牙龈卟啉单胞菌感染通过Wnt通路调节牙周膜干细胞的成骨分化

目的观察牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)感染通过Wnt通路调节牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的作用。方法培养原代PDLSCs,分为常规处理的对照组、P.gingivalis感染的P.gingivalis组和P.gingivalis感染并用Wnt3a处理的P.gingivalis+Wnt3a组,成骨诱导后茜素红染色并检测A_(405)值,Western blot检测Wnt通路分子的蛋白表达量,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测ALP活力,PCR检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)的mRNA表达量。结果与对照组比较,P.gingivalis组Wnt3a、β-catenin、p-GSK-3β的蛋白表达水平(0.33±0.07)、(0.27±0.08)、(0.44±0.09)以及成骨诱导后A_(405)值(0.55±0.08)、ALP活力(20.14±6.54)U/mL和Runx2、OCN的mRNA表达量(0.45±0.09)、(0.51±0.07)均明显减少;与P.gingivalis组比较,P.gingivalis+Wnt3a组成骨诱导后A_(405)值(0.89±0.15)、ALP活力(29.44±5.26)U/mL及Runx2、OCN的mRNA表达量(0.89±0.17)、(0.81±0.18)均明显增加。结论 P.gingivalis感染能够抑制PDLSCs的成骨分化,抑制Wnt通路是可能的分子机制。     

机械敏感离子通道Trpm7在LIPUS促进牙髓间充质干细胞成骨分化中的作用机制的研究

该文主要研究低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)促进牙髓间充质干细胞(dental pulp mesenchymal stem cells,DPSCs)成骨分化,以及瞬时受体电位M7(transient receptor potential melastatin 7,Trpm7)在其中发挥的作用。培养人DPSCs,流式细胞术检测其表面分子标志表达,阿利新蓝、茜素红及油红O染色检测其成软骨、成骨和成脂分化能力。ALP活性、ALP染色和茜素红染色观察LIPUS促成骨分化的能力。实时定量PCR检测LIPUS处理组与对照组成骨分化相关基因OPN、OCN、RUNX2表达的差异以及不同时间点两组Trpm7 m RNA表达水平的变化。ALP活性检测LIPUS及不同浓度Trpm7抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)对成骨分化能力的影响。实验分为对照组、LIPUS组、LIPUS+二甲基亚砜(DMSO)组和LIPUS+2-APB组,ALP和茜素红染色观察各组成骨分化能力,Western blot检测各组OPN、OCN和RUNX2的蛋白表达。结果显示,成功培养DPSCs,LIPUS处理后ALP和茜素红阳性染色明显增多,ALP活性增强(P0.01);OPN、OCN、RUNX2的m RNA表达水平显著增加(P0.05),LIPUS处理第2天和第5天Trpm7的m RNA表达水平有明显升高(P0.05)。2-APB作用后明显下调ALP活性(P0.01)。LIPUS组、LIPUS+DMSO组与对照组相比,ALP和茜素红阳性染色以及OPN、OCN与RUNX2的蛋白表达均显著增加,而LIPUS+2-APB组较于LIPUS+DMSO组,ALP和茜素红染色以及OPN、OCN与RUNX2的蛋白表达明显降低。该研究结果提示,LIPUS能够促进DPSCs的成骨分化,且Trpm7在这一过程中发挥着重要作用。     

