癌患者血清中癌细胞凝集因子特性的研究

前曾报道癌患者血清中存在选择性凝集具高转移潜能的人鼻咽癌细胞的凝集因子．现除扩大了检测例数外,重点对癌患者血清中凝集因子的化学本质及生物学特性进行了系统研究,证明其可能是一种内源性凝集素（糖结合蛋白质）,特异性识别甘露糖及β1,6分枝的N-乙酰氨基乳糖．其作用不依赖于Ca+,而还原剂可提高其活性并对高碘酸氧化敏感．对这种内源性凝集素在癌栓形成及癌细胞转移中的作用进行了讨论．     

岩藻糖糖链与肝癌细胞的迁移作用

通过凝集素印迹转移电泳和亲和层析技术,对岩藻糖糖基化蛋白在肝癌细胞中的作用进行了研究.在化学诱发的大鼠肝癌过程中, 分子质量在23 ku到40 ku范围内与荆豆凝集素(UEA)及扁豆凝集素(LCA)结合的岩藻糖糖基化蛋白显著减少, 诱癌至17～20周这些条带重新恢复,而分子质量为80 ku的条带却在诱癌过程中逐周增加.比较高、低转移性肝癌细胞的岩藻糖糖基化蛋白, 发现高转移性肝癌细胞具有多种增强的条带.利用橘果粉胞凝集素(AAL)和LCA亲和层析柱分离了这些岩藻糖基化糖蛋白, 并用这些糖蛋白直接作用于肝癌细胞,发现AAL-糖蛋白具有显著抑制肝癌细胞迁移的作用,迁移细胞数从对照的(100±4.9)%下降到(48.1±2.5)% (P＜0.01), LCA-糖蛋白也有类似作用.用胰酶和木瓜蛋白酶水解蛋白质部分后,形成的糖肽抑制肝癌细胞迁移的作用并不改变,甚至增强.此外直接用肝癌转移灶的组织测定了岩藻糖转移酶活性,发现α1,6岩藻糖基转移酶活性显著比正常肝组织高,而α1,3岩藻糖基转移酶活性没有显著的改变.用系列凝集素分析发现这些糖链主要能结合伴刀豆凝集素A, 也能结合E-型及L-型植物凝集素, 显示这种糖蛋白的糖链可能含有较多的高甘露糖型.这些结果提示糖链在诱癌过程中结构有了改变,使之在肝癌细胞的迁移和转移中起重要作用.     

香螺血清、肌肉和唾液腺凝集素凝集性能的初步研究

研究香螺(Naptunea cumingi crosse)肌肉、血清和唾液腺凝集素对7 种脊椎动物红细胞、人的4 种红细胞、4 种单细胞藻类和11 种微生物细胞的凝集性能,同时进行pH敏感性、热稳定性、糖抑制性、EDTA、金属离子以及盐浓度影响试验.结果表明,3 种凝集素对各种细胞的凝集效应存在差异,以家兔红细胞的凝集效果最佳.肌肉和血清凝集素在pH<7.0时均失活,唾液腺凝集素的热稳定性最强,温度为90 ℃仍具有活性.此外,不同的糖溶液对3 种凝集素凝集效果的影响不同,在EDTA浓度为2.00～0.25 mmol/L范围内,3 种凝集素的凝集效价均受到不同程度的抑制.在金属离子影响试验中发现,Zn2+能明显提高肌肉和血清凝集素的凝集活力,而对唾液腺凝集素有抑制的作用.当盐浓度为12～18 g/L时,可增加香螺肌肉凝集素的凝集效价,而当浓度为24～60 g/L时却会抑制肌肉凝集素的凝集活性.     

