光波/微波组合-EDTA修复COX-2抗原及其在乳腺癌的表达及意义

目的观察不同抗原修复方法及修复液对COX-2抗原表达的影响及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法用光波/微波、高压锅结合枸椽酸缓冲液、EDTA作抗原修复处理,分别用即用型和浓缩型COX-2单克隆抗体对70例乳腺癌石蜡切片进行免疫组织化学染色。结果①光波/微波组合-EDTA、CA修复浓缩型COX-2的阳性率均比即用型COX-2的阳性率高(P0.01)。②高压锅抗原修复处理切片的免疫组化染色阳性率略比光波/微波的免疫组化染色阳性率高,但无统计学意义(P0.05);高压锅抗原修复处理的切片组织结构破坏程度和掉片情况均比光波/微波处理的重;③EDTA修复处理切片的免疫组化染色阳性率明显比用CA修复处理切片的免疫组化染色阳性率高(P0.01)。④COX-2表达水平与淋巴结转移有显著关系(χ2=5.24,P0.05);与年龄、肿瘤大小、组织学类型和分级之间无明显关系(P0.05)。结论用光波/微波-EDTA修复COX-2抗原,浓缩型COX-2抗体标记可明显提高免疫组织化学染色的敏感性,具有定位准确、阳性率高、操作简单、安全、组织结构保存好、不易掉片等优点;COX-2的表达与淋巴结转移显著相关,可作为乳腺癌的预后指标。     

ELISA测定中TMB显色体系的优化及其稳定性研究

通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚砜(DMSO)配制四甲基联苯胺(TMB)浓度为0.3 mg/mL的溶液为A液,pH5.5,0.2 mol/L磷酸氢二钠与0.1 mol/L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为0.74 mg/mL的溶液为B液,两者按一定比例混合后使用。试验结果表明,此显色体系在25-40℃内进行都可得到较为准确的结果,且A、B液混合后在室温下放置4 h仍可使用。A液及B液分别在4℃放置60 d后混合使用仍不影响测定结果。     

一种改良的BrdU免疫组织化学染色抗原热修复技术

目的：探索一种简单有效的行BrdU免疫组织化学染色抗原热修复的方法。方法：本实验探索了三种抗原热修复方法：1）漂片煮沸法,2）贴片煮沸法,3）贴片改良法。将贴有冰冻组织切片的玻片置于恒温封闭体系中进行热修复。之后行BrdU免疫组化染色,栗集图像对这三种热修复方法进行比较。针对贴片改良法行BrdU与NeuN、P。CERB和DCX的荧光双标,采集图像以观察该方法在免疫荧光甄标实验中应用的可行性。结果：1）漂片煮沸法脑组织切片在经过热修复处理后,切片卷起皱缩,不能进行后续实验步骤;2）贴片煮沸法可见少量BrdU阳性细胞,但背景深,且少数脑片起泡,假阳性现象严重;3）贴片改良法B-U免疫组化及与NeuN、P-CERB和DCX的免疫荧光双标染色背景浅,阳性细胞明显。结论：采用改良的热修复法能充分暴露BrdU抗原,DAB显色及免疫荧光染色结果理想。此方法为一种较好的行BrdU免疫组织化学染色抗原热修复方法。     

免疫组织化学染色质控及常见问题分析

免疫组织化学是应用免疫学和组织化学原理,对组织切片中抗原成分进行原位的定位、定性、定量研究的一种技术,在病理科工作中对疑难病例的诊断和分型有重要作用,并对指导临床治疗,了解肿瘤预后发挥重要作用,已成为病理科不可缺少的技术支持,因此免疫组化的质量控制显得尤为重要。本室经过长期实践对其流程进行了严格规范,制定了严格的标准化流程,现介绍本室流程如下并对常见问题作逐一分析。材料和方法1.材料常规送检病理标本,全自动脱水机,Leica切片机,包埋机等。2.主要试剂ER、PR、CK、CEA、CD20、CD30、CD15、Ki67、S100、NF-κB、P27、P53等一抗及免疫组化染色S-P试剂盒、浓缩型DAB试剂盒、抗体稀释液等,均购自上海长嘉生物技术有限公司。3.组织材料处理1)固定:组织取材新鲜,固定及时,形态保存完整,抗原物质的抗原性不丢失、不扩散、不破坏是获得良好免疫组织化学结果的前提。根据组织类型不同其固定时间一般应在6至48h,固定时间不足,会造成抗原丢失,可产生组织表面抗原为阳性表达,中央为阴性表达,固定时间超过72h会使抗原不可逆性破坏,无法修复,而产生阴性表达。本室固定液采用低酒精浓度(75%的酒精)...     

