S100A6通过巨噬细胞促结直肠癌细胞增殖的作用及机制

目的:探讨微环境中钙周期素S100A6是否通过影响巨噬细胞(macrophages,M_φ)进而促进结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞的增殖及其机制。方法:制备(原核表达)并鉴定带GST(glutathione S-transferase,谷胱甘肽S-转移酶)标签的人重组S100A6蛋白(recombinant GSTh S100A6,r S100A6)和对照蛋白GST;采用台盼兰计数、CCK8和结晶紫染色检测CRC细胞系HCT116的增殖能力;用定量实时聚合酶链反应检测M_φ中IL-6 mRNA水平;用Western blot检测M_φ中IL-6的蛋白水平、HCT116细胞中JAK2和STAT3及其磷酸化水平。结果:(1)成功制备r S100A6和GST蛋白。(2)与经r S100A6处理的M_φ(即A6-M_φ)共培养后,HCT116细胞的增殖能力增强(P 0. 05);同时,HCT116细胞中的JAK2和STAT3水平无明显变化,但其磷酸化水平提高(P 0. 05)。(3) A6-M_φ中,IL-6的mRNA和蛋白水平均升高(P 0. 05)。(4)在HCT116与A6-M_φ的共培养体系中加入IL-6R封闭肽后,A6-M_φ促HCT116细胞的活力和增殖能力的作用被部分逆转(P 0. 05)。结论:微环境中的S100A6可通过上调巨噬细胞中IL-6的表达、进而激活HCT116细胞中IL-6/JAK2/STAT3信号通路来促进CRC细胞的增殖。     

大鼠脾树状突细胞和巨噬细胞S-100蛋白免疫反应性观察

本文采用S-100蛋白免疫组化染色结合ACP组化染色(或lysozyme免疫组化染色)来进一步观察大鼠脾树状突细胞(DCs)和巨噬细胞(Mφs)的染色反应性。结果表明,脾悬液淋巴树状突细胞(LDCs)呈S-100蛋白阳性反应而ACP反应为阴性或弱阳性,Mφs则呈ACP强阳性反应而S-100蛋白反应为阴性;同一涂片S-100蛋白和ACP双染结果,两者不重叠。脾冰冻切片显示交错突细胞(IDCs)和滤泡树状突细胞(FCDs)呈S-100蛋白阳性反应而ACP反应为阴性或弱阳性,Mφs则反之,即ACP反应强阳性而S-100蛋白为阴性反应;同一切片S-100蛋白和ACP双染也无重叠。腹腔Mφs贴片对照染色,Mφs呈ACP强阳性反应而S-100蛋白反应为阴性。由此进一步证实在一定条件下S—100蛋白可作为鉴别DCs和Mφs的标志。     

肿瘤相关巨噬细胞与肺癌复发无相关性

宿主抵抗恶性肿瘤的功能主要是通过体内具有杀伤活性的细胞及其分泌的递质来完成的,例如,杀伤性T淋巴细胞、活性巨噬细胞(Mφ)、天然杀伤细胞(NK细胞)及抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。验中活性 Mφ特别引人关注,它不仅可直接杀伤肿瘤细胞,还可抑制肿瘤细胞的 DNA 合成。尽管许多实其     

前列腺癌细胞来源的外泌体诱导巨噬细胞极化

外泌体(exosome)是直径约30～150 nm的由细胞分泌的一种具有生物学活性的囊泡。有些来自癌细胞的外泌体可以将巨噬细胞(macrophages,Mφ)极化为M2亚型,但前列腺癌细胞来源的外泌体在巨噬细胞极化中的作用仍缺乏研究。本研究采用超滤法提取前列腺癌细胞PC-3M-2B4和PC-3M-IE8条件培养基中的外泌体(PCa-exo)。分别用透射电子显微镜、纳米粒径分析及Western印迹对外泌体形态、颗粒大小和表面的特异性分子标志进行分析鉴定。用PKH67标记外泌体,观察PCa-exo能否被巨噬细胞吸收。免疫荧光分析PCa-exo处理巨噬细胞后,M2型巨噬细胞表面分子标志CD206的表达差异。用q-PCR观察PCa-exo诱导后的巨噬细胞中IL-10、IL-1β等细胞因子的表达。电镜、Western印迹和纳米粒径分析的结果显示,PCa-exo形态多为圆形,直径约为40～150 nm,PCa-exo能被巨噬细胞大量吸收。PCa-exo诱导后,巨噬细胞中CD206荧光表达显著增高,IL-10、IL-1β及IL-12等炎症因子的表达水平与M2/TAM亚型巨噬细胞的表达谱一致。本研究表明,前列腺癌细胞来源的外泌体能诱导巨噬细胞极化为M2表型。     

