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1.
抗真菌蛋白Rs—AFPs基因在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
将抗真菌蛋白Rs-AFP1和Rs-AFP2全长cDNA插入表达质粒pET-22b/NcoI+SacI位点,构建成融合蛋白表达载体pRAF1和pRAF2.将不含信号肽编码序列的Rs-AFP1和Rs-AFP2cDNA分别插入pET-22b/Ncol+Sacl和pET-22b/Ndel+SacI位点,构建成不含信号肽序列的融合蛋白表达载体pRAF3、pRAF4和非融合蛋白表达载体pRAF5和pRAF6.将构建的上述各种表达载体转化E.coliBL21,挑菌落培养,IPTG诱导,使Rs-AFPs基因得到表达,并用体外抑菌试验检测表达产物的活性,结果表明,各种表达载体的表达产物均具有不同程度的抑菌活性,其中,pRAF3和pRAF4表达产物的抑菌活性较明显. 相似文献
2.
霍乱毒素B亚单位基因(CtxB)的克隆及其表达 总被引:7,自引:0,他引:7
从霍乱弧菌中抽提基因组DNA,用PCER方法获取霍乱毒素B亚单位基因(CtxB)。序列分析结果表明,CtxB基因编码124个氨基酸,其中编码62位Thr的密码子与文献报道有差异。将CtxB基因插入质粒pGEX-4T-2,构建pGEX-CTXB表达质粒,转化大肠相菌BL21(DE30,筛选表达菌株CTXB/BL21。工程株经IPTG诱导表达,可产生大量的表达蛋白,经SDS-PAGE分析,融合蛋白分子 相似文献
3.
粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素—3融合蛋白的表达研究 总被引:1,自引:1,他引:0
利用PCR扩增得到粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)完整基因片段,将其分别克隆pGEM-T构建成GM-CSF/IL-3融合蛋白基因,DNA序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆对72RNA聚合酶表达载体pT7zz,得到表达质粒pFu,经转化至表达宿主E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经SDS-PAGE电泳鉴 相似文献
4.
利用DNA重组技术,将转录因子NF-κBp50基因片段插入pGEX-2T质粒载体,经DNA序列分析证明克隆的正确性.将重组的pGEX-2T/p50转化入大肠杆菌JM109,表达出pGEX-2T/p50融合蛋白.经WesternBlot检测证实表达产物对抗p50c的抗体呈特异性反应,表明克隆的正确性,并成功地应用纯化的p50蛋白制备了免疫血清.为进一步对NF-κB的功能进行研究打下了良好的基础 相似文献
5.
中国棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因的定位与克隆 总被引:10,自引:2,他引:8
以α32PdATP标记含CfMNPV几丁质酶基因的重组质粒为探针,在68℃条件下对棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒(HaSNPV)进行Southern杂交,将HaSNPV的几丁质酶基因分别定位在BamHIE、BglⅡE、EcoRIG、HindⅢF、XbaIH、BamHI+HindIIM和BamHI+XbaIH,并以pTZ19R为载体获得了XbaIH片段克隆。 相似文献
6.
人表皮生长因子(EGF)与单核—巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)融合?… 总被引:1,自引:0,他引:1
应用基因工程技术,将EGF,GM-CSF基因克隆到pGEM-3Zf载体的EcoRI,BamHI位点上,再钭重组融合基因亚克隆到表达载体pBV220扔EcoRI,BamHI位点上,在大肠杆菌DH5α中进行表达,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot表明EG-FGM-CSF融全蛋白获得表达,并且具有EGF,GM-CSF免疫学活活。 相似文献
7.
人GM—CSF cDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
从诱导的人胚肺细胞HFL株中提取总RNA.经RT-PCR反应获取了人GM-CSFcDNA,DNA序列测定表明其顺序与文献报道完全一致。为了获得高效表达,应用PCR改造了人GM-CSF的cDNA5’端核苷酸序列,并将改造的人GM-CSF基因插入含T7启动子的质粒pET-11d构建成表达质粒pETC-5,将此质粒转化大肠杆菌株BL21(DE3)得到表达菌株BLEC4。表达菌株用0.5mol/LIPTG诱导2小时后,产生大量重组蛋白并形成包涵体。SDS—PAGE电泳图谱扫描结果表明,rhGM-CSF产量占菌体总蛋白量的16%。ELISA和TF-1细胞培养测定表明,初步纯化和复性的rhGM-CSF具有天然的hGM-CSF生物活性。 相似文献
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通过基因工程操作,使乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)基因与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合,用新型Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞中高效表达了HBeAg-GFP双功能融合蛋白。经ELISA法和荧光显微镜观察证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有HBV的e抗原活性,为免疫诊断新方法的建立进行了有益的探索。 相似文献
10.
表达的白细胞介素-2-绿脓杆菌外毒素(IL-2-PE)融合蛋白以包含体形式存在于宿主菌中,为分离纯化表达产物提供了方便,但因需进行复性,也增加了后处理的难度.我们采用4mol/L尿素、0.5%TritonX-100的1×PBS洗涤包含体两遍,再经SephacrylS-300分子筛及DEAE-SepharoseFF阴离子交换柱层析后,获得的融合蛋白纯度可达90%~95%。此外,我们从GSSG浓度、L-精氨酸浓度、复性蛋白质的起始浓度、复性液的pH值、复性温度及复性时间等参数入手,系统地研究了融合蛋白的复性条件,探索到了IL-2-ME40和IL-2-PE664Glu融合蛋白复性的最适条件。 相似文献
11.