凝集素芯片对体液细胞进行检测方法的建立和初步应用

建立对体液细胞进行自动捕获的凝集素芯片体系,利用凝集素对糖链的特异亲和作用捕获细胞,提取白血病患者外周血、肺癌胸水和肝腹水中细胞进行荧光标记,凝集素芯片捕获,激光扫描仪检测捕获细胞的荧光信号,常规HE染色后光学显微镜下观察细胞的形态并进行免疫化学反应,流式细胞仪验证凝集素芯片的特异性．结果表明：凝集素芯片可以对体液中的癌细胞进行自动捕获,对癌细胞膜表面糖链进行识别．芯片检测的细胞浓度最少可达每mL10^4个左右．芯片有较好的重复性和特异性．这种凝集素芯片可用于临床体液中癌细胞的检测分析,对癌细胞膜表面凝集素亲和位点进行即时、高通量的检测,为了解细胞膜表面聚糖在癌变过程中的变化提供了一个技术平台．     

一株产凝集素的三叶半夏内生真菌的研究

研究三叶半夏内生真菌及其凝集素,旨在为半夏内生真菌及其凝集素的开发利用提供依据。对三叶半夏块茎内生真菌分离、纯化,液体发酵培养代谢产物,无水乙醇提取总蛋白,兔血红细胞检测其凝集活性,筛选出菌株gs1,其总蛋白对兔血红细胞凝集活性显著。使用甘露聚糖-Sepharose 4B亲和层析柱纯化菌株gs1总蛋白,得到凝集素。Brandford法定量检测分析表明,1000 ml gs1发酵培养液中含有9.58 mg 凝集素。SDS-PAGE 电泳分析显示该凝集素为单一条带,分子量约为12 kDa。凝集活性实验表明,该凝集素对兔、大鼠和小鼠的血红细胞具有凝集作用,对兔血红细胞效果最显著;而对人（A＼B＼O＼AB型）和鸡的血红细胞无凝集作用。糖结合活性实验表明,甘露糖对该凝集素的凝集活性具有抑制作用。通过初步分类鉴定,菌株gs1为半知菌亚门,丝孢纲,丛梗孢目,丛梗孢科,曲霉属。     

蘑菇凝集素及其研究进展

凝集素是非酶、非抗体,可凝集细胞的蛋白质或糖蛋白。作为药用真菌重要的药理成分,蘑菇凝集素已成为继研究蘑菇多糖之外的另一活性物质。基于其众多生物学性质,其研究越来越深入,在生命科学各个研究领域中用途也越来越广。就蘑菇凝集素的分布、结构、性质、作用与功能、提取方法和应用作简要综述。主要涵盖凝集性质及其影响因子、抑制肿瘤及抗癌抗增生活性、促有丝分裂活性及免疫调节活性、毒性作用、抗植物病毒及杀虫剂活性、促菌丝分化及识别活性等。     

植物生长激素的细胞凝集效应

凝集素的发现已近100年.最初H.Stillmark发现蓖麻籽提取液可使红细胞凝聚.后来发现不但在植物种子中,而且在植物的其他部位如马铃薯块茎、番茄汁、延命菊叶子、某些葫芦科植物的韧皮部以及病毒、细菌、真菌、无脊椎动物和脊椎动物各类组织如兔肝,小鼠腺胸、牛肺、人肝中都含有凝集素·其中以豆科植物凝集素的含量最丰富,如大豆、刀豆蛋白质中凝集素占1.5—3％. 凝集素能凝集红血球、淋巴细胞、成纤维细胞、癌细胞、精子和细菌,有的还有清除血中糖蛋白,促细胞分裂,免疫和毒性等作用.鉴于豆科植物凝集素含量高、分布面广,并能凝集、识别根瘤菌使其便于侵入根部促进细胞分裂形成根瘤;而2,4-D也能凝集、诱导根瘤菌使其侵入由2,4-D促细胞分裂形成的根瘤原     

血清抑癌多肽某些生物学特性的研究

血清抑癌多肽(SCSP)在体外可以杀伤小鼠不同种类的腹水型癌细胞,如肝癌细胞、S180细胞、白血病细胞等。但它对小鼠的非癌细胞没有明显影响,对不同种类的人癌细胞株没有普遍的杀伤作用。 用反向间接血凝法检验结果表明,血清抑癌多肽可能由宿主脾细胞产生,而非来自癌细胞。 用超速离心法分离小鼠血清脂蛋白VLDL和HDL,并检测脂蛋白中SCSP含量与其对癌细胞杀伤作用的关系,相关性检验结果表明它们之间有相关关系。SCSP的含量高,则对癌细胞的杀伤作用强。     

