核糖核酸酶A超家族：不仅仅是一组降解RNA的酶

核糖核酸酶A超家族(ribonuclease A superfamily; RNase A superfamily),也称脊椎动物分泌型核糖核酸酶超家族(vertebrate secreted ribonucleases superfamily),是二十世纪蛋白质结构、酶学和分子进化领域研究最多最广泛的核糖核酸酶家族。自上世纪初期从牛胰腺中分离鉴定第一个成员以来，已从哺乳动物、两栖动物、爬行动物、鸟和鱼等几百种动物中鉴定了几千个成员。早期对该家族成员的研究不仅促进了蛋白质化学技术的发展，而且为现代生物学研究奠定了基础。目前已知人的核糖核酸酶A超家族成员包括8个典型成员(RNase 1～RNase 8)和5个非典型成员(RNase 9～RNase 13)。功能方面，曾一度以为该家族成员只具有降解核糖核酸的能力。随着血管生成素(angiogenin; RNase 5)、嗜酸性粒细胞衍生神经毒素(eosinophils-derived neurotoxin, EDN; RNase 2)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophils cationic protein, ECP; RNase ...     

RNase A超家族多样性的产生及宿主防御

胰核糖核酸酶家族也被称为RNase A家族,包含了与牛胰核糖核酸酶同源的所有脊椎核糖核酸酶.从20世纪初.RNase A超家族就成为生物化学、结构生物学、酶学、进化学等领域的研究热点.最新的进化研究显示,脊椎动物RNase A家族起源于宿主防御功能,本文就RNaseA超家族多样性的产生及其宿主防御功能进行综述.     

细胞毒性RNase及其抗肿瘤活性

核糖核酸酶(ribonuclease,RNase)是一类核酸水解酶,它们广泛存在于动植物中,除了具有水解RNA的活性外,有的还有一定的细胞毒性。根据结构的相似性,这些RNase属于RNase A超家族(RNase A superfamily)。RNaseA超家族包含了以牛胰核糖核酸酶为原型的不同来源的脊椎动物核糖核酸酶。细胞毒性RNase显示出抑制肿瘤细胞生长的活性,因而有望应用于肿瘤治疗中。本文对RNase A超家族中的几个成员棗核糖核酸酶A(ribonuclease A,RNaseA)、豹蛙抗癌酶(onconase,ONC)、牛蛙核糖核酸酶(Rana catesbeiana ribonuclease,RC-RNase)、牛精液核糖核酸酶(bovine seminal ribonuclease,BS-RNase)和amphinase(Amph)的结构及抗肿瘤活性进行了综述。     

非淀粉多糖酶对罗非鱼肝胰脏淀粉酶活性和基因表达的影响

关于非淀粉多糖(Non-Starch Polysaccharides,NSP)酶对肝脏淀粉酶的影响在畜禽上研究较多.许梓荣研究大麦日粮中添加NSP酶对仔猪胰脏和小肠消化酶活性的影响时指出,添加NSP酶不影响仔猪胰脏中胰淀粉酶活性[1].     

论核糖核酸酶P

<正> 核糖核酸酶P(RNase P)是一类使转移核糖核酸(tRNA)5′端成熟的加工酶,在tRNA生物合成中起着非常重要的作用。RNase P活性于1972年在大肠杆菌中首次发现,到1977年证明该酶是一个由核糖核酸(RNA)和蛋白质两者构成的核糖核蛋白(RNA蛋白,ribonucleoprotein),RNA部分为酶活性所必需。1979年将无活性的RNA组分和蛋白质组分重组得到有活性的酶。1983年分离出RNase P中RNA组分的前体分子,同时阐明,无论     

