维拉帕米对骨骼肌缺血再灌注损伤保护作用的酶组织化学研究

实验选用大鼠骨骼肌缺血再灌注模型, 观察骨骼肌缺血及再灌注后酶组织化学和超微结构的变化, 并观察维拉帕米的保护作用。结果显示： 骨骼肌缺血６ｈ 时, 骨骼肌细胞ＳＤＨ、ＣＣＯ、Ｃａ２＋ －ＡＴＰａｓｅ活性呈下降趋势, 而ＬＤＨ 活性则有所增强。再灌注１２ｈ 时, 骨骼肌细胞ＳＤＨ、ＣＣＯ、Ｃａ２＋ －ＡＴＰａｓｅ 活性进一步明显下降,同时ＬＤＨ 活性亦下降明显,而应用维拉帕米能在一定程度上保护上述酶的活性。与此同时,骨骼肌超微结构的改变与其酶活性的变化相一致。因此, 本实验提示： 骨骼肌缺血再灌注可损害其能量代谢酶的活性, 而维拉帕米则有较强的保护作用。     

牛磺酸对损伤的心肌肌膜ATPase活性影响的研究

本研究以异丙肾上腺素（Ｉｓｏｐｒｏｔｅｒｎｏｌ,Ｉｓｏ．）诱导的大鼠心肌损伤为模型,观察牛磺酸（Ｔａｕｒｉｎｅ,Ｔａｕ）对损伤心肌肌膜上Ｎ＿ａ￣＋—Ｋ＿－￣＋ＡＴＰａｓｅ、Ｃ＿ａ￣（２＋）－ＡＴＰａｓｅ、Ｍ＿ｇ￣（２＋）ＡＴＰＡＳＥ活性的影响。按Ｄａｈａｌｌａ方法分离及鉴定心肌肌膜同时分别测定三种ＡＴＰａｓｅ活性,结果：Ｉｓｏ组,与Ｔａｕ＋Ｉｓｏ组的三种ＡＴＰａｓｅ活性明显低于对照组与Ｔａｕ组,且同时Ｔａｕ＋Ｉｓｏ组明显高于Ｉｓｏ组但对照组与Ｔａｕ组之间差别无显著性。结果提示：牛磺酸能提高异丙肾上腺素诱导心肌损伤的心肌膜ＡＴＰａｓｅ活性,可能通过其保护心肌肌膜的结构及功能而实现的。     

骤冷与饥饿对小鼠肝脏影响的实验研究

为探讨饥饿及饥饿与骤冷对动物肝脏的影响,本实验用健康昆明种小鼠２５只,随机分成正常组５只,饥饿组１０只,饥饿后再予冷刺激组１０只（下称骤冷组）。采用组织化学及酶组织化学方法观察糖原（ＰＡＳ反应）、ＳＤＨ（琥珀酸脱氢酶）,ＬＤＨ（乳酸脱氢酶）,ＣｈＥ（胆碱酯酶）、Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ（镁激活三磷酸腺苷酶）,ＡＣＰ（酸性磷酸酶）。结果提示：饥饿时肝脏ＰＡＳ反应,ＳＤＨ,Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ、ＣｈＥ活性显著下降,而ＡＣＰ活性明显增强;饥饿后骤冷时ＰＡＳ（反应）、ＳＤＨ、ＣｈＥ更显著下降,而ＡＣＰ及Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性反而增强。     

DOPE、DOPC对重组去脂肌质网Ca~(2+)-ATPase活力和构象的影响

经磷脂酶Ａ２ 去脂的肌质网Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 重组于不同比例的二油酰磷脂酰胆碱（Ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ,ＤＯＰＣ） 和二油酰磷脂酰乙醇胺（Ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ,ＤＯＰＥ） 形成脂酶体,研究了不同磷脂环境中Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 的ＡＴＰ 水解和Ｃａ２ ＋ 转运活力。结果表明,ＤＯＰＣ 和ＤＯＰＥ 分别有利于ＡＴＰ 水解和Ｃａ２ ＋ 的转运,ＤＯＰＥ 可以增强Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 的ＡＴＰ水解和Ｃａ２ ＋ 转运之间的偶联效率。利用内源荧光、荧光淬灭及Ｆｏｒｓｔｅｒ 能量转移原理测定Ｃａ２ ＋ －ＡＴＰａｓｅ 相应的构象变化, 发现随着ＤＯＰＥ／ ＤＯＰＣ 比例的改变使Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 构象发生相应的变化。     