转化生长因子-β1对前单核白血病细胞系THP-1的分化诱导作用

本文研究了重组人转化生长因子-β1对前单核白血病细胞系THP-1细胞增殖抑制作用和分化诱导作用。细胞染色计数和~3H-TdR掺入数据表明,在0.078—1.25 ng/ml浓度范围内,rhTGF-β1剂量与增殖抑制呈正相关。在抑制细胞增殖的同时,rhTGF-β1诱导细胞分化,诱导体系中细胞形态和生长方式均发生明显变化,细胞转为贴壁生长,表现出Mφ的细胞形态。α-醋酸萘酚酯酶、硝基蓝四唑还原、细胞吞噬试验均表明细胞具有Mφ的生物功能。电镜观察显示分化细胞具有典型的巨噬细胞样细胞形态,胞内出现Mφ所特有的亚细胞结构初级溶酶体和次级溶酶体。另外,TGF-β特异性中和单抗TB 21对实验体系THP-1细胞分化的阻断证明,THP-1细胞的分化确为rhTGF-β1诱导所致。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子包涵体提取、复性和纯化的研究

由基因工程大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)以包涵体的形式存在于细胞中,通过破菌、洗涤获得包涵体．再经过溶解、凝胶过滤、复性、疏水和离子交换柱层析得到了均一的产品,经高压液相和SDSPAGE电泳测定纯度均大于98％,rhGM—CSF的比活为3．2×10⁷IU／mg,纯化获得的rhGM—CSF为一酸性蛋白,等电点约为5．2,NH₂-末端前20个氪基酸序列测定结果与文献报道一致。rbGM—CSF的NH2-末端不均一．其中带Met的分子约占59．5％,第一个氨基酸为Ala的分子约占24．6％,为Pfo的分子约占14．6％。纯化过程中蛋白的纯化倍数为3．9,生物活性总得率为69．1％,工艺重复性好,易放大。     

抗大鼠巨噬细胞和多形核白细胞单克隆抗体的制备和应用

前言在研究工作中应用单克隆抗体在许多实验动物中鉴定淋巴细胞的群体和亚群是极其有用的。在一些实室验里已经制备成功几种与大鼠淋巴细胞表面抗原相反应的单克隆抗体OX—1 OX—6及抗T细胞的单克隆抗体。但是,迄今尚未涉及到抗大鼠巨噬细胞和多形核白细胞的单克隆抗体。而单核巨噬细胞和多形核白细胞则是免疫反应的重要组成部分。因此制备针对这些细胞的单克隆抗体,已成为大鼠角膜移植实验和其他有关实验的当务之急。这些单克隆抗体将会成为有用的标志,运用到实验大鼠模型中,以鉴定多形核白细胞、单核/巨噬细胞和淋巴细胞。本文将叙述     

人初乳中生长因子的研究

初乳中含有丰富的生长因子,可促进体外培养的ＮＩＨ－３Ｔ３细胞的ＤＮＡ合成,含０．５％（Ｖ／Ｖ）初乳的培养液与含５％小牛血清的培养液有相同的促进生长作用。初乳每毫克蛋白促细胞ＤＮＡ合成的能力比牛血清高３０倍。人初乳中生长活性物质较为丰富,含有两类生长因子－－初乳酸性生长因子（ＣＡＧＦ）和初乳碱性生长因子（ＣＢＧＦ）。这两种因子对尿素和盐酸稳定,其中ＣＡＧＦ不被巯基乙醇失活,而ＣＢＧＦ可被巯基乙醇失活     

