转美洲拟鲽抗冻蛋白基因（AFP）番茄的叶片电导率测定

对转美州拟鲽抗冻蛋白基因（ＡＦＰ）的第三代（Ｄ３）番茄及其对照,经低温处理后进行幼苗叶片组织电导率测定,发现转基因各组电导率均比对照明显降低,说明导入的ＡＦＰ基因已经表达并使番茄获得抗寒性。     

过表达LeNLP4转录因子提高番茄抗低温胁迫能力

NAC（NAM-ATAF1,2-CUC2）转录因子在植物胁迫响应中起重要作用。为了探讨三舭丹基因在番茄抗低温胁迫中的功能,分离了番茄LeNLP4转录因子基因,并获得转正义LeNLP4基因番茄植株。荧光定量PCR分析表明,LeNLP4的表达受低温诱导。与野生型植株相比,在4℃胁迫下转基因植株具有较高的生长量和光系统II（PSH）最大光化学效率（Fv／Fm）、过氧化氢（H2O2）和超氧阴离子（O2-）清除速率、抗坏血酸过氧化物酶（APX）和超氧化物歧化酶（SOD）活性,以及较低的丙二醛（MDA）含量和相对电导率（REC）。过表达株系中SICBF1的表达高于野生型。上述结果表明,LeNLP4的过表达提高了转基因番茄抗低温胁迫能力。     

转入甜椒热激蛋白基因CaHSP18提高番茄的耐冷性

利用农杆菌介导法将甜椒热激蛋白基因转化番茄,Northern和Western杂交表明CaHSP18在番茄植株中表达,获得转CaHSP18的番茄植株。Northern杂交显示,CaHSP18基因受低温诱导,表达量随低温处理时间的延长而增加,6h时表达量最高。低温胁迫导致野生型和转基因番茄植株的相对电导率升高,光爱统Ⅱ（PSⅡ）最大光化学效率（Fv/Fm）和放氧速率下降,但转基因番茄植物维持较低的膜透性,较高的Fv/Fm和放氧速率。这些显示,在番茄植株中CaHSP18表达后耐冷性有提高。     

过表达单脱氢抗坏血酸还原酶基因提高番茄抗UV-B胁迫能力

以野生型（WT）和转正义叶绿体单脱氢抗坏血酸还原酶基因（LeMDAR）番茄为试材,探讨了UV-B胁迫下过表达LeMDAR对番茄抗氧化能力的影响。测定了不同时间uV-B处理下番茄抗坏血酸（AsA）含量,脱氢抗坏血酸（DHA）含量,单脱氢抗坏血酸还原酶（MDAR）活性,光合速率和叶绿素荧光参数等。在UV-B处理下,转基因番茄植株的AsA含量、MDAR酶及抗坏血酸过氧化物酶（APx）活性、H：0：和超氧阴离子清除速率、净光合速率（只）高于野生型番茄。此外,紫外胁迫下,转基因株系丙二醛（MDA）含量和相对电导率（REC）较野生型增加的少。上述结果表明,MDAR对抗抗坏血酸再生具有重要作用,过表达LeMDAR提高了番茄植株抗氧化能力,对光合机构有保护作用。     

胆碱脱氯酶基因的转化及转基因番茄耐盐性的鉴定

采用PCR方法从E.coli TG1菌株中扩增得到胆碱脱氢酶（choline dehydrogenase,CDH）基因（betA),其氨基酸编码序列与文献中的资料一致,且能在原核表达载体pBV221中正确表达,并表现出活性。构建该基因的植物表达框架pRbA,经农杆菌介导叶圆盘法转化番茄,对转基因番茄的PCR、Southern、RT－PCR分析证实betA已整合到番茄基因组中,转基因番茄的耐盐性高于对照番茄。     

植物低温保护剂对番茄幼苗抗寒力的影响

采用由我们研制的植物低温保护剂对番茄幼苗抗寒力的影响。用植物低温保护剂处理番茄幼苗,超氧物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化物酶（ＰＯＤ）、过氧比氢酶（ＣＡＴ）活性升高,丙二醛（ＭＤＡ）含量及电导率降低。脯氨酸、可溶性总糖和叶绿素含量增加;根和叶的ＴＴＣ还原率同步增大,电导率同步降低;抗寒力鉴定结果表明：番茄幼苗可抵抗－２℃─－５℃［－２℃（５ｈ）─－３℃（３ｈ）－─４℃（３ｈ）─－５℃（１ｈ）］长达１２小时的低温,田间结果表明,番茄幼苗可抵抗－２℃─４℃低温长达一周。     

转甜菜碱醛脱氢酶基因植物的耐盐性研究

将山菠菜甜菜碱醛脱氢酶（ＢＡＤＨ）基因经农杆菌介导转入草莓、烟草,转基因植株中该基因的转录水平、ＢＡＤＨ活性及耐盐性均明显高于对照,膜的相对电导率和大分子渗漏值说明在盐胁迫下转基因植株的膜结构所受损伤小于对照。     