大鼠实验性脾虚证胰腺组织化学研究

用成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠３０只,分为（１）正常对照组,喂饲自来水。（２）脾虚组,用苦降破气中药和饮食失节法致成脾虚模型。（３）自然恢复组,动物致虚后,喂饲自来水。（４）中药治疗组。取四组动物胰腺进行ＲＮＡ,琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）,乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）,三磷酸腺苷酶（ＡＴＰａｓｅ）,葡萄糖－６－磷酸酶（Ｇ－６－Ｐａｓｅ）和硫胺素焦磷酸酶（ＴＰＰａｓｅ）组织化学反应和观察,并对ＳＤＨ,ＬＤＨ,ＲＮＡ进行了显微分光光度计定量测定。本研究结果表明,脾虚组胰腺泡细胞的ＲＮＡ,ＳＤＨ,ＡＴＰａｓｅ,Ｇ－６－Ｐａｓｅ,ＴＰＰａｓｅ含量和活性都低于对照组,而ＬＤＨ活性高于对照组。治疗组与自然恢复组相比,治疗组胰腺泡细胞以上指标接近对照组。定量测定与定性的结果一致。本研究表明,脾虚证时胰腺泡细胞上述几种酶活性和ＲＮＡ明显下降,可能在脾虚证发病中起主要作用,中药治疗有显著改善     

丹参对鼠缺血后残肝酶组织化学的影响

研究观察鼠缺血后肝再生时酶组织化学的变化。结果表明缺血后肝再生时肝细胞ＳＤＨ、Ｇ６Ｐａｓｅ和Ｍｇ２＋ＡＴＰａｓｅ活性及ＰＡＳ反应均在不同程度上低于对照组,而ＬＤＨ、ＡＣＰ活性较对照组有不同程度升高。丹参组酶活性及ＰＡＳ反应基本处于缺血组与对照之间,说明丹参对保护某些酶活性,促进肝再生有一定的作用     

不同频率电刺激膈神经导致膈肌肌浆网Ca~(2 )-ATPase和Ca~(2 )释放-摄取动力学改变

研究不同频率慢性电刺激（ＣＥＳ）后兔膈肌肌浆网（ＳＲ）Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性以及ＳＲ Ｃａ２＋摄取－释放动力学对不同频率ＣＥＳ的适应性变化。建立不同频率ＣＥＳ组;用定磷法测定ＳＲ Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性;用Ｆｕｒａ－２荧光法测定ＳＲ　Ｃａ２＋摄取－释放动力学。与对照组比较,慢性低频电刺激１０ Ｈｚ和２０Ｈｚ组的ＳＲ　Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性明显降低（Ｐ＜０．０１）,Ｃａ２＋释放－摄取动力学也显著降低（Ｐ＜０．０１）;慢性高频电刺激５０ Ｈｚ和１００Ｈｚ组的ＳＲ Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性则显著升高（Ｐ＜０．０１）,Ｃａ２＋释放－摄取动力学亦明显升高（Ｐ＜０．０１）。实验提示,ＣＥＳ后不同频率ＣＥＳ导致膈肌ＳＲＣａ２＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ２＋摄取－释放动力学产生不同的适应性变化;对不同功能状态的膈肌应用不同频谱的慢性电刺激可能具有重要的临床意义。     

跨膜Ca~(2+)梯差对大豆下胚轴质膜H~+-ATPase活力的影响

采用两相法得到高纯度封闭的大豆下胚轴质膜微囊,研究了跨膜Ｃａ２＋梯差对质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ质子转运和ＡＴＰ水解活力的影响。结果表明,在１０００：０．１,１０００：０．５,１０００：１及１０００：１０（μｍｏｌ／Ｌ：μｍｏｌ／Ｌ）几种梯差下,随着跨膜钙梯差的减小,质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ质子转运活力逐步降低。然而,上述几种梯差对Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ水解活力的影响却很小。进一步研究发现,１０００：０．１及１０００：１（μｍｏｌ／Ｌ：μｍｏｌ／Ｌ）两种梯差对Ｋｍ值没有影响,但Ｋ＋对Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ的激活作用在两种梯差下存在显著差别。ＭＣ５４０荧光、ＤＰＨ荧光偏振结果表明,跨膜钙梯差影响着膜脂的聚集状态和流动性。本文对跨膜Ｃａ２＋梯差对于大豆下胚轴质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ水解与质子转运活力影响的可能机制进行了讨论。     

氧化脂质及对大鼠心肌肌质网Ca~（2＋）－ATPase磷酸化微区运动状态的影响

用ＴＢＡ法测定了三尖杉酯碱的膜脂氧化效应;用纳秒荧光偏振技术研究了氧化膜脂对ＤＰＨ标记大鼠心肌肌质网膜脂、ＡＮＭ标记心肌肌质网Ｃａ２＋－ＡＴＰａ功能及磷酸化微区运动状态的影响。随膜脂中氧化磷脂的增加,肌质网膜脂双层的微粘度增加,磷脂分子摆动角减小：ＤＰＨ的荧光强度减弱,荧光寿命缩短。Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ的ＡＴＰ水解活性降低。ＡＮＭ标记Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ磷酸化微区的ｒ（ｔ）曲线半衰期减至６８±４ｎｓｅｃ。结果提示,膜脂中氧化磷脂的含量影响膜脂双层的流动性及Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ的ＡＴＰ水解活性和磷酸化微区的微细结构。     

