微载体系统动物细胞大规模培养技术

微载体系统动物细胞大规模培养技术王佃亮,肖成祖动物细胞大规模培养技术首创于１９６２年［１］,时隔五年,荷兰的ＶａｎＷｅｚｅｌ［２］率先在这一领域中使用了微载体（ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒ,ＭＣ）微载体系统（ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒｓｙｓｔｅｍ,ＭＣＳ）用于动物细胞大规模培养具有显著的优点：①兼具单层培养和悬浮培养的优势,且是均相培养;②细胞所处环境均一,放大容易;③环境条件（温度、ＰＨ、Ｃｏ２,Po2等)容易测量④具有较高的表面积体积比⑤培养操作可系统化、自动化,降低了污染发生的机会。     

用多孔微载体大规模长期培养动物细胞的方法

长期大规模高密度动物细胞培养是生物制药产业中的关键技术,文中介绍了利用多孔微载体在中试规模生物反应器中长期大规模连续培养分泌尿激酶 原的DNA重组中国仓鼠卵巢细胞（rCHO)的方法。     

用多孔微载体大规模长期培养动物细胞的方法

长期大规模高密度动物细胞培养是生物制药产业中的关键技术,文中介绍了利用多孔微载体在中试规模生物反应器中长期大规模连续培养分泌尿激酶原的DNA重组中国仓鼠卵巢细胞（rCHO）的方法。     

自制多孔微球高密度培养Vero细胞的初步研究

多孔微球是动物细胞高密度培养的有效手段,它是1985年由Verax公司开创的,最初用于流化床生物反应器生产单克隆抗体,后来又出现了Percell和Siran系统系列多孔微球,并且使用的反应器种类和生产的产品都在增加,于是便成为一种新型的细胞培养手段而日益受到人们的重视。为此,我们在利用微载体进行Vero细胞高密度培养的同时,又对多孔微球的制备和培养工艺作了初步探索。     

动物细胞培养用生物反应器及相关技术

动物细胞大量培养是生产生物制品的重要途径,它用到的关键设备是生物反应器。根据培养细胞、培养载体、培养液混合方式的不同,生物反应器主要有搅拌式、气升式、中空纤维式、回转式等,其中搅拌式规模最大。回转式是NASA于20世纪90年代中期开发的一种新型生物反应器,被誉为空间生物反应器,可用于组织工程研究。与生物反应器配套的技术主要有灌注、微载体、多孔微球、转入抗凋亡基因等,可以有效地提高细胞密度,增加生物制品产量,提高质量。今后生物反应器研制主要朝两个方向发展:一是,以高密度培养动物细胞生产蛋白质药物为目的,二是以三维培养动物细胞(主要是人类细胞)再生组织或器官为目的。     

VerO细胞在气升式反应器中的微载体培养

哺乳动物细胞的大规模培养是生产许多医学上重要生物制品的一种主要方法之－⑴。很多有工业价值的动物细胞都是贴壁细胞,必须附着在一定的表面上才能生长,微载体培养是一种有效的体系⑵。用于微载体培养的反应器多为搅拌式反应器,近年来,流化床式反应器越来越引起生化工程学家的重视。有希望用于大规模动物细胞培养的主要是液升和气升式。液升式反应器的优点是培养液可以间接氧饱和,气泡和细胞不直接接触。在气升式流态反应器中,气泡与细胞直接接触,其优点是操作方便,设备筒单。本文报道通过气升流态化反应器实现高密度贴壁细胞培养工艺条件的研究。     

用多孔微载体大规模培养rCHO细胞

多孔微载体是近年来发展起来的一种用于大规模高密度培养动物细胞的支持物,具有许多优点,如：容易固定细胞,适合于贴壁细胞和悬浮细胞的固定化连续灌流培养;细胞生长在载体内部,增加了细胞固定化的稳定性,可降低血清用量,适合长期培养;能保护细胞免受机械损伤,增加搅拌强度和通气量,强化反应器的传质;比表面积大,为细胞提供了充分的生长空间;细胞固定化过程简单无害,细胞能从长满细胞的微载体中自动转移到未长细胞的新载体中生长,接种方便,操作简单。特别适合于搅拌式、气升式、周定床和流化床等生物反应器的大规模培养〔1,2。尿激酶原(pro-UK)是一种重要的溶栓药物．与一般的生物医药制品相比,pro-UK给药量较大(约20mg／人～80mg／人),小规模生产不能满足市场需求。本文报道利用20L搅拌式反应器培养分泌pro-UK的重组CHO细胞的工艺条件,取得了初步结果。     

