与美国裂叶荆芥相比,中国裂叶荆芥ITS序列有7个碱基发生变异。来自不同国家的裂叶荆芥形成单系群和2个分支(中、日、韩3国为1个分支,美国单独形成1个分支)。ITS序列的一致性表明国内5个不同产地裂叶荆芥为同一个种。     

双壳纲动物核糖体RNA 18S-ITS1序列及其在分子系统发育研究中的应用

测定了双壳纲不同科、属、种及种内共11个个体的核糖体RNA 18S-ITS1序列。结果表明,该序列在种间存在很高的多态性,长度从558bp到784bp不等,碱基差异百分比在10．7％～61．7％之间,ITS1序列同源性很低,有片段的插入与缺失。种间18S部分序列碱基差异百分比在0．9％～23．7％之间,变化主要是碱基的转换。用邻接法(NJ)构建了8个种的18S部分序列(约240bp)的系统发育树,与传统形态学分类结果相符。马氏珠母贝(Pinctada martrtensi)4个不同地域个体间的序列差异百分比在0．6％～1．9％之间。分析指出：18S基因可以作为双壳纲动物高阶元系统发育的分子标记;ITS1序列种间变化很大,可以应用于该纲物种的分类及鉴别．在亲缘关系相近种及种内变异相对较小,但核苷酸变异位点信息量丰富,可用于属内种间、亚种和群体间的遗传多样性研究。     

乳白石蒜rDNA-ITS序列分析及种内系统发育研究

对来源于不同产地的11个乳白石蒜(Lycoris albiflora Koidz.)种源的rDNA-ITS序列进行了扩增、纯化、克隆、酶切和测序,并对各种源的rDNA-ITS序列长度、G+C含量、碱基差异和遗传距离进行了比较分析,构建了系统发育树.结果表明,乳白石蒜11个种源的rDNA-ITS序列具有较高的同源性,但不同种源间的ITS序列长度和碱基变异较大;乳白石蒜rDNA-ITS序列总长度约为700 bp,共有318个变异位点;ITS1、ITS2和5.8S rDNA片段长度分别为222～245、240～252和163 bp;ITS序列中的G+C含量均明显高于A+T含量,ITS1和ITS2片段中的G+C含量分别为53.8%～70.5%和63.4%～73.4%;碱基变异类型多为颠换、转换、插入和缺失.种源间的遗传距离差异较大,其中浙江天目山种源(TM3)与浙江宁波种源(NB2)的遗传距离最小(0.000),其他种源间遗传距离为0.067～0.323.基于ITS序列分析结果可将11个乳白石蒜种源聚为3大类,第1类包括采自浙江天目山(TM1和TM2)和浙江宁波(NB3)的3个种源,花和花丝多为白色;第2类包含来源于不同产地的7个种源,花多为乳白色或乳黄色;第3类仅有采自浙江兰溪(LX)的1个种源,花色变异较大.研究结果表明,乳白石蒜种内有丰富的遗传变异,种源间的ITS序列差异与花的特征变化一致,但与地理分布并不相关;rDNA-ITS序列分析可用于乳白石蒜的亲缘关系、物种鉴别和遗传多样性研究.     

Relationships in Patagonian species of Berberis (Berberidaceae) based on the characterization of rDNA internal transcribed spacer sequences

Sequence analysis of the internal transcribed spacer (ITS) of the 18S(ITS1)-5.8S-26S(ITS2) rDNA region was performed in order to analyse the phylogenetic relationships between 13 Patagonian species of the genus Berberis (Berberidaceae). The divergence values between the pairwise sequence in the studied Patagonian species were in the range 2.9–22.9%. The lengths of the ITS1 and ITS2 sequences were in the range 227–231 bp and 220–224 bp, respectively, and the 5.8S sequence was 159 bp throughout all species . B. microphylla sensu Landrum does not appear to be monophyletic based on current sampling. Indeed, we suggest that B. microphylla should be distinguished from B. buxifolia , B. parodii , and B. heterophylla . ITS sequences, together with data obtained from morphological, biochemical, amplified fragment length polymorphism, and cytological characterizations, support the existence of diploid and polyploid hybrid speciation in the genus.  © 2007 The Linnean Society of London, Botanical Journal of the Linnean Society , 2007, 153 , 321–328.     