氧化脂质及对大鼠心肌肌质网Ca^2＋—ATPase磷酸化微…

用ＴＡＢ法测定了三尖杉酯碱的膜脂氧化效应;用纳秒荧光偏振技术研究了氧化膜脂对ＤＰＨ标记大鼠心肌肌质网膜脂、ＡＮＭ标记心肌肌质网Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａ功能及磷酸化微区运动状态的影响。随膜脂中氧化磷脂的增加,肌质网膜脂双层的微粘度增加,磷脂分子摆动角减小;ＤＰＨ的荧光强度减弱,荧光寿命缩短。Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ的ＡＴＰ水解活性降低。ＡＮＭ标记Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ磷酸化微区的ｒ（ｔ）曲线半衰期减至     

大豆异黄酮对游泳小鼠能量代谢的影响

目的：探讨大豆异黄酮（SI）对游泳小鼠能量代谢的影响。方法：建立小鼠运动疲劳模型,选用雄性昆明小鼠30只,根据体质量随机分为3组（n=10）：正常组、游泳模型组、游泳+SI干预组（SI组）。正常组及模型组小鼠以AIN-93M合成饲料饲养,SI组在AIN-93M合成饲料中添加相应剂量的SI （4 g/kg）。饲养2周后,模型组和SI组小鼠负重2%游泳1 h后处死,测定其血乳酸（Lac）含量及乳酸脱氢酶（LDH）、琥珀酸脱氢酶（SDH）、肌酸激酶（CK）、ATP酶的活性。结果：与正常组相比,模型组和SI组血清中Lac含量明显增加（P<0.05）,模型组肌肉和SI组血中LDH活性显著升高（P<0.05）,模型组血清、肝脏和肌肉中SDH和CK活性明显升高,SI组血清和肌肉中SDH和CK活性显著升高（P<0.05）;与模型组相比,SI组小鼠游泳后,血清Lac含量明显下降（P<0.05）,LDH、SDH、CK酶活性较模型组都有明显升高（P<0.05）。结论：大豆异黄酮对游泳小鼠能量代谢具有一定的调节作用。     

实验性肝硬化酶组织化学变化的研究

实验选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠１５只,随机分为正常组５只,实验组（４０％ＣＣｌ４植物油皮下注射组）１０只,同时喂养９周。断头法快速处死动物,立即取肝,冰冻切片,用酶组织化学和图像分析法观察肝内主要代谢酶活性变化。结果显示：实验组肝内ＳＤＨ、ＣＣＯ活性降低,ＬＤＨ、ＮＯＳ活性升高,ＭＡＯ活性无明显变化     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠膈肌收缩能力的影响

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对2型糖尿病大鼠膈肌收缩能力和能量代谢酶活性的影响。方法:40只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组10只,造模组30只。应用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素诱发2型糖尿病大鼠模型。随机选取造模成功大鼠20只平均分成2组:糖尿病组、GbE治疗组。GbE治疗组按8mg/(kg.d)剂量腹腔注射GbE,持续8周。测定各组大鼠膈肌单收缩张力(Pt)、最大强直张力(P0)、疲劳指数(FI)的水平;检测膈肌组织中的细胞色素氧化酶(CCO)、乳酸脱氢酶(LDH)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,并观察其超微结构的变化。结果:与对照组比较,糖尿病组大鼠膈肌Pt、P0、FI水平降低(P0.01);CCO、LDH、SDH活性下降(P0.01);电镜下主要表现为膈肌线粒体扩张,嵴变短,空泡化。GbE治疗组上述变化明显减轻。结论:GbE增强2型糖尿病大鼠膈肌有氧氧化和糖酵解能力,改善线粒体呼吸链功能,能提高2型糖尿病大鼠膈肌的收缩能力。     

