用平截末端使大豆根瘤菌苹果酸脱氨酶基因插入失活及电激法转化

本实验用平截末端连接法把卡那霉素抗性基因插入到大豆根瘤菌（Ｂｒａｈｙｒｈ;ｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ）１１０的苹果酸脱氢酶（ｍｄｈ）基因中,致使ｍｄｈ基因失活,再通过电激法把这一重组基因转入大豆根瘤菌（Ｂｒａｈｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ）２１４３中,进而探讨ｍｄｈ基因失活对大豆固氮作用的影响。     

大鼠肾脏组织cDNA文库的制备和葡萄糖转运蛋白cDNA克隆的筛选

 大鼠的肾脏组织经匀浆后,提取纯化总RNA和mRNA合成cDNA,进行甲基化,加人工接头,最后连入载体(λgt11)和外壳蛋白包装步骤制成肾脏组织的cDNA文库。插入载体的cDNA长度为0.5kb到8kb之间。经反复稀释,测定出该文库的效价为1.5×10~7pfu/mL。     

番茄属(Lycopersicon)四个种的过氧化物酶同工酶分析

本文报告了应用连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳对番茄属Lyco-persicon的四个种:秘鲁番茄L.peruviaunm Mill.,多毛番茄L.hirsutum Humb.et Bonp,醋栗番茄L.pimpinellifolium(Jusl)Mill和普通番茄L.esculentum Mill.的86份材料,15个不同生育时期,不同器官以及同一器官的不同部位的过氧化物酶同工酶的分析结果。结果表明:L.Peruvianum的各个生育期和不同器官的过氧化物酶同工酶谱带叠加共有28条带,L.hirsutum有29条带,L.pimpinellifolium有28条带,L.esculentum有27条带。种间过氧化物酶同工酶谱型差异明显,种内不同生育期叠加总酶谱基本一致。在根、茎和叶中,这四个种的过氧化物酶同工酶酶谱和活性具有相似的生育期变化规律和器官分布规律.在果实发育过程中,种间过氧化物酶同工酶酶谱、活性及变化律规都不相同。本文还就同工酶谱型相似值的意义,野生资源及同工酶分析技术在番茄育种中的应用等问题进行了讨论。     

用反义技术解决番茄保鲜的研究进展

目前发现20多种与果实发育有关的酶和蛋白,其中14种mRNA在果实成熟过程中增加,8种受乙烯诱导,相关的基因已被克隆、测序并在染色体上定位．利用反义技术抑制这些酶和蛋白的表达,一方面可研究它们在果实成熟过程中的作用,另一方面从分子水平上解决了番茄保鲜问题．已将7种反义基因导入番茄,反义果实在离体条件下可保鲜90～120d．     

异戊烯基转移酶基因转化胡卢巴的研究

将含有生长素诱导的小分子ＲＮＡ启动子与异戊烯基转移酶基因的融合基因（ｐＳＡＵＲ－ｉｐｔ）的Ｔｉ质粒作为供体ＤＮＡ,通过花粉管通道法导入胡巴中。Ｄ１、Ｄ２代植株经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测,有杂交带出现,获得了转基因胡卢巴。对转基因胡卢巴Ｄ３、Ｄ４和Ｄ５代进行了生理生化指标及田间性状分析,发现转基因胡卢巴与ＣＫ相比有植株略矮、分枝数增多、双角数增多等表型变化,Ｄ４代叶绿素含量、半乳甘露聚糖含量增加,Ｄ     

番茄苹果酸脱氢酶同工酶分析

植物细胞内存在着苹果酸脱氢酶(MDH)的同工酶,催化苹果酶草酰乙酸反应。目前认为,MDH同工酶存在于不同的亚细胞结构中,参与不同的代谢途径。细胞质中的可溶性MDH与丙酮酸羧化支路相联系,与非自养性的二氧化碳固定有关;线粒体中的MDH催化三羧酸循环的一个步骤;微体中的MDH则与光呼吸或乙醛酸循环有关;而叶绿体中的MDH(其辅酶是NADP)和光合作用有关。可见MDH与植物生理代谢的多条重要途径密切相关。因此,分析MDH同工酶对于探讨植物的正常生理和病理是必要的。菠菜、玉米、小麦等植     

番茄芽期过氧化物酶同工酶与杂种优势的关系

同工酶结构的差异主要反映了基因的差 异,所以,同工酶分析方法成为现代遗传学研究 的一个有力工具。自1959年Markert和Mo1- ler^[8]首先提出了同工酶概念后,至今这一工作 已得到广泛开展^[1,2,7,9-11]     

分子克隆中使用的其他酶(续)

除限制性内切酶外,还有许多其他酶在分子克隆中被广泛应用,其性质将在下面给出。对有些酶,我们给出其详细的反应步骤与条件,而另一酶,我们给出文献,请读者自己找出其反应条件。为完整起见,在这里还介绍了分子克隆中几种不常见酶的性质,     

对TMV不同抗性番茄品种叶绿体DNA限制性差异片段的克隆

对ＴＭＶ不同抗性番茄品种ｃｔ－ＤＮＡ经限制性内酶切后,将所获得的差异片段Ｂａｍ６克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ中,经筛选、菌落原位杂交、斑点杂交及电泳鉴定,证明重组体为抗性品种Ｂａｍ６差异片段克隆,对探讨番茄ｃｔ－ＤＮＡ与抗ＴＭＶ的关系有重要意义。