固相RNasin亲和层析RNase

大鼠肝RNasin与溴化氰活化的Sepharose 4B反应制备了固相大鼠肝RNasin。用固相大鼠肝RNasin亲和层析大鼠肝中性RNase,可以将其分为两部分。固相大鼠肝RNasin可以亲和层析牛胰RNase的结果说明,牛胰和大鼠肝RNase在二级和三级结构上都非常相似。这为大鼠肝RNase来源于胰脏的观点提供了一个新证据。固相RNasin可以亲和吸附大肠杆菌RNase说明原核细胞RNase与真核细胞RNase在分子起源方面有一定的亲缘关系。固相RNasin柱层析为纯化RNase提供了一个简便的新方法。     

人类核糖核酸酶A家族

核糖核酸酶A（RNase A）是脊椎动物所特有的蛋白质家族。除了水解RNA以外,它们还参与细胞成熟、细胞凋亡、血管生成以及宿主防御等过程,在疾病的诊断和治疗方面表现出重要的应用价值。随着人类基因组计划的完成,人们已经发现了13个RNase A基因。本文综述了人类RNase A的酶活性和结构特点,特别论述了其特殊的生物学活性,以及酶活性与特殊生物学活性之间的关系,为进一步的研究和应用提供信息。     

哈密瓜子叶分化和脱分化过程中RNaSe、DNase和IAAase活性的研究

RNase和DNase是参与核酸代谢的重要酶类之一,它们在植物体内既能降解RNA和DNA,又可以参与合成作用(Lehman,1976)。而IAAaes和过氧化物酶的活性对调节植物体内激素水平起主导作用,这在Galston工作中已有报道。在前人工作的基础上,本文在哈密瓜子叶诱导形成二种类型的愈伤组织过程中,对核酸代谢的两个重要酶类RNase和DNase以及在氧化还原过程中两个重要酶类IAAase和过氧化物酶进行了研究。     

核糖核酸結构的研究 Ⅲ.利用核糖核酸酶T_1研究絲腺与酵母可溶性核糖核酸的結构

(1) 从高峰淀粉酶制剂(Taka-Diastase)制得RNase T_1,提纯了2800倍,可用于结构研究,从上海四万酿造厂的米麯也分得类似纯度、类似特异性的酶。(2) 用RNase T_1单独或与RNaseⅠ联合作用的结果,均发现啤酒酵母与蓖麻蚕絲腺腺体sRNA的结构有显著差异。例如用RNase T_1单独作用时,由蓖麻蚕蒜腺sRNA所得Gp大于啤酒酵母sRNA,而UpUpGp则小于后者。用两个酶联合作用时,由蓖麻蚕絲腺sRNA所得Cp、(Gp+Gp!)大于啤酒酵母sRNA,且前者较后者多出许多含稀有成份的紫外光吸收点,其电泳层析行为及表现熒光性质较为特殊。(3) 蓖麻蚕蒜腺sRNA合有-Gp(Ap)_4Cp-及-Gp(Ap)_3Cp-等结构。(4) RNase Ⅰ与RNase T_1联合水解sRNA所得Gp!/Gp值大于RNase T_1单独作用时所得Gp!/Gp值。     

核糖核酸酶A家族典型成员在肿瘤发生中的作用

人体中核糖核酸酶A(ribonuclease A,RNaseA)家族包含8个典型成员(RNase 1至RNase 8)。已有研究显示，除RNase 8外，该家族其它典型成员影响了胰腺癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌和皮肤癌等多种肿瘤的发生发展。在肿瘤发生过程中，特定RNase表达量及糖基化修饰会发生显著改变，是肿瘤诊断的潜在标志物；它们能以多种机制参与肿瘤发生、生长和转移等过程，有望成为肿瘤治疗的靶点；而部分成员则具有杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤发展的功能，存在临床开发成肿瘤治疗药物的可能。具体而言，RNase 1通过核糖核酸酶活性依赖的细胞毒性和细胞外RNA降解功能，发挥直接杀伤肿瘤细胞或降低局部炎症而抑制肿瘤生长的作用；RNase 1还能结合并激活促红细胞生成素，产生肝细胞癌受体相互作用蛋白A4 (erythropoietin-producing hepatocellular carcinoma receptor-interacting protein A4, EphA4)信号通路，促进乳腺癌的发生。RNase 2和RNase 3是嗜酸性粒细胞颗粒蛋白质的重要成分，依赖于阳离子性及核糖核酸酶...     