11,12.环氧二十碳三烯酸预处理与后处理对缺血/再灌注大鼠心肌的保护作用

采用Langendorff离体灌流装置,通过停灌40 min/复灌30 min复制大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,IR)损伤模型,观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acid,11,12-EET)预处理和后处理对心肌线粒体功能以及心功能的影响,探讨11,12-EET顸处理和后处理对IR大鼠心肌的作用及其机制.将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、IR组、EET预处理组(Pre-EET)、EET后处理组(Post-EET),每组6只.除对照组外,其它各组全心缺血40 min,再灌注30 min.监测左心室内压差(ALVP)和左心室内压升降的最大变化率(±dp/dtmax)等心功能指标,测定灌流液中乳酸脱氢酶(1actate dehydrogenase,LDH)的活性.灌流结束后,测定心肌线粒体琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)、Ca"ATPase、Na - K -ATPase活性以及心肌超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量.结果显示:(1)与IR组相比,Pre-EET组及Post.EET组Na -K -ATPase和SDH活性均增强,Ca2 -ATPase活性均减弱,有显著性差异(P<0.05);而Pre-EET与Post-EET组间没有显著性差异.(2)与IR组相比,Pre-EET组及Post-EET组心功能明显改善,LDH漏出显著减少,心肌SOD活性明显增强,MDA含量明显降低,有显著性差异(P<0.05);而Pre-EET与Post-EET组间没有显著性差异.结果表明,11,12-EET预处理及后处理均可通过上调心肌线粒体Na -K -ATPase、SDH活性以及下调Ca2 -ATPase活性改善线粒体功能和心肌能量代谢,拮抗心肌IR损伤;11,12-EET预处理及后处理还可通过提高心肌SOD活性、降低MDA含量改善IR心肌的氧化应激.     

日本血吸虫性病兔肝纤维化的酶组织化学研究

目的观察日本血吸虫感染家兔导致肝脏发生纤维化后的肝组织酶学改变.方法将23只成年健康大耳白兔分为正常对照组(N)8只,模型组(M)15只,M组采用腹贴法(日本血吸虫尾蚴180条/只,持续15min)感染血吸虫,六周后服用吡喹酮行杀虫治疗.于实验的第13周将全部动物麻醉后剖腹取肝组织.肝组织行HE染色和电镜观察;酶组织化学方法检测单胺氧化酶(MAO)、一氧化氮合酶(NOS)、琥珀酰脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)在器官的表达活性.结果在血吸虫感染家兔的第13周可观察到肝组织明显纤维化;模型组中MAO、NOS、LDH活性明显高于正常对照组,而SDH活性则明显降低.结论慢性血吸虫感染引起的肝纤维化导致肝细胞缺血缺氧,影响NOS、SDH、LDH活性,加重肝细胞损伤.     

己酮可可碱对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏超微结构和酶组织化学的影响

目的研究己酮可可碱(PTX)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝脏超微结构和酶组织化学的影响。方法高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型。取SD大鼠40只,分为对照组、12w模型组、16w模型组和治疗组,每组10只。腹主动脉采血,测ALT、AST、血糖等水平。取肝组织做电镜和SDH、CCO、ATPase、LDH的酶组织化学染色。结果两个模型组均比对照组ALT、AST、血糖升高,LDL降低(P<0.05)。治疗组血糖、AST比16w模型组降低(P<0.05)。电镜显示16w模型组线粒体肿大,嵴排列紊乱,基质密度降低。治疗组结构改善。酶组织化学显示四种酶的活性16w模型组均较对照组降低(P<0.05),治疗组活性均较16w模型组升高(P<0.05)。结论NASH时存在肝细胞能量代谢障碍,经PTX治疗后能量代谢障碍得到改善。     

Transmural non-homogeneity of calcium-induced heart injury

The Ca paradox resulted in marked inhibition, up to disappearance, of histochemically studied enzyme activities (SDH, LDH, beta-HBDH, phosphorylase and ATPase) in the subepicardial layer of the myocardium. In the subendocardial region there was only a small decrease. These transmural differences correlated well with ultrastructural changes. It is assumed that the heterogeneity in transmural distribution of injury is the result of transmural differences in coronary flow.     

一氧化氮合酶(NOS)等活性变化对肺癌早期诊断的研究——纤支镜活检组织50例的观察

用酶组织化学方法探讨经支气管纤维镜（简称纤支镜）活检组织,对肺癌的早期诊断。包括一氧化氮合酶（ＮＯＳ）、细胞色素氧化酶（ＣＣＯ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）等。酶组织化学反应结果显示为肺癌组病人ＮＯＳ、ＬＤＨ、ＣＣＯ、ＡＣＰ的活性显著增高,分别为强阳性（）,少数呈最强阳性（）;而ＳＯＨ活性为弱阳性（＋）,较正常人组显著下降。可疑组病人ＳＤＨ活性增高呈强阳性（）或最强阳性（）,但ＮＯＳ、ＬＤＨ、ＡＣＰ的活性较肺癌组下降,分别为弱阳性（＋）或中等阳性（）。上述结果提示：ＮＯＳ等活性的变化,可作为提高肺癌早期诊断的重要指标之一。