野花生豆凝集素的纯化和性质

用猪胃粘蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂,可从野花生豆(Crotalarta mucronata)的种子中分离纯化出对人类A型血专一凝集的凝集素。该凝集素可用pH30.,Gly-HCl-1mol/L NaCl溶液解吸附。纯化的凝集素在PAGE或SDS-PAGE中均显示单一蛋白带,表明凝集素分子内只有一种亚基。用SDS-PAGE测得其亚基分子量为49,000。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含甘氨酸和谷氨酸,不合甲硫氮酸。纯化的野花生豆凝集素(简称CML)含有4.11％的中性糖。它对人A型血细胞有强烈凝集作用,对AB型血有弱凝集作用,但对B型和O型血均不凝集。其对A型血细胞的凝集作用可被N-乙酰半乳糖胺抑制,但对AB型血则无抑制作用。CML是一个促有絲分裂原,对人外周血中淋巴细胞有促有絲分裂作用。     

国产兵豆中凝集素的分离纯化与生化特性的研究

从国产兵豆中用葡聚糖凝胶柱层析法分离出一种对人红细胞有凝集作用的凝集素,当其浓度为5—7μg/ml时即可引起血凝。通过电泳分析,分子量、氨基酸组成、糖与金属离子含量的测定,对其纯度进行了鉴定。比较了5种糖对此种凝集素血凝的抑制作用,结果以甲基α-D-甘露糖苷抑制能力最强,D-半乳糖无抑制作用。在交叉亲和免疫电泳中,此种凝集素能对多数原发性肝癌患者血清甲胎蛋白糖基有坟强的结合作用。     

南鹤虱凝集素的研究

本文对伞形科16种植物(药用部分)是否存在凝集素进行了筛选。发现野胡萝卜果实与芹菜果实中有凝集素。野胡萝卜果实(中药名称南鹤虱)抽提液的凝血活性较芹菜强。 采用CM-纤维素及DEAE-纤维素对南鹤虱凝集素进行分离纯化。用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定亚基分子量为32600。 此凝集素对热及酸较稳定,对碱略差。对人的A、B、O血型无专一性。能凝集兎、小鼠、牛及鸡的血,但不凝集蟾蜍的血。 此凝集素的凝血活性能被D-木糖及N-乙酰葡萄糖胺轻微地抑制。 经shiff试剂检测表明南鹤虱凝集素为一糖蛋白。糖含量为3.4％。此凝集素分子中的谷氨酸门冬氨酸、精氨酸及絲氨酸的含量较高。     

糖原合酶激酶-3β在肿瘤细胞中的分子作用机制

糖原合酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)是一种多功能丝氨酸/苏氨酸激酶,通过磷酸化酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸位点介导Wnt、Hedgehog、NF-κB和PI3K/Akt等信号通路,参与各类细胞功能的调节。GSK-3β在不同信号通路和细胞类型中扮演不同的角色,导致其在不同的恶性肿瘤中发挥促癌或抑癌的双重作用,与癌细胞的迁移和侵袭有直接关系。在胰腺癌和结肠癌研究中,GSK-3β的高表达调控通过相关信号通路,增强细胞增殖调控因子表达,抑制负性调控因子的活性,促进癌细胞的增殖。GSK-3β能激活上皮细胞间质转型过程中相关因子的表达,增强癌细胞扩散能力;相反,在胃癌和肺癌中,GSK-3β具有积极的抑癌作用。GSK-3β通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡发挥抑癌作用,通过调节Wnt和PI3K/Akt信号通路,负向调控癌细胞的生长与侵袭,并且GSK-3β磷酸化相关因子以减弱其对癌细胞转移能力的刺激。本文总结了GSK-3β在不同恶性肿瘤中的作用及机制,并针对研究中存在的问题进行分析与展望,为相关领域的研究提供一定的理论基础。     

蒙古口蘑子实体凝集素性质初步研究

对蒙古口蘑干燥子实体研磨后,用磷酸盐缓冲液浸提,得到蒙古口蘑子实体的凝集素粗提物。对其性质进行分析表明,蒙古口蘑子实体凝集素对牛血和羊血都能凝集,且对羊血的凝集作用较强;D-果糖、β-葡萄糖、半乳糖和木糖对蒙古口蘑子实体凝集素均具有抑制作用;弱酸或弱碱性浸提液有利于凝集素的提取;蒙古口蘑子实体凝集素具有一定的热稳定性,直到70℃以后凝集红细胞的活力才丧失;凝集素的凝集活性对Ca2+、Mg2+、Mn2+和Fe3+这4种离子有不同程度的依赖。     