补骨脂素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨及成脂分化的影响

目的:探讨补骨脂素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨及成脂分化的影响及其可能机制。方法:选取3月龄无特定病原体级健康雌性SD大鼠25只,通过切除卵巢建立绝经大鼠模型。6周后,通过全骨髓贴壁法分离BMSCs并进行原代和传代培养,传至3代后进行成骨和成脂诱导,并按补骨脂素浓度梯度0、5、10、15、20μmol/L进行处理。细胞增殖2周后,通过碱性磷酸酶(ALP)染色实验和油红O染色观察BMSCs成骨和成脂的分化,应用蛋白免疫印迹法测定核心结合蛋白因子RUNX2、骨钙素(OCN)、增强子结合蛋白β(C/EBP-β)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的表达。结果:成骨诱导BMSCs在补骨脂素的作用下ALP染色呈阳性反应,且补骨脂素的浓度为15μmol/L时阳性反应最强。RUNX2、OCN蛋白的表达随着补骨脂素浓度的升高而升高,差异具有统计学意义(P0.05)。与空白组比较,成脂诱导BMSCs在补骨脂素的作用下油红O染色阳性反应程度出现下降,补骨脂素浓度为20μmol/L时,油红O染色阳性率最低。C/EBP-β、PPAR-γ蛋白的表达均随着补骨脂素浓度的升高而降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:补骨脂素体外可增强BMSCs成骨分化作及抑制BMSCs成脂分化,可能与其调节RUNX2、OCN、C/EBP-β和PPAR-γ蛋白的表达有关。     

BMP9诱导人脐带间充质干细胞体内外成骨分化的作用研究

目的:探讨人骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)在体内外诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)成骨分化的作用研究。方法:设立Ad-BMP9处理组和Ad-GFP对照组感染hUC-MSCs,两组细胞分别于3天、5天、7天进行ALP活性检测,14天后采用免疫组织化学染色检测骨钙素(Osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(Osteopotin,OPN)的表达情况,21天后茜素红染色检测矿化结节的形成;然后收集不同分组hUC-MSC用于裸鼠皮下注射成骨模型的建立,4周后取出离体骨进行Micro-CT扫描和分析,并进行H&E、Masson Trichrome、Alcain Blue染色。结果:BMP9处理组的ALP活性和矿化结节形成明显高于对照组,免疫组化染色结果显示BMP9诱导组的OCN、OPG的阳性表达明显高于对照组;裸鼠皮下注射成骨模型的观察结果显示,空白对照组没有形成肉眼可见的皮下包块,仅感染Ad-BMP9的hUC-MSCs能生成异位骨,且形成的异位骨骨量明显,骨密度平均值为396.05±0.60;H&E染色结果显示BMP9诱导生成的异位骨中形成部分成熟的骨基质和骨小梁,Masson Trichrome染色结果显示BMP9明显诱导hUC-MSCs的基质矿化作用,Alcain Blue染色结果显示BMP9明显诱导hUC-MSCs的软骨内成骨作用。结论:BMP9成功诱导人脐带间充质干细胞的体内外成骨作用,为临床骨组织工程的细胞疗法提供了明确的可行性。     

低强度脉冲超声波辐照与泡沫TiC/Ti对犬节段性骨缺修复的促进作用

目的探讨低强度脉冲超声波辐照对节段性骨缺损修复效果的影响。方法将直径12 mm长20mm泡沫TiC/Ti植入6只Beagle犬的左侧胫骨节段性骨缺损区。随机分为超声组和对照组,超声组采用低强度脉冲超声波辐照（频率1.5 MHz、强度30 mW/cm2、脉冲宽度200μs、脉冲周期1 kHz、20 min/次、1次/d）,对照组为不开功率源的假辐照,术后4、8周后分别行X线检查及骨密度测定,观察及分析材料周围骨愈合情况。结果 6只beagle犬均进入结果分析。术后4周超声组骨早期成熟度优于对照组,表现在材料周围骨痂影密度增高,骨痂影由两端向中央生长;对照组仅见骨痂区密度低,还可见部分骨痂缺如。术后8周超声组新生骨痂面积优于对照组,骨干结构相对稳定;对照组骨缺损区未闭合,在骨干两侧看到少量骨痂,愈合较差。骨密度测定结果显示,4周时超声组高于对照组,两组间存在统计学差异;8周时超声组略高于对照组,但两组间没有统计学差异。结论通过联合应用低强度脉冲超声波辐照与人工骨材料修复可提高新骨形成速度及骨组织密度,缩短节段性骨缺损的骨愈合时间。     