丛枝菌根菌丝桥介导的番茄植株根系间抗病信号的传递

菌根菌丝桥是植物间在地下进行物质交流的通道, 但它能否作为植物间地下化学通讯的通道来传递抗病信号则缺乏研究. 本文利用丛枝菌根真菌（AMF）摩西球囊霉在供体与受体番茄植株间建立菌丝桥, 对供体植株接种早疫病病原菌茄链格孢菌, 研究供体与受体番茄植株根系间是否存在抗病信号的传递. 荧光定量PCR检测表明, AMF侵染后的供体番茄植株再接种病原菌, 其根系中苯丙氨酸解氨酶基因（PAL)、脂氧合酶基因（LOX）和几丁质酶基因（PR₃）的转录水平显著高于仅接种病原菌、未接种病原菌和AMF, 以及只接种AMF的番茄植株. 更重要的是, 与供体有菌丝桥连接的受体番茄根系中PAL、LOX和PR₃的基因的表达量也显著高于无菌丝桥连接、菌丝桥连接被阻断以及有菌丝桥连接但供体植物未接种病原菌的处理,3个基因最高转录水平达到无菌丝桥连接对照受体植物的4.2、4.5和3.5倍. 此外, 供体植株根系启动防御反应的时间（18和65 h）比受体（100和140 h）早. 表明病原菌诱导番茄供体根系产生的抗病信号可以通过菌丝桥传递到受体根系.     

我国科学家在番茄表皮毛形成调控分子研究方面获进展

美国《国家科学院院刊》（PNAS）上在线发表了华中农业大学一项最新研究成果——番茄表皮毛形成及胚胎致死的调控机制（Aregulatorygeneinducestrichomeformationandembryolethalityintomato）。该研究通过图位克隆的方法分离并鉴定了番茄多细胞表皮毛形成的关键基因Woolly（Wo）,并深入研究了该基因参与番茄表皮毛形成的调控途径,     

IPsaur-ipt基因转化番茄的过氧化物酶同工酶分析

将整合在Ｔｉ质粒上的Ｐｓａｕｒ基因（生长素调节基因和细胞激动素合成酶基因的融合基因）通过花粉管通道法导入番茄品种中蔬四号、强力米寿、粉红甜肉、ＵＳ—Ⅰ、ＵＳ—Ⅱ中。对Ｄ１代转基因番茄用聚丙稀酰凝胶电泳方法进行过氧化物酶同工分析。结果表明,转基因番茄与对照植株的过氧化物酶同工酶谱带有明显差异,谱带多少和强弱都有所不同,而且相应地出现了植株形态学上的差异。间接验证了外源ＤＮＡ的导入。说明同工酶分析方法和田间形态学检测可作为转基因植株早期筛选的有效方法     

美洲拟鲽抗冻蛋白基因(afp)导入番茄的研究

将整合在Ｔｉ质粒上的ａｆｐ基因作为供体ＤＮＡ,用花粉管通道和子房注射方法导入番茄品种“中蔬四号”中,对Ｄ１、Ｄ２代进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交获得杂交带;田间抗寒性试验表明,在春季平均气温低于正常年份４·４℃条件下,转基因组植株生长势优于对照;致死温度也比对照降低２℃．说明ａｆｐ基因已整合到转化番茄基因组并获得表达     

Occurrence of Pseudomonas syringae pv. Tomato race 1 in Italy on Pto Gene-Bearing Tomato Plants

Bacterial speck symptoms on leaves of the tomato cultivar Erminia Fl (Petoseed), heterozygous for the Pto resistant gene, were observed in June 1995 in Northern Italy. Using individual-lesion isolation, 8 bacterial isolates were obtained from the affected leaves, which were identified as Pseudomonas syringae pv. tomato by biochemical, physiological, nutritional and pathogenicity tests. When the differential cultivar Ontario 7710, homozygous for the Pto gene, was inoculated with the bacterial isolates, 4 of them provoked the typical bacterial speck symptoms and therefore belonged to race 1. This is the first occurrence of P. syringae pv. tomato race 1 in Italy and the first time this race has been isolated on a Pto gene-bearing tomato cultivar grown in open field.     

转基因表达OPH提高番茄果实降解有机磷农药能力的研究

拟通过基因工程提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。构建了E8启动子基因驱动有机磷降解基因(OPD)的植物表达载体pSE8OP,经农杆菌介导遗传转化番茄子叶后,进行GUS染色、PCR和Southern blotting分析。证明OPD基因已整合进转基因植株基因组中,为1个拷贝。HPLC比较分析发现,转基因番茄果实能显著提高降解毒死蜱和对硫磷的能力,大大减少了番茄中的农药残留。     

Grafting on a Non-Transgenic Tolerant Tomato Variety Confers Resistance to the Infection of a Sw5-Breaking Strain of Tomato spotted wilt virus via RNA Silencing