微载体高密度培养Vero细胞的研究

微载体是动物细胞高密度培养的有效手段。首先在硅化的方瓶中对Cytodex 1、Cy-todex 3、Biosilon、Bellco Glass Microcarrier、CT-1、CT-3、MC-1、CT-28种国产和进口微载体进行了比较和筛选。确定以Biosilon作为Vero细胞高密度培养的首选微载体。用500mlWheaton搅拌瓶探索影响Vero细胞高密度培养的条件,表明50～60mg/ml的微载体浓度、1～2×10⁶/ml的细胞接种密度、适当的通气(95％O_2+5％CO₂)对该细胞的高密度培养具有重要意义。在200ml培养体积的Wheaton搅拌瓶中,微载体浓度为50～60mg/ml,细胞接种密度为9.24×10⁵/ml,搅拌速度为65～85r/min,经25d培养,Vero细胞密度可达2.34×10⁷/ml,表明50～60mg/ml的微载体浓度对培养细胞没有毒性。接着在1.5L CelliGen生物反应器中进行培养,细胞接种密度为4.98×10⁵/ml,培养体积为1.2L,日灌流量从0.20L逐渐加大到3.65L,经22d连接灌流培养,最终细胞密度可达2.05×10⁷/ml。     

染色体显微切割技术

最近十几年里,在对染色体特定基因研究和分子标记遗传图谱等研究方面,以经典的遗传作图为基础,出现了很多新方法,微切及微克隆技术（ＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅＭｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎａｎｄＭｉ－ｃｒｏｃｌｏｎｇ）是随着近１０年来分子生物学技术的发展而诞生的...     

微载体培养技术的研究进展

本文对近年来广泛用于动物细胞培养的微载体技术的特点，培养过程的优化作了详细的评述。     

30L生物反应器连续灌注培养重组CHO—C28细胞表达HBsAg的研究

应用３０ Ｌ生物反应器和微载体悬浮 培养技术,通过电脑全自动控制,连续灌注培养分泌ＨＢｓＡｇ 的重组ＣＨＯ－Ｃ２８细胞。试验了培养方式、连续灌流速度,反应器转速和细胞对葡萄糖消耗等工艺条件。观察培养６０ 天,细胞的生长形态、ＨＢｓＡｇ 分泌动态和染色体数。研究结果表明,连续培养６０ 天,细胞密度可达７．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍ ｌ,平均维持在（５．０～６．０）×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍ ｌ,收液的ＲＰＨＡ 滴度可达１∶５１２,ＨＢｓＡｇ 每天平均产量为３０ ｍ ｇ。     

用多孔微载体Cytopore高密度培养CHO工程细胞生产rHEPO

在２．２Ｌｃｅｌｉｇｅｎ灌注培养系统中采用Ｃｙｔｏｐｏｒｅ多孔微载体培养产重组人促红细胞生成素（ｒＨＥＰＯ）的细胞Ｃ２。细胞密度达到１×１０７／ｍＬ,ｒＨＥＰＯ最高可达９．７ｍｇ／Ｌ。该载体具有表面积高,使用浓度低,便于扩大培养的特点,便于进行大规模培养     

大规模动物细胞培养技术研究进展

利用动物细胞大规模培养技术可生产多种生物制品,为提高细胞活力和表达水平及有利于表达产物的纯化,采用有多种添加成分的无血清培养基培养细胞,选择更有利于细胞生长又可提高培养细胞密度的微载体和条件温和、易操作、气体交换速度快的生物反应器,在线监控细胞生存环境和生理活动,减少培养过程培养基中的抑制因素,可创造更适合细胞生存的环境,提高表达水平,向细胞中导入抗凋亡基因,可提高细胞活性和蛋白产量。利用多也微载体以球转球方式大规模培养动物细胞有很好的发展前景。     

植物对环境污染的适应与植物的微进化

植物对环境污染的适应与植物的微进化段昌群（云南大学生物系昆明６５００９１）ＰｌａｎｔＡｄａｐｔａｔｉｏｎｔｏＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＰｏｌｌｕｔｉｏｎａｎｄＩｔｓＭｉｃｒｏ－ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ￥,ＤｕａｎＣｈａｎｇｑｕｎ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢ...     