阿仑膦酸钠联合化疗对多发性骨髓瘤患者骨代谢的影响

目的:研究阿仑膦酸钠联合化疗对多发性骨髓瘤患者骨代谢的影响。方法:选取2011年4月到2014年4月我院收治的多发性骨髓瘤患者130例,按照随机数字表法将患者分为研究组和对照组,每组65例,对照组给予化疗,研究组在对照组的基础上给予阿仑膦酸钠,比较两组骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、骨钙素(OC)、I型前胶原氨基肽(PINP)、血钙(Ca)、血磷(P)、β胶原特殊序列(β-CTx)以及碱性磷酸酶(ALP)。结果:治疗后研究组OC、PINP和BAP均显著高于治疗前和对照组,比较差异均有统计学意义(P0.05);治疗后研究组β-CTx显著低于治疗前和对照组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:阿仑膦酸钠联合化疗治疗多发性骨髓瘤患者能显著改善其的骨代谢,值得临床推广。     

PTHrP1-34对荷瘤小鼠骨代谢与肿瘤生长情况的影响

目的研究甲状旁腺激素相关蛋白1-34（PTHrP1-34）对荷瘤小鼠骨代谢的影响,同时观察肿瘤生长情况。方法对照组、模型组、实验组4周龄健康雌性BALB/c小鼠各12只,模型组和实验组采用乳腺癌组织块悬浊液注射法制备小鼠乳腺癌模型,10d后模型组每日予以生理盐水腹腔注射,实验组每日予以PTHrP1-34400μg/（kg.bw）腹腔注射。用药35 d后测全身骨密度（BMD）、股骨灰干重比、骨代谢相关血清指标[钙（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）、Ⅰ型胶原C-末端交联顶端肽β（β-CTX）、骨唾液酸蛋白（BSP）],剥离肿瘤比较体积与质量。结果各组Ca水平差异无显著性（P〉0.05）。与对照组和模型组比较,实验组P、β-CTX、BSP等反映骨吸收的指标显著升高（P〈0.01或P〈0.05）,总ALP、BGP等反映骨形成的指标显著降低（P〈0.01或P〈0.05）;实验组BMD、股骨灰干重比均显著降低（P〈0.01）。与对照组相比,模型组各指标变化差异无显著性。实验组肿瘤体积和质量显著升高（P〈0.01）。结论在PTHrP1-34的作用下,荷瘤小鼠骨吸收大于骨形成,造成溶骨性骨破坏,骨密度降低,骨破坏释放的细胞因子可能促进肿瘤生长。     

过表达miR-155抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

目的:研究过表达miR-155对BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响。方法:(1)用重组腺病毒Ad-BMP9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,定量PCR(qPCR)检测miR-155的表达,RT-PCR检测Runx2和ALP的表达。(2)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,qPCR检测miR-155的表达,ALP活性和染色检测早期成骨能力。(3)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,诱导分化14d茜素红S染色检测晚期成骨能力。(4)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,qPCR检测成骨分化相关基因Runx2、OSX、COL1A1、ALP、OCN和OPN的表达。(5)miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,Western blot检测p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达。(6)qPCR和Western blot分别检测HIF1α和VEGF的mRNA表达水平和蛋白质表达水平。(7)应用荧光素酶报告基因对miR-155的靶基因进行筛选和验证。结果:在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化过程中,过表达miR-155降低ALP活性及染色;减少钙盐沉积;成骨分化相关基因Runx2、OSX、COL1A1、ALP、OCN和OPN表达降低;抑制p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达;HIF1α和VEGF的mRNA和蛋白表达水平减少。在对靶基因的检测中,过表达miR-155可以抑制HIF1α蛋白水平的表达,但对其mRNA水平无明显影响。结论:miR-155过表达减弱BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化,可能是通过抑制Smad/BMP信号通路发挥作用,也有可能是通过抑制靶基因HIF1α的表达来发挥作用。     

