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枯草杆菌蛋白酶基因工程的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
本文介绍了枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin)的研究现状,即利用定位诱变和体外重组等技术改变酶的性质,包括催化活性、底物特异性、稳定性、低温适应性以及酶在有机相中的性能等。对枯草杆菌蛋白酶的成功改造不仅有可观的商业价值,而且为蛋白质工程的发展作出了重要的贡献。 相似文献
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地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶基因的克隆与序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
以地衣芽孢杆菌2709染色体DNA为模板,应用聚合酶链反应方法扩增了碱性蛋白酶基因,PCR反应产物在1%琼脂糖凝胶上表现为1条1.1kb的条带。该片段经电泳纯化后被克隆于大肠杆菌质粒pBluescript SK上,获得aprL^+克隆株。DNA序列分析表明,它与枯草杆菌蛋白酶Carlsberg具有很高的同源性,同样由编码信号肽、前导肽及成熟蛋白的3个部分构成。 相似文献
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枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin,EC 3·4·21·14)一般是指枯草杆菌及其它芽孢杆菌产生的胞外碱性蛋白酶Subtilisin具有巨大的商业价值,被广泛应用于蚕丝工业、制革工业及洗涤剂工业。 相似文献
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枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)B135工程菌能产生抗氧化型碱性蛋白酶,粗酶经硫酸铵分级沉淀,CM-52层析,SephadexG-100层析,得到凝胶电泳均一样品,比活达到1700U/mg,是粗酶比活的7.69倍,该酶在60℃时酶活力是最高,最适pH为10.2在50℃时,温浴10min后,酶活降低到原来的50%,该酶受1MH2O3作用20min,仍保持96%的酶活。 相似文献
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本文主要阐述了一种具有纤溶活性的枯草杆菌(Bacillussubtilis)蛋白激酶产生菌株的筛选与鉴定的研究结果。作者从初筛的12株Bacillussublilis菌中,通过对固体发酵和液体发酵所产生的枯草杆菌蛋白激酶,用琼脂糖-纤维蛋白平板法测其活性,经比较不同菌株的活性,筛选出两株高产酶菌株:B.subtilisHW—12和B.subtilisHW—3。同时对菌体和菌落形态特点、生理生化反应进行了鉴定,认为B.SubtilisHW-12菌株可用来做为发酵生产该酶的菌种。 相似文献
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Eglin C是来自水蛭中的一种小型热稳定蛋白质,属于马铃薯胰凝乳蛋白酶抑制剂家族,可以抑制弹性蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、组织蛋白酶、α-lytic蛋白酶以及胰凝乳蛋白酶等。然而,利用eglin C纯化蛋白酶,尚未见研究报道。本文将化学合成的编码 eglin C及其突变体的基因序列,克隆到原核表达载体pQE30,在大肠杆菌BL21获得His6-Tag-eglin C及其突变体的重组蛋白质。SDS-PAGE显示,eglin C蛋白的分子量大约8 kD。His6-Tag-eglin C对胰凝乳蛋白酶、地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶、枯草芽孢杆菌PB92碱性蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶的半抑制剂浓度(IC50)分别为0.20±0.15、0.24±0.19、3.33±0.47和52.46±0.38 μmol/L。利用分子对接、基因突变以及荧光光谱等,分析eglin C及其突变体与2709蛋白酶的相互作用。结果显示,2709碱性蛋白酶对eglin C荧光淬灭属于静态淬灭,解离常数为2.60×10-7 mol/L,eglin C中的Asn50 残基对eglin C和2709碱性蛋白酶的结合发挥重要作用。利用eglin C与蛋白酶的特异结合的特性,构建亲和纯化载体,用于纯化来源于地衣芽孢杆菌的2709碱性蛋白酶,相比常规的蛋白酶纯化,显著简化了操作步骤。 相似文献
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应用基因工程手段,获得了枯草杆菌蛋白酶E的双突体基因(M222A,N118S),此基因在枯草芽孢杆菌表达得到了既抗氧又耐高温的碱性蛋白酶。含M222,N118S碱性蛋白酶基因的枯草杆菌发酵液经过硫酸铵分级沉淀和DEAESephadexA-25阴离子交换层析柱,再在FPLC层析系统直用Hiload26/10SSepharoseHP阳离了交换柱分离得到SDS-PAGE电泳纯的蛋白酶样品,突变体酶的等电 相似文献
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有四种工业上重要的酶种,经工程改造后改进了它们在工业应用上的性能。 枯草杆菌蛋白酶,通常加在洗衣粉中,去除蛋白质沾污效果很好。但漂白剂能使天然枯草杆菌蛋白酶失去活性。把解淀粉芽孢杆菌蛋白酶BPN'中对氧化敏感的222号甲硫氨酸换成抗氧化的氨基酸,如丙氨酸、丝氨酸或谷氨酰胺。这种酶在1M过氧化氢中仍保持活性。另外,用亮氨酸取代217位置上的酪氨酸残基,则BPN'对合成基质的水解能力比野生型酶高10倍以上。证明只要改变一个氨基酸,就能大大改进枯草杆菌蛋白酶BPN'在洗涤剂中的应用。 相似文献