家蚕C型凝集素S11的克隆、表达及功能研究

【目的】C型凝集素(C-type lectin,CTL)广泛存在于植物和动物中,参与免疫防御反应、发育及细胞信号传导。鳞翅目昆虫中的C型凝集素依据长度和特征功能域可以分成S型、IML型和X型,目前对S型凝集素的功能了解非常有限。本研究对家蚕Bombyx mori L.C型凝集素S11进行了克隆、蛋白表达纯化和初步功能分析。【方法】基于先前对家蚕基因组中所有C型凝集素序列的生物信息学分析,通过PCR克隆了CTL-S11基因的全长c DNA;利用相关软件对核酸和蛋白质序列进行了比对和分析;通过大肠杆菌原核系统表达纯化重组蛋白;通过RT-PCR和荧光定量PCR研究了该基因的组织表达分布和诱导表达;通过凝集实验检测了重组蛋白对细菌的凝集作用。【结果】获得了长度为519 bp的CTL-S11全长c DNA序列,编码173个氨基酸,纯化得到分子量约为18 ku,带有组氨酸标签的重组蛋白。RT-PCR表明该基因在中肠、脂肪体、血细胞和表皮都有表达。荧光定量PCR结果表明,细菌喂食或注射家蚕幼虫后,CTL-S11的表达水平在某些时间点有显著上调。凝集实验显示,在钙离子存在的条件下重组蛋白对大肠杆菌和金黄葡萄球菌有明显的凝集作用。【结论】CTL-S11的表达可以被细菌显著诱导,重组蛋白可以引起细菌的凝集,因此其有可能作为免疫受体参与家蚕对病原微生物的识别。     

雪山豆(Phaseolus sp.)凝集素的亲和层析纯化与其部分性质

 用猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂作亲和吸附剂,可对雪山豆(Phaseolus sp.)凝集素进行亲和层析纯化。纯化后的凝集素在聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示单一蛋白质带。Sephadex G-100凝胶层析法测得分子量为65,000道尔顿,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明该凝集素分子仅有一个分子量为65,000道尔顿的亚基,酚-硫酸法测得总糖含量为4.6％,氨基酸组成分析表明雪山豆凝集素富含门冬氨酸,而甲硫氨酸含量甚少。该凝集素是强促有丝分裂原,对人外周血中淋巴细胞的转化率大于90％,细胞分裂比率达12％。雪山豆凝集素不仅能凝集多种动物红细胞,还能凝集人精细胞。经体外实验表明,雪山豆凝集素对人肝癌细胞有抑制作用。     

半夏蛋白的若干生物学性质

从半夏块茎鲜汁分离的半夏蛋白具有凝集细胞和促使细胞分裂的作用。在已测试的红细胞中凝集羊、狗、猫、兔、豚鼠、大鼠、小鼠和鸽的红细胞,但不凝集人、猴、猪和鸡、鸭、鹅、龟、蟾蜍、鳝的红细胞。半夏蛋白的血凝作用和已知的多种凝集素一样存在供血动物种属专一性。半抗原抑制试验结果,所测各种单糖、双糖、聚糖和糖蛋白中,只有甘露聚糖和含有寡聚甘露糖苷核心的甲状腺球蛋白有抑制作用,表明半夏蛋白只与甘露聚糖结合,且其分子上与糖互补的位置远远大于一个单糖分子的范围。是目前已知的唯一只与甘露糖而不与葡萄糖结合的一种具有凝集素作用的蛋白质。除红细胞外半夏蛋白亦凝集其它细胞,已测细胞中小鼠脾细胞、人肝癌细胞(QGY 7703-3和7402)、艾氏腹水癌和腹水型肝癌细胞均被半夏蛋白凝集,但它不凝集大鼠附睾和猪大网膜脂肪细胞,虽然能和这两种细胞结合。提示半夏蛋白的细胞凝集作用不仅具有动物种属专一性并存在细胞类别专一性。半夏蛋白的促细胞分裂作用亦有动物种属专一性,它促使兔外周血淋巴细胞转化,但不促使人外周血淋巴细胞分裂。     

