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本文主要阐述了一种具有纤溶活性的枯草杆菌(Bacillussubtilis)蛋白激酶产生菌株的筛选与鉴定的研究结果。作者从初筛的12株Bacillussublilis菌中,通过对固体发酵和液体发酵所产生的枯草杆菌蛋白激酶,用琼脂糖-纤维蛋白平板法测其活性,经比较不同菌株的活性,筛选出两株高产酶菌株:B.subtilisHW—12和B.subtilisHW—3。同时对菌体和菌落形态特点、生理生化反应进行了鉴定,认为B.SubtilisHW-12菌株可用来做为发酵生产该酶的菌种。 相似文献
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美洲拟鲽抗冻蛋白基因(afp)导入番茄的研究 总被引:50,自引:0,他引:50
将整合在Ti质粒上的afp基因供体DNA,用花粉管通道和子房注射方法导入番 茄品种“中蔬四号”中,对D1、D2代进行Southern杂交获得杂交带;田间抗寒性试验表明,在春季平均气温低于正常年份4.4℃条件下,转基因组植株生长势优于对照;致死温度也比对照降低2℃、说明afp基因已整合转化番茄基因组并获得表达。 相似文献
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美洲鲽抗冻蛋白基因的亚克隆及构建转基因鱼的表达载体 总被引:1,自引:0,他引:1
用限制性内切酶Pst I部分消解含有美洲鲽抗冻蛋白基因的pCT5质粒,分离得到324bp的片段,将此片段亚克隆到pUC19质粒中,筛选到pUC-AF重组子。从pUC-AF重组子中,用BamHI和HirdⅢ切下324bp的抗冻蛋白基因,再重组到含有SV40病毒启动子的pKSV-10的载体中,构建成转基因鱼的表达载体,此表达载何可用于鱼的基因转移的研究。 相似文献
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用聚合酶链式反应(PCR)改造了锂鱼生长激素基因,扩增出编码锂鱼生长激素成熟肽的序列,并将此序列克隆到pBluescript Ⅱ KS质粒中,序列分析后,亚克隆到大肠杆菌表达载体pBV220中。经SDS-PAGE和薄层扫描,结果表明锂鱼生长激素基因已大肠杆菌中获得表达。锂鱼生长激素成熟肽的分子量为22000道尔顿,表达率占细胞总蛋白的18%以上%。 相似文献
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纳豆激酶基因的克隆与表达 总被引:39,自引:0,他引:39
利用PCR方法从分泌纳豆激酶的枯草杆菌基因组DNA 中扩增得到了纳豆激酶基因,并测定其核苷酸序列.利用基因重组技术构建了纳豆激酶基因的表达载体,并在大肠杆菌中进行了表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,表达蛋白占菌体蛋白的15.2% ,琼脂糖-纤维蛋白平板法测出表达产物具有溶解血栓活性. 相似文献
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鲤鱼生长激素基因在鲫鱼中的基因转移及PCR检测 总被引:2,自引:0,他引:2
鲫鱼群体内,个体之间的生长速度差别不大,遗传保守性较强,用常规育种方法很难获得生长速度快、个体差异较大的后代。通过基因转移技术,将外源基因如鱼的生长激素基因导入鱼的受精卵中,而获得转基因鱼是鱼类定向育种的一条有效途径。已有报道,在虹蹲鱼生长激素cDNA上游连结一个病毒启动子构建成表达质粒,由此获得的转基因鲤鱼比对照生长速度快20%。但是未见有将鲤鱼生长激素基因导入鲫鱼受精卵的报导。我们克隆了鲤鱼生长激素基因,并用它构建了含有病毒启动子(Fig.1,插入片段为0.8Kb,位于XbaI和PstI之间)的表达质粒(Fig.2,命名为pCMV-TK-CGH)。用该质粒对鲫鱼受精卵进行注射,共注射了1000粒卵,获得了转基因实验鲫鱼480尾,孵化率为48%。将其中100尾幼鱼于水簇箱中进行放养。选择其中个体较大的50尾进行PCR(检测。其中8条鱼的基因组DNA有0.6Kb的PCR扩增产物(Fig.3),表明其上整合有外源的鲤鱼生长激素基因,其整合率为16%。其中最大的一条体重4.2g,体长6cm,比对照(0.7g,4cm)体重增加5倍,体长增加2cm(Fig.4)。我们构建的是高效表达质粒,其上含有巨细胞病毒增强子和 相似文献
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本文报导了用PCR方法(Polymerase Chain Reaction)从抗胃癌单抗3Gg杂交瘤细胞的基因组DNA中,扩增出333bp的轻链可变区基因,克隆至pBluescript Ⅱks +/-载体上,筛选到阳性克隆。核苷酸序列分析表明:有53%的核苷酸序列与抗体基因库中的一般序列相符。证明已获得抗胃癌单抗轻链可变区基因。 相似文献
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一株具有纤溶活性的枯草杆菌(Bacillus Subtilis)的研究——液体发酵条件的选择 总被引:5,自引:0,他引:5
本文主要报告了,以BacilusSubtilisHW-12为试验菌株,在液体发酵中,所确定的发酵条件为:碳源是木糖,氮源是大豆胰蛋白胨,发酵液pH7.0,培养温度37℃,培养时间96小时。在这样的发酵条件下,该菌产酶活力为200尿激酶单位/毫升发酵液 。 相似文献
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