AGEs和TNF-α对人牙周膜干细胞骨向分化能力的协同抑制作用

本实验旨在研究糖基化终末产物(AGE-BSA)和TNF-α对人牙周膜干细胞增殖及骨向分化能力的影响。本实验通过体外组织块酶消化法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,使用流式细胞仪检测细胞表型分子stro-1、CD146、CD44、CD90的表达而对其进行干细胞鉴定后,取第3代人牙周膜干细胞在100μg/mL AGE-BSA及10 ng/mL TNF-α刺激下进行增殖能力检测;同时矿化诱导,设A组(AGE-BSA刺激组),T组(TNF-α刺激组),AT组(AGE-BSA/TNF-α共同刺激组),不含AGE-BSA/TNF-α的常规矿化诱导组作为对照;于诱导的21d茜素红染色观察钙结节形成情况,诱导7 d,碱性磷酸酶染色观察ALP活性、实时定量聚合酶链反应(real time PCR)和Western blotting检测成骨相关基因及蛋白表达情况。流式细胞仪显示细胞阳性表达STRO-1、CD146、CD44、CD90;成骨诱导21 d后茜素红染色和定量分析显示,AT组骨结节形成量最低,A组及T组相对于对照组骨结节形成量存在下降;差异均有统计学意义(p0.05)。成骨诱导7 d后ALP染色,ALP活性变化趋势与茜素红定量分析相同。成骨诱导7 d后RT-PCR检测成骨相关基因BSP、OCN、ALP mRNA表达,AT组表达水平最低,A组及T组有下降趋势,差异均有统计学意义(p0.05)。Western blotting检测显示,各组总蛋白BSP蛋白表达趋势与RT-PCR趋势相同。AGEs与TNF-α均具有对HPDLSC的骨向分化能力的抑制作用,两者共同刺激对HPDLSC骨向分化能力存在协同抑制作用。     

内外联合固定术治疗骨盆骨折的临床疗效及对血清ALP, TNF-α,TGF-β水平的影响

目的:研究内外联合固定术治疗骨盆骨折的临床观疗效及对血清碱性磷酸酶(ALP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)水平的影响。方法:选取2014年8月至2015年7月本院收治的86例骨盆骨折患者,根据入院顺序分为观察组和对照组,43例每组。对照组使用常规内固定术,观察为内外联合固定术。分析两组患者临床疗效、手术情况、并发症的发生情况,比较两组患者治疗前后血清ALP、TNF-α、TGF-β水平的变化。结果:治疗后,观察组的优良率显著高于对照组[81.40%(35/43)比41.86%(18/43)](P0.05),手术时间、术中出血量、骨折愈合时间显著短于或少于对照组(P0.05)。治疗前,两组患者血清ALP、TNF-α、TGF-β水平比较无显著性差异(P0.05);治疗后,两组患者血清ALP水平显著高于治疗前(P0.05),TNF-α、TGF-β水平较治疗前显著降低(P0.05),其中观察组的ALP水平明显比对照组高(P0.05),TNF-α、TGF-β水平明显比对照组低(P0.05)。观察组的并发症发生率明显低于对照组[0.00%(0/43)比11.63%(5/43)](P0.05)。结论:内外联合固定术治疗骨盆骨折患者的临床疗效和安全性均较高,可有效升高患者血清ALP水平,降低TNF-α、TGF-β水平。     

