CDAP活化制备C群脑膜炎球菌结合疫苗原液的稳定性试验

目的评价以1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸(CDAP)活化制备的C群脑膜炎球菌结合疫苗原液的稳定性。方法以变通的现有工艺为基础,选取C群脑膜炎球菌结合疫苗原液连续3批样品,分别放置于(37±2)℃、(25±2)℃,和2~8℃三种温度下,根据稳定性试验原则定期取样并进行主要指标的检测,评估原液的稳定性。结果 C群脑膜炎球菌结合疫苗原液于2~8℃保存18个月,(25±2)℃保存20周,37℃保存7天,各项检测指标均符合质量标准的要求。结论在2~8℃之下,施行变通的工艺,C群脑膜炎球菌结合疫苗原液可稳定存放18个月。     

A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗及b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量检测方法的建立与验证

目的建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并加以验证。方法参照《中华人民共和国药典》三部(2010年版)中"毛细管柱顶空进样等温法",优化色谱条件,建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并对该方法进行验证及初步应用。结果色谱条件为顶空平衡温度70℃,顶空平衡时间40 min,汽化室温度200℃,柱箱温度40℃,检测器温度250℃,进样量为1.0 m L,载气(高纯氮气)流量1.3 m L/min,尾吹气(高纯氮气)流量5 m L/min,分流比1∶1。丙酮质量分数在2×10-6~5×10-5范围内具有良好的线性关系(r0.99)。丙酮的平均回收率及相对标准偏差(RSD)分别为86.05%~105.11%及2.1%~9.5%,检测限为2×10-6,定量限为3×10-6。结论本方法的线性、特异性、准确性、重复性等均符合规定,方法准确、稳定,可用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测。     

EDTA络合滴定法测定脑膜炎球菌多糖疫苗原液中的残留钙离子

目的建立EDTA络合滴定法,测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中残留钙离子含量,为疫苗的质量控制提供依据。方法在p H12的条件下,用乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)滴定液测定C群脑膜炎球菌多糖疫苗原液中的残留钙离子,并对该方法的线性范围、准确性和重复性进行验证及初步应用。结果钙离子质量浓度在0.200 2~1.602 0 mg/m L范围内,钙离子含量与消耗滴定液的体积呈现良好的线性关系,r0.99;在对照实验碳酸钙和无水氯化钙中,钙离子的回收率分别为100.9%和100.3%,相对标准偏差(RSD)分别为0.35%和0.21%;C群多糖原液加标回收实验中钙离子的回收率为99.7%~101.2%,RSD≤0.77%;测定6批C群脑膜炎球菌多糖原液中的钙离子浓度,RSD均≤5.6%。结论建立的EDTA络合滴定法简便、快速、准确,适用于A群C群多糖疫苗原液中钙离子含量的快速测定。     

A群C群脑膜炎球菌结合疫苗稳定性

目的评价A群C群脑膜炎球菌结合疫苗原液和成品的稳定性。方法分别将A群、C群脑膜炎球菌结合疫苗原液及A群C群脑膜炎球菌结合疫苗各选取连续3批,分别放置于37℃、20~25℃和2~8℃3种温度下,在一定的时间取样进行主要项目测定,在关键时间点进行全面检测。结果 A群结合疫苗原液于2~8℃保存9个月,20~25℃保存4周,37℃保存4 d;C群结合疫苗原液于2~8℃保存9个月,20~25℃保存6个月,37℃保存4周;A群C群脑膜炎球菌结合疫苗于2~8℃保存2年3个月,20~25℃保存6个月,37℃可以保存9周;各项检测指标均符合质量标准的要求。结论在2~8℃条件下,A群、C群脑膜炎球菌结合疫苗原液存放6个月,A群C群脑膜炎球菌结合疫苗存放2年,其质量稳定。     

