SARS病毒M蛋白的二级结构和B细胞表位预测

以SARS病毒基因组序列为基础,采用GarnierRobson方法、ChouFasman方法和KarplusSchulz方法预测蛋白质的二级结构;按KyteDoolittle方案、Emini方案和JamesonWolf方案预测SARS病毒M蛋白的B细胞表位。预测结果表明,在SARS病毒M蛋白N端第11～20、27～36区段和第133～141区段可能是α螺旋中心;M蛋白分子N端第20～27、34～37,44～56,61～64,70～76,79～97,117～132,142～147,165～176区段和第216～221区段可能是β折叠中心。在M蛋白N端第5～6、40～44、105～107、112～116、189～190、202～203区段和第210～215区段具有较柔软的结构,有可能进行一定幅度的摆动或折叠而形成较复杂的三级结构。SARS病毒M蛋白N端第1～15、37～47、99～120、181～192区段和第196～215区段内或附近很可能是B细胞表位优势区域。以蛋白质的二级结构预测作为辅助手段,用抗原指数,亲水性参数和可及性参数预测SARS冠状病毒M蛋白的B细胞表位,为实验确定SARS病毒M蛋白的B细胞表位和免疫识别研究奠定了基础 。     

人白细胞介素3突变体的构建及其在大肠杆菌中表达的研究

人白细胞介素3(IL-3)是与造血有关的细胞因子,可直接诱导人骨髓和外周血干细胞的集落形成和增殖。IL-3可通过高亲合力的结合位点对成熟骨髓效应细胞(巨噬细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞)发挥作用,可促进巨噬细胞、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞的活力,延长存活期并抑制其死亡。rhIL-3还可提高巨噬细胞和嗜酸性细胞的细胞毒、杀菌以及杀癌细胞的能力。IL-3以非融合型蛋白难于在大肠杆菌中高效表达。本室应用遗传工程技术构建了pBV220 h     

PCR技术对人IL-3 cDNA进行定点突变的研究

本文利用PCR技术对人IL-3cDNA体外进行定点突变,将人IL-3cDNA第3位Met,第116位Lys密码子突变为Val密码子GTT。PCR扩增片段核苷酸序列与引物设计相应的cDNA突变体序列完全一致。结果证实此方法比经典寡聚核苷酸方法简单、迅速、成本低、效率高,也为基因的修饰,蛋白质工程研究提供了简便、稳定的方法。