重组人融合基因Nm23—H1/HbFGF的构建及其在大肠杆菌中表达?… 总被引:1,自引:0,他引:1
根据Nm23-H1与HbFGFcDNA序列,人工合成一段中间核酸序列,将它分别与Nm23-H1cDNA的上游引物及HbFGFcDNA的下游引物组成两对引物,通过PCR(聚合酶链式反应)构建出融合基因Nm23-H1/HbFGF,将其定向克隆于质粒载体pBV220上,经诱导,SDS-PAGE分析,表达产物分子量为34kD,表达量占菌体总蛋白的14%,表达产物以包涵体形式存在,ELISA和Western 相似文献
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芝田硫化叶菌麦芽寡糖基海藻糖合酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 总被引:6,自引:0,他引:6
用PCR 方法从芝田硫化叶菌中扩增了编码一种新酶,即麦芽寡糖基海藻糖合酶( MTSase) 的基因,扩增的2-2kb DNA 插入到原核表达载体pBV220 中,构建成重组质粒pSBGT1 。pSBGT1 中MTSase 基因在大肠杆菌中得到表达。SDSPAGE 分析表达产物MTSase蛋白的分子量约为74kDa ,同核苷酸序列测定所推导的值相符。表达产物占细胞总蛋白约4-4 % 。pSBGT1 产生的重组酶作用于淀粉部分水解物,使DE 值降低,得到非还原糖或低还原糖。 相似文献
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缩短的人巨噬细胞集落刺激因子(M—CSF)在大肠杆菌中… 总被引:1,自引:1,他引:0
本文用聚合酶链反应(PCR)获得了一个缩短的人巨噬细胞集落刺激因子cDNA基因,并克隆在质粒pAET3d中,在T7启动子指导下,在大肠杆菌BL2LysE中获得了和一个6组氨酸短肽标签的融合表达。重组的融合M-CSF表达量占菌体总蛋白的12%,表达产物一部分以不溶性包涵体形式存在,另一部分则以可溶性蛋白存在。经过金属螯合新和层析一步纯化,所得的融合(His)6-M-CSF在还原型SDS-PAGE上基 相似文献
15.
观察了肽类生长因子对2BS细胞中抗癌基因表达的影响,结果表明,EGF或FGF均可明显诱导2BS细胞中Rb基因的表达,其幅度分别为305%,243%;EGF也可诱导2BS细胞中TGFβ1基因表达增加30-50%,但FGF对TGFβ1的表达无明显影响;EGF或FGF对P53基因的表达均无明显诱导作用。上述结果为生长因子作用机制研究及生长因子与抗癌基因的关系提供了新的线索。 相似文献
16.
nifH—gfp表达载体的构建及其在Enterobacter gergoviae 57—7中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
采用PCR技术,从GFPmut2中扩增得到三位点突变的报告基因gfpS65T、V68L、S72A片段,并将它和肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae(Schroeeter)Trevisan)M5a1的固氮酶结构基因nifH的启动子和其起始密码子相融合,获得nifH-gfp表达载体pMGFP2;再在pMGFP2上插入卡那霉素抗性基因,获得可在日勾维肠杆菌(Enterobacter 相似文献
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利用PCR技术并进行DNA序列测定,从人脑cDNA库中扩增得到人豆蔻酰CoA蛋白N端豆蔻酰转移酶的编码基因,构建其在T7启动子控制下的成熟型和His6融合型的表达质粒pMF-hNMT3和pMFHT-hNMT2。转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达研究。SDS-PAGE分析结果显示,在37℃条件下表达的各种重组hNMR几乎全是不溶性产物,但在较低温度条件下表达的His6-hNMR绝大 相似文献
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人重组GDNF及其生物活性研究 总被引:23,自引:0,他引:23
从人胎脑组织中提取总RNA,以RT-PCR方法获取编码胶质细胞源神经营养因子(GDNF)成熟蛋白的cDNA。将人GDNFcDNA插入含T7启动子的质粒pET-28a(+),构建表达质粒pET-GDNF,转化大场杆菌获得表达菌株BLGDNF,经诱导表达的GDNF形成包含体。凝胶自动扫描分析表明,表达量约占菌体总蛋白的30%以上。用纯化的GDNF蛋白免疫新西兰兔制备了GDNF抗血清。纯化和复性的GDN 相似文献
20.
用PCR法扩增出编码人FAS分子胞外区的cDNA片段,直接克隆到pGEM-T载体上,经DNA序列测定后,再插入到谷胱甘肽转硫酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX-KG的EcoRⅠ和SalⅠ位点之间,构成重组质粒pKG-hFAS,将此质粒导入大肠杆菌,经IPTG诱导后获得GST-hFAS重组融合蛋白的表达,用谷胱甘肽偶联的Sepharose4B经亲合层析获得纯化的GST-hFAS蛋白,经凝血酶酶切和二次亲合层析去除GST部分,得到纯化的FAS蛋白.用纯化的FAS抗原免疫家兔制备了抗FAS抗体,经检测发现抗FAS抗体能诱导U937细胞发生细胞凋亡 相似文献