MW—DAB显色液在免疫组化中的应用

ＭＷ—ＤＡＢ显色液在免疫组化中的应用梁化印,郭瑞峰（保定解放军第２５２医院病理科保定０７１０００）应用微波（ＭＷ）技术对ＤＡＢ的配制和使用方法作了一些改进。现介绍如下：材料和方法一、材料：１．医用ＭＷ仪：采用浙江临安电子器材厂生产的ＹＷＹ７８１Ａ型医...     

喉淋巴管的几种组织化学显色法比较观察

目的为喉毛细血管和毛细淋巴管的鉴别提供更好的技术方法。方法采用间接注射法,5′-核苷酸酶-碱性磷酸酶双重显色法（5′-Nase-ALPase）,针对基底膜的免疫组化显色法。结果酶组化染色结果显示毛细血管和血管显示有清楚的蓝色轮廓,而附近的毛细淋巴管和淋巴管则呈棕色轮廓,两者易于鉴别。免疫组化染色结果显示毛细血管和血管显示清楚的棕色轮廓,而附近的毛细淋巴管和淋巴管轮廓极其浅淡,两者亦可鉴别。结论酶组化和免疫组化显色法是喉内区别毛细淋巴管和毛细血管的一种可靠且特异的方法。     

S.aureus对PMN粘弹性和细胞骨架影响的研究

利用微管吸吮技术和免疫组化染色,研究了在不同浓度金黄色葡萄球菌及其代谢液作用下多形核中性粒白细胞粘弹性的变化,以及在金黄色葡萄球菌作用下PMN细胞骨架的改变。结果发现金黄色葡萄球菌代谢液对PMN粘弹性无显著影响,而金黄色葡萄球菌悬液则对PMN的粘弹性有显著影响。各参数值随金黄色葡萄球菌浓度的增加而显著递增,至金黄色葡萄球菌浓度达10倍PMN浓度时趋于稳定;微丝和微管的免疫组化染色发现其细胞骨架形态发生改变,定量分析其光密度有显著增加。这些结果表明：PMN受金黄色葡萄球菌刺激后,细胞骨架发生了重新组装和骨架蛋白的表达,使PMN刚性和粘性均增加,促进在局部微循环中滞留粘附,发生炎性反应。     

免疫组织化学染色技术EV二步法和LSAB法的应用比较

将目前广泛使用的 L SAB法和 EV二步法进行应用比较 ,经反复实验后发现这两种方法有许多共同点 ,也有各自的优点。切片经 DAB显色后 ,颜色鲜艳呈棕黄色 ,二者没有差别 ;背景清晰干净 ,无非特异性染色 ,阳性物明显易辨 ,二者没有明显区分 ;对于强、中、弱反应的病例 ,二者的敏感性不分上下 ;阳性物的定位和定性以及试剂使用的便利性 ,二者都一样。在时间使用上 ,EV二步法至少要少 30分钟 ,在步骤上前者比后者少两个步骤 ,EV法比 L SAB法每例的试剂花费要高出 1.5元。在进行常规免疫组化染色的时候 ,首先要决定用什么方法来进行染色 ,…     

ABC法显示5-HT与脑血管双染技术及意义

5-羟色胺(5-HT)是己知最强的颅内血管收缩剂之一,对维持脑血管结构的完整性有十分重的意义.由于研究5-HT 在急性脑缺血病发生、发展过程中的作用,我们对5-HT 与脑血管在同一切片上进行了双标染色,取得了满意结果。1 材料与方法:选用健康 Wistar 大白鼠用过量比妥钠经腹腔麻醉后,结扎一侧颈内动脉30分钟,取脑组织1.5cm×1 cm×0.5cm 用0.5%戊二醛—4%多聚甲醛4℃固定6～9小时,切成40μm 冰冻切片用 DBA液(0.05mol/L pH7.6TBS 100ml、DAB 50mg、30%H_2O?_2 30u])显示血管10～15分钟,然后再用 ABC 法结合改良的 DAB 显色法(0.05mol/LpH 7.6 TBS 10ml,TAB 4mg、8%Nicl 50ul、3%H_2O_2 25ul)     