顶空气相色谱法测定四价脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中残余二氧六环

目的建立并验证四价脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中残余二氧六环的检测方法。方法采用顶空气相色谱法,样品中加入碳酸钠固体,产生"盐析"效应,以增加二氧六环在顶空瓶中的浓度。通过HP-5毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.25μm,5%Phenyl Methyl-Siloxane),氢火焰检测器测定四价脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中残余二氧六环。结果二氧六环平均回收率及变异系数分别为86.16%～106.54%和2.4%～8.7%,在0.5004～40.032mg/L范围内相关系数值r=0.999 41,线性关系好,最低检测限为0.5 mg/L,最低定量限为2.5 mg/L。结论该方法溶剂用量少、灵敏度高、出峰特异、专属性强、色谱峰型好、分离度高、出峰时间短、影响因素少,是一种易于实现仪器自动化的分析方法。     

离子色谱法测定ACYW135群脑膜炎球菌结合物中Y群及W135群多糖含量

目的利用离子色谱法即高效阴离子交换柱层析—脉冲安培检测法(HPAEC-PAD),测定ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖含量的方法,并加以验证。方法将ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖用三氟乙酸(TFA)水解为特异性单糖(葡萄糖、半乳糖),并去除水解液中残留的TFA,用HPAEC-PAD分析检测,用PA10糖分析柱分离单糖,电化学检测器测定葡萄糖及半乳糖含量,用Chromeleon色谱工作站记录并分析数据。对上述方法进行专属性、准确性、重复性验证,确定该方法的检出限和定量限。结果 Y群和W135群多糖在TFA2.5 mol/L(终浓度)、90℃、4 h可完全水解为葡萄糖、半乳糖。对照品葡萄糖及半乳糖在0.10~60.00μg/m L范围内,质量浓度和色谱峰面积呈较好的线性关系,r均大于0.99,回收率为87.94%~109.80%,相对标准偏差(RSD)为1.00%~2.00%,检出限为0.05μg/m L(信噪比3∶1),定量限为0.10μg/m L(信噪比10∶1)。结论离子色谱法可同时检测脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群糖含量,该方法操作简便、灵敏、快速,干扰小,重现性好,适用于对相关疫苗生产过程中的质量控制。     

破伤风类毒素-细菌多糖结合疫苗中载体蛋白识别的结构性标志物

正细菌性脑膜炎的全球负担主要是由于奈瑟脑膜炎球菌和肺炎链球菌的侵袭性感染造成的。发达国家在1987年引入b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗前,Hib是许多细菌性脑膜炎的病因。Hib结合疫苗降低了Hib发病率达80%或更多,这依赖于疫苗的普及程度。单价脑膜炎球菌C群(Men C)疫苗于1999—2000年上市,在英国降低了由Men C引起的侵袭性脑膜炎球菌病90%以上。现在有3个上市     

速率比浊法检测ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗中各群多糖含量

目的建立速率比浊法准确检测ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗(group ACYW135 meningococcal conjugate vaccine)的各群多糖含量。方法制备多糖参考品和抗血清,建立检测ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗各群多糖含量的速率比浊法,对建立的方法进行验证及初步应用。结果①建立的方法具备高度的特异性,各群血清仅与本群多糖抗原发生特异性反应,与非本群多糖抗原无交叉反应;②在质量浓度为0.5～5.0μg/mL多糖参考品检测区间线性良好,相关系数r>0.98;③各群血清的最低检测限均低于质量浓度为0.35μg/mL;④批内和批间变异系数(CV)值分别为0.83%～5.34%和2.33%～13.88%,加样回收率为90.5%～118.4%,精密度和准确度均符合常规质量控制要求;⑤初步应用结果显示,建立的方法可准确检测疫苗的各群多糖含量,且与火箭电泳法检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立的方法简便快捷、灵敏准确、自动化程度高,可有效检测ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗的各群多糖含量。     

HPLC法测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量

建立了高效液相色谱法测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖的含量。样品经离心除去多糖后,采用阳离子交换柱分离,外标法定量分析。该法线性相关系数大于0.9999,回收率为98.8%,成品测定的CV值为1.2%(<2%),该法定量准确,重复性好,适于对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量进行快速检测。     

Infanrix~(TM)在学步儿童中的免疫原性和反应原性

正3剂b型流感嗜血杆菌-脑膜炎球菌血清群C/Y结合疫苗(HibMenCY-TT)免疫的15~18月龄的幼儿中,共接种四价脑膜炎球菌血清群A、C、W、Y的破伤风类毒素结合疫苗(MenACWY-TT)与第四剂白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗(DTaP)的研究。     

