国产兵豆中凝集素的分离纯化与生化特性的研究

从国产兵豆中用葡聚糖凝胶柱层析法分离出一种对人红细胞有凝集作用的凝集素,当其浓度为5—7μg/ml时即可引起血凝。通过电泳分析,分子量、氨基酸组成、糖与金属离子含量的测定,对其纯度进行了鉴定。比较了5种糖对此种凝集素血凝的抑制作用,结果以甲基α-D-甘露糖苷抑制能力最强,D-半乳糖无抑制作用。在交叉亲和免疫电泳中,此种凝集素能对多数原发性肝癌患者血清甲胎蛋白糖基有坟强的结合作用。     

Stathmin SiRNA表达载体抑制stathmin的表达

目的:构建stathmin特异性SiRNA质粒表达载体,探讨其对鼻咽癌5-8F细胞stathmin的沉默作用.方法:合成用于stathmin基因特异性干扰表达的DNA片段,经退火形成双链DNA片段,片段克隆到质粒表达载体pGenesil 1.1上.载体导入JM109菌株进行筛选与扩增,采用酶切和测序对克隆表达载体进行鉴定.应用脂质体将鉴定后的重组表达质粒载体转入鼻咽癌5 -8F细胞,RT-PCR与Western Blot分析stathmin基因表达.结果:经酶切和测序鉴定,插入SiRNA质粒表达载体的stathmin特异性碱基序列和方向正确.重组质粒表达载体转染鼻咽癌细胞后,细胞转染效率达78.8 ±6.8％,stathmin基因在鼻咽癌中的表达明显下降.结论:构建的stathmin基因SiRNA质粒表达载体能抑制stathmin的表达.     

鼻咽癌CD44抑制表达细胞株的建立

目的:构建CD44新剪接变异体siRNA质粒表达载体,建立CD44新变异体抑制表达的鼻咽癌细胞株.方法:合成CD44新变异体特异性干扰DNA片段,干扰DNA片段亚克隆于带绿色荧光蛋白的pGenesil -1.3质粒表达载体中,双酶切和测序鉴定重组表达质粒载体;采用脂质体将重组表达质粒载体转染入鼻咽癌5 -8F细胞系,进行G418筛选;Western blot分析CD44表达.结果:重组CD44干扰DNA片段质粒表达载体的碱基序列和插入方向正确;细胞转染效率达70％;G418筛选获得GFP表达的单克隆鼻咽癌5 -8F细胞株;Western blot分析表明CD44表达受抑制.结论:建立了CD44新变异体抑制表达的鼻咽癌细胞株,为CD44新变异体在鼻咽癌中的生物学功能提供了基础.     

Survivin特异性SiRNA提高鼻咽癌移植瘤放射敏感性

目的：研究Survivin特异性SiRNA（small interfering RNA）对鼻咽癌移植瘤的放疗增敏作用,探索提高鼻咽癌疗效的新方法。方法：Survivin特异性SiRNA转染鼻咽癌5-8F细胞系,培养48h后,采用RT-PCR、流式细胞仪（flow cytometry,FCM）分别检测Survivin mRNA和蛋白在5-8F细胞中表达。将Survivin基因特异性SiRNA转染5-8F细胞,培养24h后,用剂量为6GY的放射线处理,培养6h后,收集细胞,进行裸鼠皮下接种,50d后处死裸鼠,对移植瘤进行分析。结果：Survivin特异性SiRNA能有效抑制5-8F细胞中Survivin表达。Survivin特异性SiRNA组,Survivin表达阳性率12.37±1.86%,与对照组阳性率91.93±1.3%和阴性对照组阳性率92.43±2.34%比较,差别具有显著性（p〈0.01）。特异性SiRNA加放射组移植瘤（0.03±0.03g）显著小于特异性SiRNA组（0.28±0.02g,p〈0.01）与阴性SiRNA加放射组（0.17±0.02g,p〈0.01）。结论：Survivin特异性SiRNA增强了鼻咽癌5-8F细胞移植瘤的放射敏感性。