Genetic differences in internal transcribed spacer 1 between Dermanyssus gallinae from wild birds and domestic chickens

We investigated the presence of the poultry red mite or the chicken mite, Dermanyssus gallinae De Geer, Acari: Dermanyssidae, in wild bird populations in four different geographical regions of Sweden. The mites identified as D. gallinae were compared genetically with D. gallinae from egg-producing poultry farms in the same regions. The small subunit (SSU) gene, the 5.8S ribosomal RNA (rRNA) gene and the two internal transcribed spacers (ITS) of the rRNA genes were used in the genetic analysis. All D. gallinae mites had identical SSU rRNA, 5.8S rRNA and ITS2 sequences independent of their origin. By contrast, we identified significant differences in the ITS1 sequences. Based on the differences in the ITS1 sequences, the mites could be divided into two genotypes, of wild and domesticated origin, with no variation within the groups. These results imply that wild bird populations are of low importance, if any, as natural reservoirs of D. gallinae in these four geographical regions of Sweden.     

Comparative study on DNA sequences of ribosomal DNA and cytochrome c oxidase subunit 1 of mitochondrial DNA among five species of gnathostomes

The nucleotide sequences of partial 18S, complete internal transcribed spacer region 1 (ITS1), complete 5.8S, complete ITS2 and partial 28S of ribosomal DNA (rDNA) and cytochrome c oxidase subunit 1 of mitochondrial DNA (MCOI) from five species of gnathostomes (G. spinigerum, G. doloresi, G. nipponicum, G. hispidum and G. binucleatum with the former four species being distributed in Japan and Asia) that cause human gnathostomiasis were compared by direct polymerase chain reaction cycle-sequencing. The nucleotide sequences of each region of the18S (613 bp), 5.8S (158 bp) and 28S (598 bp) rDNA from the five species were almost identical. The ITS1 region was different in length for the five species. The nucleotide sequences of each region of ITS2 and partial MCO1 regions were different among the five species. Therefore, these two regions can be used as genetic markers for identification of worms.     

Primers are designed for amplification and direct sequencing of ITS region of rDNA from Myxomycetes

Four new primers were designed, based on comparison of Physarum polycephalum sequences retrieved from Genbank (primers PHYS-5 and PHYS-4) and our own sequences (primers PHYS-3 and PHYS-2), to amplify the ITS regions of rDNA, including the 5.8S gene segment from Lamproderma species. Sequencing analysis shows that Lamproderma contains ITS1-5.8S-ITS2 regions of approximately 900 bp, which is similar in size to most eukaryotes. However, the corresponding region in another common myxomycete, Fuligo septica, is more than 2000 bp due to the presence of large direct-repeat motifs in ITS1. Myxomycete rDNA ITS regions are interesting both as phylogenetic markers in taxonomic studies and as model sequences for molecular evolution.     

帘蛤科贝类rDNA内转录间隔区序列的研究

根据18SrDNA、5．8SrDNA和28SrDNA保守序列设计引物,应用聚合酶链式反应（PCR）扩增了文蛤（Meretrix meretrix L．）、青蛤（Cyclina sinensis G）、硬壳蛤（Mercenaria mercenaria L．）和江户布目蛤（Protothaca jedoensis L．）4种帘蛤科贝类的第一内转录间隔区（ITS1）和第二内转录间隔区（ITS2）序列,并进行了测序。结果表明,文蛤、青蛤、硬壳蛤和江户布目蛤的ITS1扩增产物大小分别为978bp、663bp、757bp和942bp,GC含量分别为61．55％、60．78％、62．48％和64．86％～64．97％,其中ITS1序列长度分别为900bp、585bp、679bp和864bp,是迄今已报道双壳贝类中变化范围最大的,GC含量分别为61．67％、61．03％、63．03％和65．51％～65．62％,江户布目蛤种内ITS1序列有个体差异;ITS2扩增产物大小分别为644bp、618～620bp、593bp和513～514bp,GC含量分别为61．18％、61．29％～61．81％、62．73％和61．48％61．60％,其中ITS2序列长度分别为412bp、386～388bp、361bp和281～282bp,GC含量分别为65．29％、65．21％～66．06％、67．87％和67．38％～67．62％,青蛤和江户布目蛤种内ITS2序列有个体差异。4种蛤ITS1和ITS2序列种间差异很大,有明显的长度多态性,ITS2种间序列相似度73．0％～89．1％,与ITS1的种间序列相似度48．7％～81．5％相比略高。此外,在4种蛤ITS1和ITS2序列中各发现2个与rRNA加工有关的保守区。通过对ITS1和ITS2序列的组装获得了4种蛤5．8SrRNA基因完整序列,序列长度都是157bp,GC含量57．96％～58．60％,4种蛤5．8SrRNA基因相对保守,种间序列差异度0-6．0％,共有10个变异位点,其中转换4处,颠换6处,硬壳蛤和江户布目蛤5．8SrRNA基因序列完全相同。以ITS2序列（包含5．8SrRNA和28SrRNA基因部分序列）为标记,调用北极蛤科的Arctica islandica相应序列数据作外群,构建了帘蛤科贝类的系统发育树,其拓扑结构显示江户布目蛤与硬壳蛤亲缘关系最近,青蛤与其他3物种的亲缘关系最远。     