作用于cip-cel mRNA的核糖核酸内切酶的鉴定

【目的】本研究以革兰氏阳性细菌解纤维素梭菌(Ruminiclostridium cellulolyticum)为研究对象,筛选作用于纤维小体编码基因簇cip-cel mRNA的核糖核酸内切酶。【方法】通过对预测的4个假定编码核糖核酸内切酶基因进行基因敲除、体内过表达、体外过表达和活性分析等方法,分析它们对cip-cel mRNA剪切位点的剪切能力。【结果】敲除rnc和rnj基因,对cip-cel mRNA剪切没有任何影响;体内过表达RNase时能够加速cip-cel mRNA的降解,而过表达RNase G时,则结果与野生型对照菌株无异;RNase G基因rng和RNase Y基因rny的体外活性鉴定分析,发现RNase G对体外转录的包含cip-cel mRNA剪切位点的RNA没有作用,而RNase Y能够对其进行剪切和降解。【结论】RNase Y是能够作用于cip-cel mRNA的核酸内切酶。该研究结果对理解革兰氏阳性细菌核糖核酸内切酶的作用机制,及其在转录后水平的调控基因差异表达等方面具有重大意义。     

中国林蛙Onconase样核糖核酸酶的基因克隆和表达

Onconase是从美洲豹蛙卵中提取的一种核糖核酸酶,由于其抗肿瘤活性而具有潜在的临床应用价值.以中国林蛙基因组为模板,克隆了一个新的RNase基因,并由此推导出了成熟林蛙RNase的氨基酸顺序.该酶是由103个氨基酸残基组成的,它保留了RNaseA家族成员酶催化活性必须的组氨酸和赖氨酸残基,以及CKXXNTF的序列特征,与Onconase具有73％的氨基酸顺序的相似性.林蛙酶比Onconue少一个氨基酸,成为选今为止发现的RNaseA家族中的最小成员;并且,林蛙酶拥有的精氨酸和酪氨酸残基比Onconase多3个.此外,在利用原核表达系统对林蛙RNase基因进行表达的过程中,表达产物对宿主显示出一定的细胞毒性.     

滚环转录结合定点切割制备小RNA的技术探究

[目的]优化滚环转录及定点酶切中关键技术,提高小RNA合成量。[方法]通过在引物与模板之间设计不互补部分,形成泡状凸起,引发滚环转录;使用天然DNAzyme 10-23定点剪切转录产物;另外改变RNase H酶切中Aid-DNA修饰核酸数目及位置,指导RNase H切割;DNaseⅠ降解模板DNA后,不经高温失活,直接进入RNase H酶切体系。[结果]由凸起结构引发转录,转录效率提高约5倍;RNase H在仅有3个修饰核酸间隔分布的Aid-DNA-3b辅助下,可高效定点剪切,而DNAzyme 10-23无法充分切割滚环转录产物;未失活的DNaseⅠ对Aid-DNA-3b的降解仅占8.7%,可直接进入RNase H酶切体系。[结论]引入凸起结构可提高转录效率约5倍;DNaseⅠ可直接进入酶切体系,随后使用Aid-DNA-3b介导酶切,产量可提高1.4倍。     

水分胁迫对高粱等作物叶片中核糖核酸酶活力的影响

水分胁迫促使高粱,玉米,蚕豆叶片中核糖核酸酶(RNase)活力增加,其程度以下部老叶多于上部叶片。酶活力的增加不仅由于水分胁迫的直接影响,也与缺水促进叶子早衰有关。 亚胺环己酮(CHM)前处理对水分胁迫时高粱幼苗RNase活力的增加起强烈抑制作用;氯霉素(CP)前处理对脱水引起的RNase活力增加无明显抑制效果。 高粱叶细胞中的RNase活力约85％存在于细胞质的液相中,其余似以颗粒酶形式存在于各类细胞器内,不易因水分胁迫而被释出。因而水分胁迫下高粱RNase活力的增加主要决定于细胞质中的可溶性RNase。 根据酶的热稳定性和它对酸化-碱化处理的反应表明水分胁迫并未引起高梁RNase的性质发生变化。     