组织保护液在NADH-TR组织化学方法中的应用

还原型辅酶 四唑氮还原酶 (NADH- TR)组织化学方法是区别肌肉 、 型纤维的重要技术 ,该酶的显示对神经肌病的病理诊断和鉴别诊断具有实用意义。传统的酶组织化学方法 ,染色前多采用 1 %甲醛 -钙液及丙酮等固定液在 4℃下对组织进行处理 ,而后冰冻制片。实际应用中发现 ,经这些方法处理的组织 ,染色后酶活性明显降低 ,且容易扩散。我们经大量实验 ,在酶显色前 ,改用自行研制的组织保护液 (Tissue Protection Solution,TPS)对组织进行前期处理 ;同时对孵育液的配方进行改良 ,收到了理想染色效果。现将此法介绍如下 :1 .材料和方法1 .1…     

假肥大型肌营养不良肌细胞抗肌萎缩蛋白的免疫组化研究

目的研究假肥大型肌营养不良患者肌细胞中抗肌萎缩蛋白(dystrophin)的表达及其诊断意义。方法应用针吸型活检术取121例假肥大型肌营养不良症患者(108例DMD患者,13例BMD患者)的肌组织,采用HE染色观察被检肌肉病理改变,免疫组织化学染色技术检测抗肌营养不良蛋白表达,以正常人肌细胞作为对照。结果正常人肌细胞膜上抗肌营养不良蛋白染色阳性,呈完整环形条带沿肌细胞膜分布;DMD患者肌膜完全无显色;BMD患者染色弱阳性,可见沿肌细胞膜分布的间断表达。结果 应用针吸型活检技术和免疫组化染色法检测抗肌营养不良蛋白,有助于DMD和BMD确诊及鉴别诊断。     

闭锁卵泡中肾素—血管紧张素质系统的变化

目的：探讨卵巢局部的肾素－血管紧张素系统（RAS）在卵泡闭锁中的作用。方法：应用卵巢细胞双室培养,放射免疫测定（RIA）及免疫组化方法研究猪卵巢的健康卵泡和闭锁卵泡的颗粒细胞和卵泡内膜细胞与RAS的关系;观察了血管紧张素Ⅱ（AngⅡ)拮抗剂Saralasin及血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂Captopril的作用。结果（1）与健康卵泡相比较,闭锁卵泡的卵泡液及卵泡内膜细胞培养液中的AngⅡ浓度明显升高,肾素浓度则明显降低;而颗粒细胞培养液中的AngⅡ和肾素浓度均无明显改变;（2）闭锁卵泡切片的AngⅡ,2型血管紧张素Ⅱ受体（AT2）染色明显强于健康卵泡;AngⅡ和AT2水平在双室培养的闭锁卵泡的卵泡内膜细胞中明显强于健康卵泡的卵泡内膜细胞;健康和闭锁卵泡的颗粒细胞中的AngⅡ,AT2水平变化不大;（3）双室培养中加入Saralasin或Captopril培养48h后,（a)与健康卵泡相比,闭锁卵泡的卵泡内膜细胞培养液中的AngⅡ浓度显降低,肾素浓度明显升高;（b)健康和闭锁卵泡的卵泡内膜细胞AngⅡ和AT2免疫组化染色均呈现下降,（c)RIA结果显示,健康和闭锁卵泡的颗粒细胞培养液中的AngⅡ和肾素浓度无明显变化;免疫组化结果显示,颗粒细胞的AngⅡ,AT2水平亦无显改变。结论：卵泡闭锁与卵巢RAS密切相关,AngⅡ和AT2是卵泡闭锁的重要相关因子;卵泡闭锁过程中卵巢局部的RAS变化主要发生在卵泡内膜细胞;Saralasin和Captopril可能通过调节卵巢RAS而具有抑制卵泡闭锁的作用。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳配合荧光增白剂显色检测木霉几丁质酶同工酶谱

为提高木霉几丁质酶检测方法的准确性和灵敏度,建立一种快速检测几丁质酶同工酶的方法。采用活性凝胶电泳、变性凝胶电泳、原位显色凝胶电泳结合荧光增白剂（Calcofluor white M2R）显色从绿色木霉LTR-2发酵产物中检测几丁质酶同工酶。活性凝胶电泳在粗酶液浓缩5倍时显示两条活性谱带,变性凝胶电泳在浓缩10倍时显示一条活性谱带,原位显色凝胶电泳在浓缩20倍时显示两条不清晰的活性谱带,SDS-PAGE显示这两条活性谱带的分子量分别为65kDa和42kDa。结果表明活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Calcofluor white M2R显色相结合的方法在几丁质酶上样量为0.47U时具有较好的分辨能力,是检测木霉几丁质酶同工酶的有效的方法。     

