诱导人脐血间充质干细胞分化为多巴胺能神经元样细胞的研究

目的：探讨人羊膜上皮细胞条件培养液(ACM)及SHH,FGF8诱导人脐血间充质干细胞（CB-MSCs）分化为多巴胺( dopamine,DA )能神经元样细胞的作用及机制。方法：利用沉降红细胞、密度梯度离心和贴壁筛选法纯化CB-MSCs,加入ACM及SHH,FGF8分为CON,ACM,SHH+FGF8,ACM+SHH+FGF8四组诱导48h后,免疫细胞化学染色鉴定分化细胞的DA神经元表型。应用高压液相色谱技术测定细胞培养上清中DA含量,并应用Realtime PCR方法观察DA能神经元发育过程中的相关基因En-1,Foxa2,Lmx1b,Gli-1,Pitx3,Nurr1以及Ngn2的表达。结果：加诱导剂诱导48h后,各诱导组的TH和DAT的表达量均比对照组高。早期的转录因子En1,Foxa2 在各组中均有表达;而Pitx3,Lmx1b表达在各诱导组中;Lmx1b在ACM+SHH+FGF8组中表达最高;Pitx3在各诱导组中均有表达且无明显差异。Nurr1,Ngn2在SHH+FGF8组中表达很强。结论：ACM及SHH,FGF8可诱导脐血间充质干细胞分化为DA能神经元样细胞,其作用机制与多巴胺能神经元发育过程中的各种基因En-1,Foxa2,Lmx1b,Gli-1,Pitx3,Nurr1以及Ngn2相关。     

白藜芦醇诱导皮肤癌细胞株A432细胞凋亡的机制研究

白藜芦醇（Resveratrol）是天然的含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物,广泛存在于葡萄和花生等天然植物中,具有抗炎、抗氧化、调节脂代谢及抗肿瘤等生物活性。本研究通过应用不同浓度的白藜芦醇处理正常皮肤细胞HaCaT和皮肤癌细胞A431,探讨白藜芦醇诱导皮肤癌细胞A431凋亡的可能分子机制。MTT结果表明：白藜芦醇处理后,A431细胞的数量明显减少,     

优化脐血间充质干细胞的新方法

目前在脐带血间充质干细胞分离纯化过程中,往往出现纯度不高,有大量混杂的细胞。人羊膜组织是胚胎发育的早期产物,由于人羊膜具有无毒、无菌、无刺激性、抗微生物、不表达人HLA—ABC和HLA—DR抗原、易于获得和处理等特性,近十几年来羊膜在组织工程和移植治疗的临床应用较为广泛。     

内毒素所致SIRS/MODS小鼠脾细胞损伤的形态学观察

目的 应用大肠杆菌内毒素脂多糖（LPS）腹腔注射制备小鼠全身炎症反应综合片/多器官功能失常综合征（SIRS/MODS）模型。方法 用免疫组化的方法检测了Bcl-2的表达。结果 随LPS作用时间的延长,脾损伤逐渐加重,HE染色中,生发中心和动脉周围淋巴鞘分别在LPS注射后9小时和18小时出现大量深浅不一的颗粒状细胞碎片。TUNEL阳性染色细胞随时间延长而增多,电镜下可见到凋亡的淋巴细胞,在18小时还见到细胞坏死现象,Bcl-2的表达随着LPS作用时间的延长而明显下降,与TUNEL染色的相关分析表明,Bcl-2的表达与细胞凋亡有显著的负相关。结论 在LPS所致的SIRS/MODS模型中,脾细胞损伤以凋亡为主,随LPS作用时间延长而加重,在晚期还会出现细胞坏死。Bcl-2参与了LPS引起的脾细胞凋亡效应。     

己酮可可碱对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏超微结构和酶组织化学的影响

目的研究己酮可可碱(PTX)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝脏超微结构和酶组织化学的影响。方法高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型。取SD大鼠40只,分为对照组、12w模型组、16w模型组和治疗组,每组10只。腹主动脉采血,测ALT、AST、血糖等水平。取肝组织做电镜和SDH、CCO、ATPase、LDH的酶组织化学染色。结果两个模型组均比对照组ALT、AST、血糖升高,LDL降低(P<0.05)。治疗组血糖、AST比16w模型组降低(P<0.05)。电镜显示16w模型组线粒体肿大,嵴排列紊乱,基质密度降低。治疗组结构改善。酶组织化学显示四种酶的活性16w模型组均较对照组降低(P<0.05),治疗组活性均较16w模型组升高(P<0.05)。结论NASH时存在肝细胞能量代谢障碍,经PTX治疗后能量代谢障碍得到改善。     

一种大鼠肺组织固定方法的新尝试

因为肺为含气器官,固定液难以渗透,现在采用的气管灌注固定法在一定程度上克服了传统的浸泡固定或经血管全身灌注固定所致的肺萎陷和肺结构不清的缺点。但仍存在肺淤血和肺泡腔红细胞污染的弊端。为此作者经过反复实验发现在气管固定前先结扎气管,在结扎上方迅速断头放...     