Effect of Boron on Osteogenic Differentiation of Human Bone Marrow Stromal Cells

Bone marrow stromal cells (BMSCs) have been well established as an ideal source of cell-based therapy for bone tissue engineering applications. Boron (B) is a notable trace element in humans; so far, the effects of boron on the osteogenic differentiation of BMSCs have not been reported. The aim of this study was to evaluate the effects of boron (0, 1, 10,100, and 1,000?ng/ml) on osteogenic differentiation of human BMSCs. In this study, BMSCs proliferation was analyzed by cell counting kit-8 (CCK8) assay, and cell osteogenic differentiation was evaluated by alkaline phosphatase (ALP) activity assay, Von Kossa staining, and real-time PCR. The results indicated that the proliferation of BMSCs was no different from the control group when added with B at the concentration of 1, 10, and 100?ng/ml respectively (P?>?0.05); in contrast, 1,000?ng/ml B inhibited the proliferation of BMSCs at days?4, 7, and 14 (P?相似文献   

Bone marrow mesenchymal stem cell–derived exosomal miR-206 promotes osteoblast proliferation and differentiation in osteoarthritis by reducing Elf3

MicroRNAs (miRNAs) serve as gene silencers involved in essential cell functions. The role of miR-206 and E74-like factor 3 (Elf3) has been identified in osteoarthritis (OA), while the effect of exosomal miR-206 from bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) in OA remains largely unknown. Thus, we aim to explore the role of exosomal miR-206 from BMSCs in OA with the involvement of Elf3. BMSCs and BMSC-derived exosomes (BMSC-exos) were obtained and identified. OA mouse models were constructed by anterior cruciate ligament transection and then treated with BMSC-exos or BMSC-exos containing miR-206 mimic/inhibitor. The expression of miR-206, Elf3, inflammatory factors, osteocalcin (OCN) and bone morphogenetic protein 2 (BMP2) in mouse femoral tissues was assessed. The pathological changes in mouse femur tissues were observed. The mouse osteoblasts were identified and treated with untransfected or transfected BMSC-exos, and then, the expression of miR-206, Elf3, OCN and BMP2 was determined. The alkaline phosphatase (ALP) activity, calcium deposition level, OCN secretion, proliferation, apoptosis and cell cycle arrest in osteoblasts were measured. MiR-206 was down-regulated while Elf3 was up-regulated in OA animal and cellular models. Exosomal miR-206 ameliorated inflammation and increased expression of OCN and BMP2 in mouse femoral tissues. Moreover, exosomal miR-206 promoted ALP activity, calcium deposition level, OCN secretion and proliferation and inhibited apoptosis in OA osteoblasts. Overexpressed Elf3 reversed miR-206 up-regulation-induced effects on OA osteoblasts. BMSC-derived exosomal miR-206 promotes proliferation and differentiation of osteoblasts in OA by reducing Elf3. Our research may provide novel targets for OA treatment.     

BrdU体内示踪骨髓基质干细胞生物学状态的效果分析

目的:探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)体内示踪骨髓基质干细胞(BMSCs)生物学状态的效果。方法:抽取健康成年比格狗骨髓,在传代培养中进行Brd U标记并鉴定,体外实验中测定细胞周期、凋亡率和细胞活力;在体内实验中将标记Brd U的骨髓基质干细胞植入自体股骨头缺损处,另一侧单纯植入自体骨作为对照,记录成骨量与分子标记物的表达情况。结果:骨髓基质干细胞的Brd U体外标记率为85.2%。Brd U组的细胞凋亡率为3.62±1.33%,未标记组为3.52±1.08%;Brd U组与未标记组的细胞成活率分别为96.31±1.39%和95.20±2.10%,两组对比差异均无统计学意义(P0.05)。移植侧Brd U标记的骨髓基质干细胞免疫组化观察可见Brd U免疫组化染色阳性,阳性率为81.6%。骨髓基质干细胞移植侧缺损区的骨钙素、Ⅰ型胶原阳性细胞表达数量与强度明显高于对照侧缺损区;骨髓基质干细胞移植侧成骨量为17.46±2.12%,对照侧为9.06±1.24%,两两对比差异有统计学意义(P0.05)。结论:Brd U在体外示踪骨髓基质干细胞能有效反映细胞的生物学状态,体内示踪显示移植的骨髓基质干细胞能成活,能促进骨组织形成和坏死骨修复。     