脑膜炎球菌荚膜多糖氧乙酰基相关特性及其作用机理

氧乙酰基(O-acetyl,OAc)存在于许多细菌多糖中,如脑膜炎球菌(meningococcus)A、C、W135、Y群荚膜多糖、大肠杆菌K1型荚膜多糖等均存在氧乙酰化修饰。由于荚膜多糖(capsular polysaccharides, CPS)中OAc的分布和占比被视为脑膜炎球菌多糖候选疫苗的关键质量控制因素,氧乙酰化修饰对多糖疫苗的免疫原性的重要作用,特别是脑膜炎球菌CPS OAc对其疫苗免疫原性的影响越来越受到关注。现就脑膜炎球菌CPS OAc的相关特性和检测方法、迁移因素、OAc修饰及其作用、OAc转移酶的作用机制、OAc对脑膜炎球菌免疫原性的影响作一概述,有助于脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗安全性和免疫原性的评价。     

婴幼儿初免和加强免疫接种四价脑膜炎球菌蛋白结合疫苗后B淋巴细胞应答

<正>四价脑膜炎球菌多糖-CRM197蛋白结合疫苗对婴幼儿有免疫效果。我们评估了婴幼儿初免和加强免疫该疫苗后的记忆性B淋巴细胞应答和抗体应答水平。5个月龄的婴幼儿初免疫苗后,有25%的婴幼儿体内可以检测到血清特异性记忆性B淋巴细胞,69%的婴幼儿体内可检测到针对A群脑膜炎球菌的保护性抗体滴度(hSBA≥4),超过95%的婴幼儿体内可以检测到针对其他群脑膜炎球菌的保护性抗体滴度。12个月龄的婴幼儿在进行加强免疫前,针对A群脑膜炎球菌的保护性抗体滴度     

脑膜炎奈瑟氏球菌疫苗

本章主要介绍疫苗发展前景中提到的A群、C群脑膜炎球菌结合疫苗和B群蛋白质疫苗。关于脑膜炎球菌疫苗发展史的综述发表于1995年。     

2～59岁健康人群接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫原性观察

目的评价ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～59岁健康人群中的免疫原性。方法 2～59岁健康人群接种者随机抽样(n=60),接种一剂四价脑膜炎球菌多糖疫苗。采集接种前和接种后1个月血清,采用体外杀菌试验(Serum bactericidal assay,SBA)检测血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度。结果免疫前、后血清抗A群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为1241(736,2091)和7559(5520,10351)(P<0.05);抗C群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为4(9,21)和4787(2947,7775)(P<0.05);抗W135群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为16(9,28)和368(162,883)(P<0.05);抗Y群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为120(58,246)和1373(687,2745)(P<0.05)。免疫前和免疫后血清抗A群脑膜炎球菌的杀菌滴度≥128的比例分别为87(77.4,95.1)%和100(83.2,100)%;抗C群脑膜炎球菌的比例分别为17(8.3,28.5)%和97(88.5,99.6)%;抗W135群脑膜炎球菌的比例分别为13(5.9,24.6)%和68(55.0,79.7)%;抗Y群脑膜炎球菌的比例分别为57(43.2,69.4)%和85(73.4,92.9)%。免疫后较免疫前抗A群、C群、W135群和Y群脑膜炎球菌杀菌抗体滴度≥4倍升高的比例分别为50(27.2,72.8)%、97(88.5,99.6)%、62(43.2,73.9)%和55(41.6,67.9)%。结论虽然免疫前人群由于地方和国家免疫计划的实施已具有较高水平的抗A群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度,但接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后可以使其保护水平进一步提高,并使人群对C群、W135群和Y群脑膜炎球菌的低水平杀菌抗体滴度均显著升高达到保护水平,证明ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～59岁健康人群中具有比较好的免疫原性。     