转运蛋白ABCG1/4 和ABCA1对脑胆固醇的调节作用

脑是富含胆固醇的器官,机体大约有25%的胆固醇集中在脑组织中.ATP结合盒超家族转运蛋白对脑组织中胆固醇的膜外转运和动态平衡起着重要的调节作用.研究发现,ATP结合盒超家族转运蛋白亚体ABCG1、ABCG4和ABCA1在成体脑组织中存在不同程度的表达,一种或多种亚体的缺失可以导致神经退行性病变.然而,ATP结合盒超家族转运蛋白亚体对脑发育过程中脑胆固醇动态变化的调节缺乏相关性的报道.在本研究中,从低胆固醇饮食喂养的C57BL/6J小鼠中获取出生后不同发育时期的脑组织,对ABCG1、ABCG4和ABCA1的mRNA与蛋白质表达水平进行测定,并对脑组织和血清中ATP结合盒超家族转运蛋白的表达水平与胆固醇水平的相关性进行研究.同时,使用ABCG1、ABCG4单一基因敲除鼠和ABCG1、ABCG4双基因敲除鼠,研究ATP结合盒超家族转运蛋白对与胆固醇合成的相关基因表达的影响以及对脑组织胆固醇代谢的调节作用.结果发现,ABCG1、ABCG4和ABCA1在机体多个器官中均有表达,但ABCG1和ABCG4在小鼠脑组织中表达量最高.在脑组织发育过程中,ABCG1和ABCG4mRNA水平呈现明显的表达时效性,小鼠于出生后42天达到峰值,而ABCA1 mRNA的表达水平无明显变化.血清和脑组织中中酯化型胆固醇水平呈双高峰分布,也于出生后42天达到最高.基因敲除鼠模型显示,单一敲除ABCG1或者ABCG4基因对脑组织胆固醇水平无明显影响,而ABCG1和ABCG4基因的同时缺失导致脑胆固醇水平显著升高,并明显降低胆固醇合成相关基因的表达水平.本研究表明,在脑发育成熟过程中,ATP结合盒超家族转运蛋白亚体ABCG1和ABCG4,而非ABCA1,以调节脑胆固醇的膜外转运;ABCG1和ABCG4互补调控脑胆固醇的动态平衡.     

超顺磁性氧化铁纳米粒子标记骨髓间充质干细胞实验研究

目的:研究不加转染剂,超顺磁性氧化铁纳米粒子(superparamagnetic iron oxide,SPIO)对骨髓间充质干细胞(bonemarrow-derived mesenchymal stem cells,MSCs)的标记效果.方法:全骨髓法培养猪骨髓间充质干细胞,用50 ug/ml铁浓度的SPIO标记MSCs,普鲁士蓝染色鉴定标记效果,流式细胞仪测定标记MSCs的增殖及凋亡,台盼蓝染色检测标记细胞的活力.结果:不加转染剂,SPIO标记MSCs达100%,50 ug/ml铁浓度标记对MSCs活力、增殖及凋亡无影响.结论:不加转染剂,50 ug/ml铁浓度SPIO可安全、有效的标记MSCs.     

加味四君子汤对脾虚胃溃疡大鼠细胞外信号调节激酶信号传递分子的影响

目的探讨加味四君子汤治疗脾虚证的机理。方法运用HE染色显示胃组织结构,运用免疫组织化学方法显示下颌下腺EGF含量的变化,运用免疫印迹法显示胃黏膜ERK2含量的变化。结果经过加味四君子汤治疗后,脾虚胃溃疡大鼠下颌下腺颗粒曲管细胞内EGF阳性反映产物的含量减少,胃黏膜磷酸化的ERK2增加,胃溃疡愈合加快;而自然恢复组上述变化不明显。结论加味四君子汤可能通过影响分裂原激活的蛋白激酶信号传递途径而发挥治疗作用。     

大鼠脾气虚结合胃溃疡模型中结肠 5-羟色胺及其受体的变化

目的探讨脾气虚胃溃疡证病结合模型结肠中5-羟色胺及其受体的变化,及加味四君子汤治疗脾虚证的机理。方法免疫组织化学染色和图像分析技术。结果脾气虚合并胃溃疡模型中结肠5-羟色胺及其受体阳性反应产物的含量均增加,经过加味四君子汤治疗后,上述指标的变化降低,接近对照组。结论大鼠脾气虚胃溃疡模型中结肠组织及其受体含量的增高可导致消化系统功能紊乱,可能是脾气虚胃溃疡的一种重要病因或病机之一,加味四君子汤能通过纠正这些变化而发挥治疗作用。