网状纤维染色技术改进

目的探讨改进网状纤维染色氨银液配制方法与改进染色方法的可行性。方法改进网状纤维染色中氨银液的配制方法和染色方法,与传统染色方法比较其染色效果与脱片率。结果改进网状纤维染色方法切片背景清洁度、网状纤维清晰度、网状纤维与胶原纤维对比度3项指标的得分均显著高于传统方法;改进网状纤维染色方法切片脱片率低于传统方法。结论改进网状纤维染色氨银液配制方法、改进网状纤维染色方法,可提高氨银液配制的成功率,延长氨银液有效期,提高网状纤维的染色质量,减少网状纤维染色的脱片率。     

介绍一种改良的伊红染色液

在常规HE染色过程中,要求切片核浆对比要分明,细胞浆染色质量的好坏亦至关重要。伊红是细胞浆常用的染色剂,其配制方法较多,多用水溶性伊红染色液,在染色过程中发现水溶性伊红染色液易出现着色过淡、核浆共染及染色后的切片置一段时间后易褪色等现象,给观察切片的组织形态带来一定困难。我们根据伊红的化学性质和染色理论,结合实际应用情况,对传统伊红染液的配制方法进行了一些改良,收到了理想的染色效果。     

考马斯亮蓝显色液组分对蛋白质测定的影响

考马斯亮蓝（CBB）显色法测定蛋白质含量的主要缺点之一是线性关系差．通过研究显色液组分对线性关系的影响,发现显色液H⁺浓度是影响线性关系的主要因素,并提出了一个新的显色液配方来改善考马斯亮蓝蛋白质测定法的线性关系．     

苏木精染色液的改进和使用

报道了一种新的特制苏木精染色液的配制、使用方法、染色效果及其使用价值。实验表明,该染色液全面而明显地优于通用的Harris染色液。     

应用分离培养与免疫组化检测子宫颈癌中的细菌L型

本文应用微生物培养、革兰氏染色、免疫组化技术对５０侧宫颈癌进行了研究。结果发现,宫颈癌细菌及Ｌ型培养阳性率为５８％,以金黄色葡萄球菌（金葡菌）及其Ｌ型为主（２６％）,革兰氏染色Ｌ型检出率为６６／,免疫组化Ｌ型抗原阳性率为６８％,Ｌ型主要分布于间质和癌细胞内。提示Ｌ型感染与宫颈癌可能有一定关系     

六胺银染液配制方法的改进

六胺银 (Methenamie silver)染色广泛用于病理检测 ,是临床肾活检的重要的染色方法之一 ,该法可特殊地显示肾小球毛细血管基底膜 ,系膜基质、肾小囊壁层基膜以及肾小管基底膜的病理变化 ,亦是显示真菌、尿酸盐 [1 ] 等常用的一种方法。由于临床送检组织时多时少 ,预先配制的六胺银贮备液往往因放置过久而失效 ,导致染色失败。我们在 Gomor氏六胺银贮备液 [2 ] 的基础上将配制方法进行了改进 ,报道如下 :材料和方法1.试剂配制 :1.1　硝酸银分装于 EP管中 ,每只 2 5 mg,加盖 ,贴好标签 ,置 4℃冰箱内保存 ;六次甲基四胺 30 0 m g/只 EP管 ,…     

EnVision与特异性抗体的一步法免疫组织化学标记

探讨En Vision与特异性抗体复合一步法免疫组织化学标记的可行性及其应用效果。筛选适合于该法的特异性抗体。利用辣根过氧化物酶标记的第二抗体（En Vision）分别与72种单克隆和多克隆特异性抗体混合配制成即用型试剂,将两步标记法变为快速微波一步法,并对2100余例各种良性和亚性肿瘤的免疫组化标记结果进行观察和分析。结果显示绝大发特异性抗体的特异性和敏感性与标准En Vision法相似,其中46种特异性抗体结果稳定,重复性佳;14种特异必抗体稳定性欠佳,但临用前新配制效果仍较理想;12种不理想,不主张用于此法,结果表明En Vision与特异性抗体复合免疫组化一步法是一种有效、快速、简便的免疫组化染色技术。适用于临床病理快速免疫组化诊断,但对所用的特异性抗体应注意选择。