半夏蛋白的若干生物学性质

从半夏块茎鲜汁分离的半夏蛋白具有凝集细胞和促使细胞分裂的作用。在已测试的红细胞中凝集羊、狗、猫、兔、豚鼠、大鼠、小鼠和鸽的红细胞,但不凝集人、猴、猪和鸡、鸭、鹅、龟、蟾蜍、鳝的红细胞。半夏蛋白的血凝作用和已知的多种凝集素一样存在供血动物种属专一性。半抗原抑制试验结果,所测各种单糖、双糖、聚糖和糖蛋白中,只有甘露聚糖和含有寡聚甘露糖苷核心的甲状腺球蛋白有抑制作用,表明半夏蛋白只与甘露聚糖结合,且其分子上与糖互补的位置远远大于一个单糖分子的范围。是目前已知的唯一只与甘露糖而不与葡萄糖结合的一种具有凝集素作用的蛋白质。除红细胞外半夏蛋白亦凝集其它细胞,已测细胞中小鼠脾细胞、人肝癌细胞(QGY7703-3和7402)、艾氏腹水癌和腹水型肝癌细胞均被半夏蛋白凝集,但它不凝集大鼠附睾和猪大网膜脂肪细胞,虽然能和这两种细胞结合。提示半夏蛋白的细胞凝集作用不仅具有动物种属专一性并存在细胞类别专一性。半夏蛋白的促细胞分裂作用亦有动物种属专一性,它促使兔外周血淋巴细胞转化,但不促使人外周血淋巴细胞分裂。     

波纹巴非蛤(Paphia undufata)体液和肌肉凝集素的初步研究

目的:研究波纹巴非蛤体液和肌肉凝集素对细胞的凝集性能及其理化性质,为开发新的凝集素来源提供基础材料。方法:利用10种动物及人的4种红细胞1、5种藻类细胞测定波纹巴非蛤的体液和肌肉凝集素的凝集活力,同时进行热稳定性、pH敏感性、糖抑制及金属离子影响试验。结果:体液和肌肉凝集素分别对家鸽、家兔血红细胞最为敏感,凝集效价最高,均为25。对藻类的凝集则具有某些专一性。体液凝集素有较高的温度耐受性,90℃处理10min仍能凝集兔血红细胞。肌肉凝集素对碱性环境较敏感,当pH≥8.0时,凝集活力消失。体液及肌肉凝集素在糖抑制及金属离子影响试验中也存在着差异。结论:波纹巴非蛤的体液与肌肉提取液均含凝集素,但所含凝集素类型不同。     

甘薯凝集素的提取及性质研究

抗蔓割病甘薯的叶片组织浸取液,经硫酸铵分级沉淀,甲壳素柱层析及葡聚糖凝胶过滤得到一种在PAGE或SDS－PAGE上均呈现单一蛋白带的甘薯凝集素。该凝集素没有血型专一性及被测动物红细胞专一性,其凝集活性可被N－乙酰葡萄糖胺或岩藻糖所抑制。甘薯凝集素在75℃加热10min,即丧失全部凝集活性,其凝集活性依赖于Ca^2 和Mg^2 ,Mn^2 则无作用。经Sephadex G-100和SDS－PAGE测定,凝集素相对分子质量为63000,中性糖含量为6.21%,该凝集素对蔓割病菌有抑制作用,是一种酸性糖蛋白。     

凝集素与细胞凝集 Ⅰ.伴刀豆球蛋白A及植物血凝素对正常细胞、胚胎及肿瘤细胞的凝集效应

自从 J.C.Aub 于1963年报道麦胚凝集素(WGA)对正常及肿瘤细胞的凝集作用有显著差异之后,已在数十种肿瘤及病毒转化的细胞也得到类似的结果。近年来又发现胚胎及分裂细胞也像肿瘤细咆一样易被凝集素凝集。因此,对凝集素的凝集效应与细胞癌变、繁殖和分化的关系,受到高度重视。