Ameliorative Effect of Bone Marrow-Derived Stem Cells on Injured Liver of Mice Infected with Schistosoma mansoni

The technique of stem cells or hepatocytes transplantation has recently improved in order to bridge the time before whole-organ liver transplantation. In the present study, unfractionated bone marrow stem cells (BMSCs) were harvested from the tibial and femoral marrow compartments of male mice, which were cultured in Dulbecco''s modified Eagle''s medium (DMEM) with and without hepatocyte growth factor (HGF), and then transplanted into Schistosoma mansoni-infected female mice on their 8th week post-infection. Mice were sacrificed monthly until the third month of bone marrow transplantation, serum was collected, and albumin concentration, ALT, AST, and alkaline phosphatase (ALP) activities were assayed. On the other hand, immunohistopathological and immunohistochemical changes of granuloma size and number, collagen content, and cells expressing OV-6 were detected for identification of liver fibrosis. BMSCs were shown to differentiate into hepatocyte-like cells. Serum ALT, AST, and ALP were markedly reduced in the group of mice treated with BMSCs than in the untreated control group. Also, granuloma showed a marked decrease in size and number as compared to the BMSCs untreated group. Collagen content showed marked decrease after the third month of treatment with BMSCs. On the other hand, the expression of OV-6 increased detecting the presence of newly formed hepatocytes after BMSCs treatment. BMSCs with or without HGF infusion significantly enhanced hepatic regeneration in S. mansoni-induced fibrotic liver model and have pathologic and immunohistopathologic therapeutic effects. Also, this new therapeutic trend could generate new hepatocytes to improve the overall liver functions.     

阿司匹林对体外培养骨髓基质细胞成骨性分化的影响

目的：探讨阿司匹林对骨髓基质细胞成骨性分化的影响。方法：培养SD大鼠骨髓基质细胞（BMSCs）,传代3次后进行成骨诱导分化,诱导培养基中加入不同浓度阿司匹林（0.5、1、2、5、10mmol/L）,同时设立对照组。采用cck-8法分析细胞增殖情况。比较阿司匹林组与对照组在细胞碱性磷酸酶（ALP）活性、骨钙素（OC）分泌量、钙结节染色等方面的成骨性差异。结果：阿司匹林无促进细胞增殖活性,而高浓度阿司匹林能够强烈抑制细胞增殖。0.5、1、2mmol/L浓度阿司匹林可促进BMSCs的成骨性分化,中低浓度组碱性磷酸酶含量、骨钙素分泌量在不同阶段显著高于对照组。14天茜素红染色可见中低浓度组钙结节数量高于对照组。结论：中低浓度阿司匹林作用于骨髓基质细胞可促进其成骨细胞特性表达,这表明阿司匹林有促进骨代谢合成的作用。     

乙酰水杨酸预处理骨髓间充质干细胞对实验性牙周炎大鼠的治疗作用

本研究旨在探讨应用乙酰水杨酸(ASA)预处理的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)治疗对大鼠牙周炎模型中的牙周骨修复的影响。通过建立大鼠牙周炎动物模型并使用ASA和BMMSCs联和治疗大鼠,本研究检测了体外BMMSCs的成骨分化、成脂分化、碱性磷酸酶(ALP)活性及成骨相关基因(ALP和OCN)的表达,并检测大鼠相关炎症因子(TNF-α,IL-17和IL-10)水平。结果显示,使用成骨培养基诱导BMMSCs后,可清晰地观察到BMMSCs的成骨分化和成脂分化。体外研究显示,60μg/mL的ASA显著促进了体外BMMSCs的增殖,提高了碱性磷酸酶(ALP)活性,促进了钙沉积和上调了成骨相关基因(ALP和OCN)的表达。此外,与未治疗的牙周炎大鼠比较,经ASA-BMMSCs治疗的牙周炎大鼠的TNF-α和IL-17水平显著下降,而IL-10显著升高。本研究表明,60μg/mL的ASA显著促进了体外BMMSCs的增殖和成骨分化。ASA和BMMSCs联用能够调节大鼠体内相关细胞因子的表达,并减轻炎症反应,可能是牙周炎治疗和牙周骨再生的有效方法。     