基于核糖体基因的鳞钙皮菌种内分子关系分析

为探讨不同地域的鳞钙皮菌Didymium squamulosum种内分子亲缘关系,通过PCR扩增鳞钙皮菌子实体及原质团DNA,得到SSU、ITS1-5.8S-ITS2 rRNA基因区域,并以SSU、5.8S rRNA基因片段构建NJ亲缘关系树。     

枇杷属内栽培种和部分野生种ITS序列分析

对不同栽培区的25种普通枇杷品种以及7种枇杷属野生种的ITS序列进行扩增并测序,采用邻接法和最大简约法进行系统发育树的构建并对枇杷属内不同种间的遗传关系进行了分析。结果表明:枇杷属植物ITS序列ITS1+5.8S rDNA+ITS2总长度为592 bp或594 bp,长度变化发生在ITS2。所有样本的ITS1和5.8S rDNA长度一样,都是223 bp和168 bp;而ITS2为201 bp或203 bp。5种枇杷属野生种的ITS序列长度为594 bp,包括栎叶枇杷、大渡河枇杷、南亚枇杷、南亚枇杷窄叶变种和大瑶山枇杷;其余2种枇杷属野生种(麻栗坡枇杷、小叶枇杷)和普通枇杷栽培种的ITS序列长度都为592 bp。所有样本ITS序列的GC含量为64.2%~64.5%,其中ITS1为64.1%~65.5%,ITS2为68.1%~72.6%。对所有样本的ITS序列比对产生44个可变位点,其中38个为简约信息位点,其中11个位于ITS1,5个位于5.8S rDNA,22个位于ITS2。最大的种间序列差异为7.7%,最小的种间差异发生在麻栗坡枇杷和小叶枇杷之间,仅为0.2%。普通枇杷种内的ITS序列差异很低,25种普通枇杷栽培种之间的序列差异为0~1.5%。所研究的枇杷属植物可分为3个分支。分支Ⅰ包括所有普通枇杷品种,分支Ⅱ包含5种野生枇杷种,包括栎叶枇杷、大渡河枇杷、南亚枇杷、南亚枇杷窄叶变种和大瑶山枇杷;分支Ⅲ由2个野生枇杷种(麻栗坡枇杷、小叶枇杷)组成。该研究结果表明ITS序列对枇杷种间鉴定和系统发育分析具有一定意义,但对普通枇杷栽培种间的鉴定作用不大。     

Cryptic long internal repeat sequences in the ribosomal DNA ITS1 gene of the dinoflagellate Cochlodinium polykrikoides (dinophyceae): a 101 nucleotide six-repeat track with a palindrome-like structure

Extremely long PCR fragments were generated by PCR amplification of ITS and 5.8S rDNA from Cochlodinium polykrikoides against other dinoflagellates. These patterns were consistent among geographically different isolates of C. polykrikoies. DNA sequencing reactions revealed that the PCR products were 1,166 bp in length and consisted of 813 bp of ITS1, 160 bp of 5.8S rDNA and 193 bp of ITS2. Thus, the long length was caused mainly by the long ITS1 sequence. Cryptically, the ITS1 contained a tract of 101 bp that occurs six times in tandem. The six repeated elements had identical nucleotide sequences. ITS1, therefore, separated three distinct regions: the 5' end (122 bp), the six parallel repeats (606 bp), and the 3' region (85 bp). Interestingly, both the single and six-repeat sequences should be palindrome-like sequences. In inferred secondary structures, both repeat sequences formed a long helical structure. This is the first reported discovery of comparatively long internal repeats in the ITS1 of dinoflagellates.     

山姜属中药草豆蔻和益智nrDNA ITS区序列的测定

中药草豆蔻、益智的原植物分别为山姜属草豆蔻（Ａｌｐｉｎｉａ ｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓ Ｋ．Ｓｃｈｕｍ．）与益智（Ａ．ｏｘｙｐｈｙｌａ Ｍｉｑ．）。本文采用ＰＣＲ直接测序法,首次测定了它们的核糖体ＤＮＡ ＩＴＳ区序列。结果显示,两者序列长度（ＩＴＳ１＋ＩＴＳ２）分别为４０３ｂｐ与４０４ｂｐ,序列间具有２７个变异位点（包括５．８Ｓ编码区）。本研究为山姜属中药材的ＤＮＡ分子鉴定提供了必要的序列资料。