甲胎蛋白(AFP)对巨噬细胞的作用

巨噬细胞是一类重要的免疫活性细胞,在机体免疫防御方面起着重要作用,不仅与B 细胞的抗体形成、T 细胞的激活等有密切联系,而且还能合成和释放大量具有重要生理功能的生物高分子以及直接作用于肿瘤细胞等,因此本文选择人和大鼠巨噬细胞为材料,观察了人体AFP(HAFP)对巨噬细胞的作用。(1)HAFP 具有抑制人巨噬细胞吞噬鸡红血球的能力,并改变巨噬细胞的电泳迁移率,HSA 没有这种作用。(2)AFP 阳性肝癌血清同样显示上述抑制作用,当去除AFP 后,抑制作用得到不同程度的解除。(3)大鼠腹腔渗出细胞与HAFP 的结合能力远远超过与HSA 的结合能力,腹腔巨噬细胞吞噬鸡红血球的能力受HAFP 的抑制率远较受HSA 的抑制率高。(4)HAFP 浓度与大鼠腹腔渗出细胞(巨噬细胞占70～80%)的结合率曲线、结合量曲线显示:(a)当HAFP<1毫微克/200微升时,K_D～2.5×10~(-12)M,HAFP 与腹腔细胞的作用符合正协同效应的变化规律;(b)当HAFP>1毫微克/200微升时,HAFP 的结合较松弛。(5)过氧化物酶标记免疫电镜定位观察到HAFP 滞留在大鼠腹腔巨噬细胞的表面。(6)置换实验证明HAFP 与腹腔细胞的结合有一定的特异性。根据以上结果,本文认为巨噬细胞的表面可能有HAFP 受体,HAFP 通过与巨噬细胞的结合抑制巨噬细胞的吞噬能力,推测在胚胎体内和正常成年个体内HAFP 起免疫调节作用,在肝癌患者体内起免疫抑制作用。     

甲胎蛋白(AFP)对巨噬细胞的作用

巨噬细胞是一类重要的免疫活性细胞,在机体免疫防御方面起着重要作用,不仅与B细胞的抗体形成、T细胞的激活等有密切联系,而且还能合成和释放大量具有重要生理功能的生物高分子以及直接作用于肿瘤细胞等,因此本文选择人和大鼠巨噬细胞为材料,观察了人体AFP(HAFP)对巨噬细胞的作用。(1)HAFP具有抑制人巨噬细胞吞噬鸡红血球的能力,并改变巨噬细胞的电泳迁移率,HSA没有这种作用。(2)AFP阳性肝癌血清同样显示上述抑制作用,当去除AFP后,抑制作用得到不同程度的解除。(3)大鼠腹腔渗出细胞与HAFP的结合能力远远超过与HSA的结合能力,腹腔巨噬细胞吞噬鸡红血球的能力受HAFP的抑制率远较受HSA的抑制率高。(4)HAFP浓度与大鼠腹腔渗出细胞(巨噬细胞占70～80%)的结合率曲线、结合量曲线显示:(a)当HAFP<1毫微克/200微升时,K_D～2.5×10~(12)M,HAFP与腹腔细胞的作用符合正协同效应的变化规律;(b)当HAFP>1毫微克/200微升时,HAFP的结合较松弛。(5)过氧化物酶标记免疫电镜定位观察到HAFP滞留在大鼠腹腔巨噬细胞的表面。(6)置换实验证明HAFP与腹腔细胞的结合有一定的特异性。根据以上结果,本文认为巨噬细胞的表面可能有HAFP受体,HAFP通过与巨噬细胞的结合抑制巨噬细胞的吞噬能力,推测在胚胎体内和正常成年个体内HAFP起免疫调节作用,在肝癌患者体内起免疫抑制作用。     

人类外周血单核细胞HLA-Ⅱ类抗原的表达及其与抗原提呈功能的关系

人类外周血单核细胞(HPMφ)是重要的抗原提呈细胞(APC)。APC在行使抗原提呈功能时,以其膜Ia抗原的表达为先决条件之一;但最强有力的APC是树突状细胞(DC)。部分HPMφ在一定条件下也可衍变为类似DC样的细胞。只有既是HLA—DR~+又是HLA—DQ~+的HPMφ才具有抗原提呈能力。人类Ia分子在抗原提呈中的作用是保护外来抗原,有利于T细胞的识别和激活,继而发生增殖反应。     

Novobiocin、Coumermycin A、Oxolinic acid、Nalidixic acid、溴化乙锭和ATP类似物对细菌病毒φ29细胞外DNA包装的抑制作用