活化石植物－－苏铁树叶绿体DNA分子中的核糖核苷酸

随着分子生物学的深入发展,科学工作者对脱氧核糖核酸(DNA)的研究也更加深入。近年来发现一些植物叶绿体DNA(cpDNA)、动物线粒体DNA(mtDNA)分子中含有少数核糖核苷酸。其中对豌豆,菠菜和莴苣叶绿体DNA分子中的核糖核苷酸研究较多,而且比较详细。研究这个问题,使用的方法是碱(KOH)或核糖核酸酶(RNase)处理cpDNA。如果DNA分     

用RNase保护试验检测珠蛋白基因表达

mRNA的定量分析是基因表达调控研究中应用的重要方法.与斑点杂交、RNA印迹法相比,用RNase保护试验测定RNA具有灵敏度高、操作简便等优点.应用RNase保护试验成功地对转基因鼠中人βE-珠蛋白基因及鼠a-珠蛋白基因的表达水平进行了分析.     

胰酶中镉的去除研究

综合对酶活性的影响,研究胰酶中镉的去除条件.在pH为6.0,HCA-1加入量为0.8%,树脂加入量为40 mL(胰脏投料200 g),胰脏活化时用HCA-1络合去除胰酶中的镉,其最高去除率可达54.9%,此时胰蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶的活力几乎没有什么影响.该工艺可以很好地嵌入现有胰酶生产工艺中,几乎不增加生产步骤,具有非常好的工业应用前景.     

乙型肝炎病毒靶向核糖核酸酶及其突变体的原核表达和活性分析

目的：研究原核表达的乙型肝炎病毒（HBV）靶向核糖核酸酶（RNase）及其突变体（点突变失去RNase活性）的活性。方法：将构建的靶向核糖核酸酶及其突变体基因克隆入原核表达载体pET32a（＋）,转化大肠杆菌BL21（DE3）,以IPTG诱导融合蛋白（HBV核心蛋白与人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素的融合蛋白）的表达;表达产物经包涵体纯化、SDS-PAGE和Western印迹鉴定,将纯化的蛋白用透析方法复性;以酵母tRNA为作用底物,应用复性的蛋白进行RNase活性分析。结果：纯化和复性了HBV靶向核糖核酸酶及其突变体;复性的HBV靶向核糖核酸酶可以降解酵母tRNA且具有剂量依赖性,而复性后的突变的靶向核糖核酸酶体不具有RNase活性。结论：原核表达的HBV靶向核糖核酸酶具有较强的RNase活性,为探索HBV靶向核糖核酸酶抑制乙肝病毒复制的机理奠定了基础。     

Neurospora Crassa RNase N_1的分离与纯化

前言前文报道了红色链孢霉核糖核酸酶N_1(N.Crassa RNase N_1)高产菌株的选育及其核糖核酸酶(RNase)作用碱基专一性的鉴定。本文主要介绍核糖核酸酶N_1的分离与纯化。我们在高井等人方法的基础上,作了某些改进。该方法有效地用于大量制备,并达到了较高的纯度。     

Neurospora Crassa RNase N_1的分离与纯化

前言前文报道了红色链孢霉核糖核酸酶N_1(N.Crassa RNase N_1)高产菌株的选育及其核糖核酸酶(RNase)作用碱基专一性的鉴定。本文主要介绍核糖核酸酶N_1的分离与纯化。我们在高井等人方法的基础上,作了某些改进。该方法有效地用于大量制备,并达到了较高的纯度。