牙源性干细胞复合微渠多孔羟基磷灰石支架成骨性能研究*

目的: 探讨牙源性干细胞复合微渠多孔羟基磷灰石支架(grooved porous hydroxyapatite scaffolds, HAG支架)的成骨性能,为骨缺损修复治疗提供新手段。方法: 从健康成人第三磨牙中提取牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells, PDLSCs)及牙髓干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)分别接种于HAG支架上,进行多向分化鉴定及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定;并通过CCK-8检测细胞增殖能力;逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2, BMP-2)、骨钙素(osteocalcin, OCN)和骨桥蛋白(osteopontin, OPN)等成骨相关基因的表达。体内研究中将搭载PDLSCs和DPSCs的HAG支架移植到裸鼠的背部皮下,8周后取材,组织切片后采用苏木精-伊红(HE)染色观察新骨形成,提取组织蛋白采用Western blot检测ALP、OCN等成骨相关蛋白的表达。结果: 体外研究中DPSCs复合HAG支架组的细胞增殖能力、ALP活性,以及成骨相关基因ALP、BMP2、OCN等的表达均高于PDLSCs复合HAG支架组。体内研究中HE染色显示,PDLSCs复合HAG支架组及DPSCs复合HAG支架组均较空白HAG支架组有更多细胞生长区、纤维细胞增生及骨基质形成,且DPSCs复合HAG支架组的骨基质面积更大,成纤维细胞数量更多;PDLSCs复合HAG支架组及DPSCs复合HAG支架组成骨相关蛋白的表达量均高于空白HAG组,且DPSCs复合HAG支架组中ALP蛋白表达量显著高于PDLSCs复合HAG支架组。结论: PDLSCs、DPSCs复合HAG支架在体内外均表现出良好的成骨性能,其中DPSCs复合HAG支架的成骨性能更为优异。     

熊果酸对酒精性骨质疏松大鼠骨形成、骨矿化的影响

目的：探讨熊果酸对酒精所致骨质疏松大鼠骨形成、骨矿化的影响。方法：雄性Wistar大鼠60只,按体重随机分为空白对照 组、熊果酸对照组、模型组、熊果酸低、中、高剂量组,同时分别给予生理盐水、150 mg/kg 熊果酸、50%酒精,50 mg/kg 熊果酸,100 mg/kg 熊果酸,150 mg/kg 熊果酸灌胃。熊果酸对照组生理盐水剂量同空白组,熊果酸低、中、高剂量组酒精剂量同模型组。灌胃共 持续8 周。磷钼酸法检测血清磷(P)含量,比色法检测血清钙(Ca)含量,酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清骨钙素(BGP)、骨形成蛋 白-2(BMP-2)浓度;HE 染色法观察股骨结构的病理学变化。结果：与空白对照组相比较,模型组血清BGP、BMP-2 和Ca、P 均明显 降低,且有统计学差异(P < 0.05),但熊果酸对照与空白对照组各项指标结果相近。熊果酸中、高剂量组大鼠血清BGP、Ca 和P 水 平均较模型组有显著升高,差异具有统计学意义(P < 0.05),但仅熊果酸高剂量组血清BMP-2 显著升高(P < 0.05)。股骨组织HE 染色结果显示,空白对照组骨小梁致密、规则且较粗,粗细均匀;模型组骨小梁稀松、不规则、粗细不均匀,甚至可见骨小梁断裂; 熊果酸中、高剂量组骨小梁致密、规则、较厚、粗细均匀,未见骨小梁断裂。结论：熊果酸能够促进酒精性骨质疏松大鼠的骨形成, 抑制骨矿物质的流失,在改善酒精致骨质疏松方面有一定的保护作用。     