2000—2013年加拿大安大略省C群和Y群侵入性脑膜炎球菌病(IMD)的流行病学调查:疫苗项目影响评价

<正>2004和2005年,安大略省引入公共资助项目C群脑膜炎球菌结合疫苗免疫接种,引入对象为1岁龄儿童和青少年(接近12岁)。2009年,在7年级的学生中用四价脑膜炎球菌结合疫苗(MCV4)代替了MCCV。作者的目的是在加拿大安大略省,以人群水平确定脑膜炎球菌疫苗计划对C群和Y群侵入性脑膜炎球菌病(IMD)报告病例的影响。从安大略疾病报告系统,一体化的公共卫生信     

脑膜炎球菌疫苗血清学评价的相关研究进展

研究证明,脑膜炎球菌荚膜多糖、多糖蛋白结合物以及外膜蛋白等物质都能够诱导产生抗体,帮助保护机体抵御脑膜炎球菌疾病。阐述了脑膜炎球菌疫苗研制过程中特异性抗体的检测方法以及在疫苗效果评价中的意义,指出在脑膜炎球菌疫苗的效果评价中,抗体含量以及功能性抗体活性的检测是重要指标,为疫苗的市场应用提供了依据。     

A+W群脑膜炎球菌外膜囊泡疫苗的临床前免疫原性和功能活性研究及其和现有疫苗的比较

<正>脑膜炎球菌A群和W群是撒哈拉沙漠以南非洲地区细菌性脑膜炎疾病流行暴发的主要原因。在本研究中,我们由非洲脑膜炎球菌A群和W群的代表性菌株制备得到了A+W群脑膜炎球菌外膜囊泡(d OMV)疫苗,并在小鼠体内比较了这种疫苗和现有的脑膜炎球菌多糖疫苗及结合疫苗的免疫原性。使用临床前批次的A+W群d OMV疫苗以及商业化应用的疫苗对NMRI小鼠进行免疫,这些疫     

气相色谱法检测水痘减毒活疫苗原液中二甲基亚砜残留量

目的 建立测定水痘减毒活疫苗原液中二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)残留量的气相色谱法,并进行方法学的验证和初步应用。方法 采用气相色谱法检测,对色谱柱、柱温、分流比以及供试品预处理方法进行了优化,并对优化后的方法进行系统适用性和专属性、线性和范围、准确度和精密度、定量限和检测限、耐用性的方法学验证。结果 色谱柱使用DB-624(30 m×0.53 mm, 3.00μm)毛细管柱,以氮气为载气,进样口温度设定为250℃,FID检测器温度设定为270℃,柱温为120℃,分流比为5∶1。供试品在检测前采用乙腈沉淀蛋白的预处理方式(体积比1∶9～1∶19)以去除其中的干扰杂质。方法学验证结果显示,系统适用性和专属性良好,DMSO色谱峰与杂质分离良好,在50～1 000μg/mL范围内线性关系良好(R²=0.999 9)。检测限为20μg/mL,定量限为50μg/mL;准确度结果均在90%～110%之间,精密度的RSD均<10%。水痘减毒活疫苗原液中的DMSO残留量均未检出。结论 建立的气相色谱法能稳定、准确、快速地检测水痘减毒活疫苗原液...     

地高辛标记探针检测生物制品中残余DNA含量

用地高辛标记探针检测由传代细胞系生产的人用精制狂犬病疫苗,重组（CHO细胞）乙肝疫苗,出血热疫苗及痢疾多糖结合疫苗原液中残余DNA含量。结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,可用于上述生物制品中残余DNA含量的检测。     

伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液稳定性研究

目的评价伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液的稳定性,为该疫苗原液的制备、储存提供有力的数据支持。方法选取3批伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液分别放置于(37±2)℃、(25±2)℃和2~8℃温度下,根据稳定性研究方案定期取样,对其主要评价指标(多糖含量、结合物含量、相对分子质量、鉴别试验)进行检测,评估疫苗原液的稳定性。结果伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液于2~8℃放置22个月,(25±2)℃放置52 w,(37±2)℃放置24 w时,各项主要评价指标均符合其质量标准的要求。结论伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液稳定性良好,在2~8℃可稳定存放22个月。