四种抗菌素Novobiocin、CoumermycinA、Oxolinicacid和Nalidixicacid以及化合物溴化乙锭(Ethidiumbromide)和ATP类似物γ—S—ATP能抑制噬菌体φ29DNA的细胞外包装。达到50％抑制作用的药物浓度(不包括ATP类似物)分别为每毫升5、90、167、380和1.3微克。当ATP类似物加入完全纯化的φ29胞外DNA包装系统时,DNA包装的中间产物积蓄,DNA包装流产,表明DNA装壳的整个过程均需ATP的参与。这一发现为抗病毒药物的研究提供另一条线索。本文并对φ29DNA包装的可能机制进行讨论。     

SL-益生素对小白鼠体重及其单核吞噬细胞功能的影响

研究了SL-益生素(SL-P)对小白鼠体重和单核吞噬细胞功能的影响。经急性毒性实验检查,该益生素无急性毒性,无急性致病作用。灌服SL-P10d后,小鼠体重较对照组有明显提高。经过SL-P处理后,小鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)的吞噬率和吞噬指数较对照组有显著提高。灌服SL-P10d后,小鼠单核吞噬细胞的水解酶类:血清溶菌酶(血清LSZ),腹腔巨噬细胞溶菌酶(PMφLSZ),腹腔巨噬细胞酸性磷酸酶(PMφACP)的活性均有不同程度的提高,并呈现一定的剂量依赖关系,表明SL-P对小鼠单核吞噬细胞的吞噬和杀菌功能有明显的促进作用。     

巨噬细胞条件培养基对小脑皮质神经元生存的影响

用快速自动比色微量分析法检测巨噬细胞条件培养基(MφCM)对体外培养的生后7天SD大鼠小脑皮质神经元的作用。实验结果表明,MφCM具有支持神经元生存及增强其活性的作用。此作用以细胞密度1×10~5/孔,MφCM加入量10μl/孔为显著(P<0.05)。不同分子量的MφCM对神经元的作用亦有不同,>10KD分子量的MφCM比<10KD的作用强。     

p~(53)基因在U 937细胞生长和分化过程中的调节作用

本文报道了p~(53)基因对人白血病细胞系U 937细胞生长和分化的调节作用。重组人GM-CSF(rhGM-CSF)可诱导U 937细胞向成熟巨噬细胞分化,这反映在分化后的细胞表达有巨噬细胞许多表型特征和功能活性。在这一分化过程中同时伴随着p~(53)基因的表达增加和U 937细胞生长受抑。进一步,用反义脱氧寡聚核苷酸抑制试验特异性地抑制p~(53)基因表达,结果发现p~(53)反义脱氧寡聚核苷酸可以明显抑制rhGM-CSF诱导U 937细胞向成熟巨噬细胞分化,同时也明显解除rhGM-CSF介导细胞分化过程中的细胞生长抑制作用。这些结果说明p~(53)基因在U 937细胞的生长和分化过程中可能起偶联调控作用。     

SL-益生素对小白鼠体重及其单核吞噬细胞功能的影响

研究了SL-益生素(SL-P)对小白鼠体重和单核吞噬细胞功能的影响。经急性毒性实验检查,该益生素无急性毒性,无急性致病作用。灌服SL-P10d后,小鼠体重较对照组有明显提高。经过SL-P处理后,小鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)的吞噬率和吞噬指数较对照组有显著提高。灌服SL-P10d后,小鼠单核吞噬细胞的水解酶类:血清溶菌酶(血清LSZ),腹腔巨噬细胞溶菌酶(PMφLSZ),腹腔巨噬细胞酸性磷酸酶(PMφACP)的活性均有不同程度的提高,并呈现一定的剂量依赖关系,表明SL-P对小鼠单核吞噬细胞的吞噬和杀菌功能有明显的促进作用。     

巨噬细胞极低密度脂蛋白受体的调节作用

本文研究了小鼠腹腔巨噬细胞极低密度脂蛋白(VLDL)受体的调节。用富含甘油三酯(TG)的VLDL与小鼠巨噬细胞预温育后,细胞结合~(125)I-VLDL的最大结合容量(Bmax)比对照细胞只降低5％(1071/1127ng/mg细胞蛋白质),当细胞内TG增加到对照的2.5倍时,细胞摄取及降解~(125)I-VLDL的量分别下降40％和22％;乙酰-低密度脂蛋白(AC-LDL)预温育的细胞结合~(125)I-VLDL的Bmax比对照细胞只降低14％(633/831ng/mg细胞蛋白质),当细胞内胆固醇(Ch)增加到对照的23倍时,细胞摄取及降解~(125)I-VLDL的量只分别下降10％和21％。此后随着细胞内TG或Ch含量的增加,摄取及降解~(125)I-VLDL的量仍保持不变。 结论:细胞内TG或Ch含量对VLDL受体的调节作用微弱,与TG相比,Ch的调节作用更弱。     