尾静脉注射骨髓间充质干细胞对1型糖尿病幼鼠的治疗作用实验研究

目的:比较尾静脉注射骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)幼鼠的效果。方法:选用3周龄C57bl/c幼鼠作为受试动物,连续5 d腹腔注射50 mg/kg的链脲佐菌素(STZ),建立T1D模型;采用酶消化法联合骨片法从2周龄C57bl/c幼鼠的胫骨和股骨中分离出BMSCs;碱性磷酸酶(ALP)和油红O染色检测P3代BMSCs的诱导分化能力;流式细胞仪鉴定P3代BMSCs的细胞表型;采用生理盐水和不同剂量的BMSCs(低剂量6×10⁵cells/mL、中剂量1.2×10⁶cells/mL和高剂量2.4×10⁶cells/mL)通过尾静脉输注的方式对T1D幼鼠进行治疗,定期检测T1D幼鼠的体重、血糖变化;T1D幼鼠治疗28 d后,取其胰脏行病理学分析。结果:(1)3周龄C57bl/c幼鼠注射STZ后14 d,幼鼠表现为体重增长缓慢、血糖明显升高;(2)分离得到的BMSCs细胞呈长梭纤维状;BMSCs成骨诱导9 d,碱性磷酸酶(ALP)染色后细胞外基质有大量碱性磷酸酶表达;BMSCs成脂诱导14 d,油红O染色后细胞内有大量脂滴出现;流式细胞仪检测BMSCs细胞表型,BMSCs不表达CD31、CD34和CD45,高表达CD29、CD90和CD105;(3)T1D幼鼠经过BMSCs治疗后,其体内的血糖下降并保持稳定;H.E.和胰岛素免疫组织化学染色结果显示实验组T1D幼鼠的胰腺组织随着治疗时间的延长,其损伤的胰腺组织得到了逐步的恢复,而未经过任何治疗的T1D幼鼠,其胰腺组织的损伤在逐步加重。结论:尾静脉注射BMSCs对于T1D幼鼠有治疗效果。     

高糖和bFGF对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的：骨组织的形成是一个复杂的过程,受多种因素的影响,糖尿病所导致的持续高血糖对于成骨分化的影响机制尚不明确,以及在此分化过程中的各种细胞因子的作用机理仍不明了,现拟通过体外成骨诱导环境,观察高糖和碱性成纤维细胞生长因子（fibroblastgrowthfactorbFGF）对人骨髓间充质干细胞（humanmesenchymalstemcellshMSCs）成骨分化的影响。方法：hMSC在5．5mmol／L和25mmol／L葡萄糖浓度下培养6天,使用cck一8法测定各组细胞增殖情况;hMSC在两种糖浓度下成骨诱导28天,通过碱性磷酸酶（ALP）活性检测、茜素红染色、钙结节半定量检测,对比各组成骨分化活性;在两种糖浓度成骨诱导液中加入10ng／mlbFGF,使用RT—PCR技术检测各组细胞OCN、OPNmRNA表达差异。结果：高糖较正常糖浓度细胞增殖率下降,ALP活性降低,茜素红染色钙结节量减少,RT—PCR检测结果显示25mmol／L组OCN、OPNmRNA表达量低于5．5mmol／L组,加入bFGF后,25mmol／L组仍低于5．5mmol／L组,与未添加bFGF同葡萄糖组比较表达增加。结论：高糖使hMSC增殖能力下降,在成骨分化的过程中ALP活性降低,成骨相关基因OCN、OPN表达量下降,证明了高糖对hMSC成骨分化具有抑制作用,当加入bFGF后,改善了高糖对hMSC的抑制作用,提示糖尿病条件下高糖的存在是导致hMSC成骨分化能力下降的不利因素,同时初步证明了bFGF参与了成骨分化的过程,从而为在分子水平探讨糖尿病患者种植义齿骨结合形成相关机制奠定初步的基础．．