使用旋转式生物反应器体外扩增人表皮细胞

目的：使用Cytodex-3微载体和高截面纵横比的旋转式生物反应器容器作为培养系统大规模扩增人表皮细胞（hECs）。方法：使用中性蛋白酶和胰蛋白酶．EDTA两步骤法从人皮肤中分离出人表皮细胞,使用DIL标记细胞后结合微载体后在旋转式生物反应器（RCCS）中培养,细胞贴附微载体的生长状态使用倒置显微镜,扫描电镜观测。并且分析细胞群体倍增时间来比较微重力培养与平面培养的体外增殖能力差异。结果：在旋转式生物反应器的微重力培养体系中,人表皮细胞能快速贴附到微载体表面,在培养过程中达到很大的细胞密度,并且表现出很强的增殖能力和细胞活性。结论：使用旋转式生物反应器和微载体悬浮培养人表皮细胞,是大量制备皮肤组织工程种子细胞的一种有效方法。     

南桥乔治王岛第三纪石化林段的孢粉植物群研究

本文研究了南桥乔治王岛海军湾（Ａｄｍｉｒａｌｔｙ Ｂａｙ）波兰站附近第三系石化林段的孢粉化石,共鉴定孢型７０余类,描述孢型２８种,包括新种Ｄｉｃｔｙｏｐｈｙｌｌｉｄｉａｔｅ ｓｔｕｃｈｌｉｋｉｉ,Ｆｏｖｅｏｔｒｉｌｅｔｅｓ ｐｕｎｃｔａｔｕｓ,Ｌａｋｉａｓｐｏｒｉｔｅｓ ｅｌｅｇａｎｓ,Ｌ．ｐｕｎｃｔａｔｕｓ,Ｌ．ｔｕｂｅｒｃｕｌａｔｕｓ,Ｒｕｇｕｌａｔｉｓｐｏｒｉｔｅｓ ｍｉｃｒｏｃｏｎｃａｖｕ     

国产生物反应器大规模高密度培养Vero细胞

本文考察了在2．5LcelliGen细胞培养器和国产20LcellCul-20细胞培养生物反应器中采用微载体技术培养细胞的情况。分析了用cellcul-20细胞培养生物反应器进行大规模培养时细胞的生长、代谢规律,研究了从2．5L扩大到20L规模的细胞转移条件。采用微载体球间直接转移技术。提高了接种效率,减少了接种步骤和污染机会。当国产GT一25微载体用量为5g／L,采用连续灌注工艺培养vero细胞,在国产20L cellCul—20细胞培养生物反应器中,连续培养5天,细胞数增加7倍,细胞密度超过1．0×10⁷ cells／m】。本文开发的细胞培养工艺,对于中试及工业规模的动物细胞大量培养具有一定的指导意义。     

多孔微载体无血清培养rCHO细胞生产u-PA

在30L搅拌式反应器中无血清培养分泌尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)的DNA重组CHO细胞,定期部分更换Cytopore多孔微载体,使生长在多孔微载体中的细胞不断更新繁殖,解决大规模细胞培养中的细胞凋亡问题。在91d连接换液培养过程中,细胞密度可维持在(1.3～2.6)×107／mL,活细胞比率维持在90％以上。在7.5L搅拌罐中培养细胞,利用外部周期性压力振荡刺激并结合载体更新技术,可减轻密度效应对细胞生长和表达的影响,在一定程度上提高细胞在高密度培养条件下的表达水平。在67d连续换液培养中,细胞最高密度为2.64×107／mL,活细胞比率维持在95％以上。与稳压操作相比,利用周期变压刺激技术可提高产量10％～20％,且可降低葡萄糖厌氧代谢生成乳酸的转化率,利用4步纯化工艺,从含u-PA约135g的2100L上清中获得约80gu-PA(单链比例约为90％)。     

微生态基本概念的剖析

微生态基本概念的剖析南昌大学生物科学工程系３３００４７赵发清,马海燕在执教过程中,笔者对微生态学的几个基本概念作了如下剖析,供同行参考与批评指正。１微生态学１．１微生态学定义至今有三个较完整的微生态学定义。微生态学（ｍｉｃｒｏｅｃｏｌｏｇｙ）一词由德...     

南极乔治王岛第三纪石化林段的孢粉植物群研究

本文研究了南极乔治王岛海军湾（ＡｄｍｉｒａｌｔｙＢａｙ）波兰站附近第三系石化林段的孢粉化石,共鉴定孢型７０余类,描述孢型２８种,包括新种Ｄｉｃｔｙｏｐｈｙｌｉｄｉｔｅｓｓｔｕｃｈｌｉｋｉ,Ｆｏｖｅｏｔｒｉｌｅｔｅｓｐｕｎｃｔａｔｕｓ,Ｌａｋｉａｓｐｏｒｉｔｅｓｅｌｅｇａｎｓ,Ｌ．ｐｕｎｃｔａｔｕｓ,Ｌ．ｔｕｂｅｒｃｕｌａｔｕｓ,Ｒｕｇｕｌａｔｉｓｐｏｒｉｔｅｓｍｉｃｒｏｃｏｎｃａｖｕｓ,Ｒ．ｃａｎｎｕｌａ－ｔｕｓ,Ｔｏｒｏｉｓｐｏｒｉｓｐｏｌａｎｎｕｌａｔｕｓ等;讨论了孢粉组合的植物群性质及反映的古气候以及地质时代。