不同地区人初乳中细菌多样性研究

初乳中的微生物在婴儿生长发育过程中具有多种有益作用。【目的】本研究分析了影响初乳微生物组成的多个因素,为后续探讨人初乳菌群的相关研究提供新思路。【方法】通过PacBio SMRT测序技术对37份采集自湖北恩施地区人初乳样本中细菌16S rRNA基因序列进行测序,并结合公共数据库中已公布的来自内蒙古、海南、广西、河北、黑龙江和江苏等地区的62份人初乳中微生物组数据,探究不同地区人初乳中菌群组成与结构特点。【结果】99份人初乳样本共注释到345个属,937个种,其中乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、Ralstoniainsidiosa、溶血孪生球菌(Gemella haemolysans)等是人初乳中的优势菌种。基于jaccard距离的主坐标分析(principal coordinate analysis, PCoA)显示,不同地区之间的人初乳菌群呈现显著分离趋势。同时比较影响初乳微生物组成因素的R2大小发现：地区>婴儿喂养方式>妊娠期健康状态>分娩方式>胎次。【结论】本研究通过比较多个因素对人初乳中细菌菌群的影响,发现不同地区是影响人初乳微生物组成...     

人白细胞介素3突变体的构建及其在大肠杆菌中表达的研究

人白细胞介素3(IL-3)是与造血有关的细胞因子,可直接诱导人骨髓和外周血干细胞的集落形成和增殖。IL-3可通过高亲合力的结合位点对成熟骨髓效应细胞(巨噬细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞)发挥作用,可促进巨噬细胞、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞的活力,延长存活期并抑制其死亡。rhIL-3还可提高巨噬细胞和嗜酸性细胞的细胞毒、杀菌以及杀癌细胞的能力。IL-3以非融合型蛋白难于在大肠杆菌中高效表达。本室应用遗传工程技术构建了pBV220 h     

恒河猴外周血单核巨噬细胞体外培养方法的建立

目的建立一种简单、经济、高效的培养恒河猴外周血单核巨噬细胞(monocyte-derived macrophage,MDM)的方法。方法用肝素钠抗凝管采集成年恒河猴(Macaca mulatta)全血,密度梯度离心法分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)。同时用无抗凝剂采血管采集同一只猴外周血,自凝后分离血清。将猴PBMCs置于Cell BIND Surface的96孔(0.8×106个细胞/孔)或48孔培养板(3×106个细胞/孔)中,用含不同百分比的猴自体血清或胎牛血清(fetal calf serum,FCS)的RPMI 1640培养液培养24 h后洗弃未贴壁细胞,加入含有猴自体血清或FCS的新鲜培养基继续培养7 d后观察细胞形态学。分化良好的猴单核巨噬细胞贴壁能力强,占据板底大部分区域。胞体形态多样,多数呈长梭形。用巨噬细胞标记受体(CD14)抗体染色判断细胞纯度。并用细菌内毒素(LPS)刺激分化的巨噬细胞,检测巨噬细胞炎性因子的表达。此外,用猴艾滋病毒(SIVmac17E-Br、SIVmac251)和人-猴嵌合体艾滋病毒(SHIV KU-1)感染分化良好的猴巨噬细胞,检测病毒在猴巨噬细胞中的复制。结果在含2%猴自体血清的RPMI 1640培养条件下,大多数(85%)猴单核细胞能在24 h内贴壁,体外分化5~7d后,猴巨噬细胞纯度大于96%。相比而言,含较高浓度(4%,8%或10%)猴自体血清或FCS的RPMI 1640培养基对猴单核细胞的贴壁和分化作用较差。分化良好的猴巨噬细胞对LPS刺激敏感,可产生多种巨噬细胞炎性因子。此外,这些细胞对SIV或SHIV均易感,产生感染性病毒。结论含2%猴自体血清的RPMI 1640培养基适于原代猴单核细胞的贴壁和分化。该方法简单、花费少,无需生长因子,且分化效果好,是培养猴艾滋病毒及开展相关免疫学实验的重要手段。