RNA silencing controls endogenous gene expression and drives defensive reactions against invasive nucleic acids like viruses. In plants, it has been demonstrated that RNA silencing can be transmitted through grafting between scions and silenced rootstocks to attenuate virus and viroid accumulation in the scions. This has been obtained mostly using transgenic plants, which may be a drawback in current agriculture. In the present study, we examined the dynamics of infection of a resistance-breaking strain of Tomato spotted wilt virus (RB-TSWV) through the graft between an old Apulian (southern Italy) tomato variety, denoted Sl-Ma, used as a rootstock and commercial tomato varieties used as scions. In tests with non-grafted plants, Sl-Ma showed resistance to the RB-TSWV infection as viral RNA accumulated at low levels and plants recovered from disease symptoms by 21 days post inoculation. The resistance trait was transmitted to the otherwise highly susceptible tomato genotypes grafted onto Sl-Ma. The results from the analysis of small RNAs hallmark genes involved in RNA silencing and virus-induced gene silencing suggest that RNA silencing is involved in the resistance showed by Sl-Ma against RB-TSWV and in scions grafted on this rootstock. The results from self-grafted susceptible tomato varieties suggest also that RNA silencing is enhanced by the graft itself. We can foresee interesting practical implications of the approach described in this paper.     

利用多重PCR反应同时筛选番茄Cf-9和Tm-1基因

利用同一PCR反应体系,对分别与番茄抗叶霉病的Cf-9基因和抗番茄烟草花叶病毒病的Tm-1基因紧密连锁的PCR标记进行了同时扩增筛选,扩增的特异性片段与单引物扩增片段吻合。其中与Cf-9基因紧密连锁的CAPs标记在抗感试材均可扩增出560bp的特异片段,且都存在TaqⅠ酶切位点,抗病基因型酶切后分别产生了450bp、330bp和290bp的不同特异性片段,而感病基因型试材酶切后产生450bp和290bp的特异性片段;与Tm-1基因紧密连锁的SCAR标记为显性标记,只有抗病试材产生750bp的特异片段,不能被TaqⅠ酶切。经反复验证,结果稳定准确,可用于在同一PCR反应体系中对两个抗病基因进行同时筛选鉴定。该体系的建立不仅省时、省工、节省费用,而且可用于苗期辅助选育,加快番茄抗病育种进程。     

番茄果实中乙烯与多聚半乳糖醛酸酶的关系

乙烯与多聚半乳糖醛酸酶(PG)都是果实成熟过程中关键的调节因子.一方面,在有乙烯合成缺陷的转反义ACS番茄和乙烯感受缺陷的Nr突变体番茄果实中PG基因表达量都明显下降,PG酶活性明显降低;用外源乙烯(100 μL/L)处理绿熟期番茄果实使PG基因的表达明显增强,而1-甲基环丙烯(1-MCP,1 μL/L)处理转色期番茄果实明显抑制PG基因表达.另一方面,转反义PG基因番茄果实乙烯释放量在授粉后低于其野生型,番茄乙烯受体基因LeETR4和乙烯反应因子LeERF2基因表达量比野生种低.PG降解果胶的产物D-GA(100 mg/L)促进未熟期番茄果实中的乙烯生成和LeETR4、LeERF2基因的表达.     

通过表达ACC脱氨酶基因控制番茄果实的成熟

乙烯在跃变型果实的成熟过程中起着触发呼吸跃变和促进果实成熟的作用。细菌来源的1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶能降解乙烯的直接前体ACC,从而抑制植物体内乙烯的合成。我们用PCR方法从假单孢杆菌中克隆到ACC脱氨酶基因并通过农杆菌介导的方法将其转入番茄(Lycopersicun esculentum)中。再生植株经Southern blot检测证明,ACC脱氨酶基因已整合到番茄基因组中并稳定表达。转基因番茄果实成熟期的推迟时间与体内乙烯的抑制程度有相关性。转基因番茄植株乙烯的合成降低80%左右,果实在离体条件下可保鲜75d左右。研究ACC脱氢酶基因在植物体内的作用可阐明高等植物体内乙烯的作用机理并为培育耐贮藏果蔬品种打下基础。     

The Expression of CAT Gene in Transgenic Tomato Plant

Bacterial CAT gene .with the 35S promoter of CaMV was transferred into leaf discs of cultivar Lycopersicon esculentum 462 with the help of Ti plasmid of Agrobacterium turnefaciens. These leaf discs were placed on MS salt and B5 vitamine medium containing kanamycin and carbenicillin. Several kinds of phytohormones were chosen in the medium, and it was found that zeatin and NAA have great effects on shooting and rooting. Transgenic tomato plants showed their normal flowering and fruiting. Leaves of these transgenic tomato plants were used for assaying the gene expression. Resuits of Southern Blot showed that the CAT gene was stably integrated into the genome of transgenic plants, The bacterial CAT, proteins were also detected, in transgenic tomato leaves with immunoreaction of CAT antibody. The methods presented here for culturing transformed tomato ceils will be a great help for transfering economically important genes into cultivars of tomato plants in China.