LPS通过上调BMP4促进猪主动脉瓣膜间质细胞成骨样分化

该文主要探究了LPS通过上调骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)促进猪主动脉瓣膜间质细胞(valve interstitial cells,VICs)成骨样分化的作用及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的干预及治疗提供理论依据。采用免疫组化法检测非CAVD组和CAVD组瓣膜组织中Runx2和BMP4的表达,Western blot检测Runx2和BMP4的蛋白表达;采用胶原酶(I型)消化瓣膜后分离猪VICs,用免疫荧光染色进行表型鉴定;采用LPS和重组人BMP4腺病毒处理VICs;用ALP染色、茜素红S染色、qRT-PCR和Western blot法检测细胞的早期和晚期成骨能力、Smad1/5/8和ERK1/2的磷酸化水平。结果显示,BMP4和Runx2蛋白在CAVD组中的表达水平明显高于non-CAVD组。原代猪VICs分离成功,其中α-SMA和Vimentin呈阳性,CD31呈阴性。LPS可使VICs ALP活性增强、钙盐沉积增多、钙化指标上升和BMP4增加;BMP4可使VICs ALP活性增强、钙盐沉积增多、钙化指标上升,且使Smad1/5/8和EKR1/2的磷酸化水平升高。提示LPS可以上调BMP4的表达进而促进VICs的成骨样分化,Smad1/5/8与ERK1/2信号通路可能在该过程中发挥重要作用。     

里白的组织培养与快速繁殖

1植物名称 里白[Hicriopteris glauca（Thunb.）Ching]。 2材料类别 成熟孢子。 3培养条件孢子萌发培养基：（1）1/2MS;配子体（原叶体）增殖培养基：（2）MS＋6-BA0.5mg·L-1（单位不同）     

趋化因子受体CX3CR1调控人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用研究

目的:探究趋化因子受体CX3CR1调控人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用和机制,为钙化性主动脉瓣膜疾病的早期干预和治疗提供新思路。方法:取非钙化主动脉瓣(3例)和钙化主动脉瓣(5例),免疫组织化学染色检测成骨相关转录因子Runx2、骨桥蛋白OPN和骨钙蛋白OCN的表达;取3例非钙化的主动脉瓣,采用胶原酶连续消化法分离人主动脉瓣膜间质细胞,观察细胞形态及生长状态,并采用细胞免疫荧光进行表型鉴定。对成骨诱导培养的人主动脉瓣膜间质细胞分别过表达和干扰趋化因子受体CX3CR1,平行设置CM组、OM组和negative control+OM组,采用qPCR和Western blot检测Runx2、OPN和OCN的表达,Western blot检测AKT和p-AKT的表达。茜素红S染色评价晚期钙结节形成情况。结果:临床标本显示钙化的主动脉瓣较非钙化的主动脉瓣高表达CX3CR1(P 0. 05);成功分离人主动脉瓣膜间质细胞,α-SMA和Vimentin阳性,vWF阴性。与CM、OM、negative control组比较,CX3CR1+OM组Runx2、OPN和p-AKT表达上调(P 0. 05),且茜素红S染色可见明显钙结节;与CM、OM、negative siRNA control+OM组比较,si CX3CR1+OM组Runx2、OPN和p-AKT表达下调(P 0. 05),且茜素红S染色可见钙结节减少。结论:趋化因子受体CX3CR1可能通过AKT信号通路促进人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化。     

黑木相思愈伤组织诱导及植株再生

以黑木相思(Acacia melanoxylon)优良单株(AMY12004)的当年新生枝条带腋芽茎段为外植体, 灭菌后接入MS培养基上培养, 以其无菌萌芽的叶片、茎段和叶柄为实验材料, 通过间接器官发生途径建立黑木相思愈伤组织诱导及高频植株再生体系。研究结果表明, 诱导愈伤组织的最佳外植体为茎段; 愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+1.5 mg·L–16-BA+0.2 mg·L–1NAA+3%蔗糖, 诱导率为93.33%; 愈伤组织再分化的最佳培养基为MS+2.0 mg·L^–16-BA+0.5 mg·L^–1NAA+3%蔗糖, 分化率为79.17%, 再生系数为9.58; 再生芽生根的最佳培养基为MS+0.5 mg·L^–1IBA+0.5 mg·L^–1NAA+4%蔗糖, 生根率为96.05%, 移栽存活率为81.40%。     

趋化因子受体CX3CR1对人肝癌细胞7721和HepG2的作用及其机制的研究

目的:探究趋化因子受体CX3CR1(C-X3-C motif chemokine receptor 1,CX3CR1)对人肝癌细胞7721和Hep G2增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:采用Q-PCR和Western blot法分别检测人正常肝细胞LO2和两种肝癌细胞(7721和Hep G2)中CX3CR1的基因表达情况(mRNA和蛋白质);以过表达CX3CR1的质粒转染7721细胞,用抑制CX3CR1的干扰RNA转染Hep G2细胞,通过Q-PCR和Western blot法检测CX3CR1的变化;应用MTT和流式细胞实验检测各组细胞的增殖能力;用集落形成实验检测各组细胞的自我更新和增殖能力;借助划痕愈合和Transwell检测各组细胞的迁移和侵袭能力;利用Western blot法检测PI3K/AKT、MAPK/ERK信号通路的激活情况。结果:CX3CR1在7721细胞中mRNA和蛋白质呈低表达趋势,而在Hep G2细胞中则呈高表达趋势;转染过表达CX3CR1质粒后7721细胞中CX3CR1的mRNA和蛋白水平有明显的升高,细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强,p-AKT和p-ERK水平升高;转染干扰RNA后Hep G2细胞中的CX3CR1表达水平明显下降,增殖、迁移、侵袭能力减弱,p-AKT和p-ERK水平降低。结论:趋化因子受体CX3CR1可以促进人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,该作用可能与PI3K/AKT、MAPK/ERK信号通路激活有关。     

马大杂种相思瓶内和瓶外生根技术研究

以增殖培养的马大杂种相思无菌苗为材料,进行瓶内生根（采用增殖培养30 d,2~3 cm的无菌苗）和瓶外生根（采用增殖培养45 d,3~5 cm的无菌苗）技术的研究,并对2种生根技术进行了经济效益的简单比较分析。结果表明：将增殖培养30 d的马大杂种相思无菌苗接入1/2MS+IBA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1+蔗糖30%的培养基中,生根率可达99.43%,15 d后移栽,存活率达98.0%;而将增殖培养45d的马大杂种相思无菌苗用100 mg·L^-1的IBA溶液浸泡1 h进行瓶外生根实验,生根率可达94.67%。按生产10 000株苗计算,瓶外生根的经济效益比瓶内生根的多1 288.26元,效益比较可观,瓶外生根技术可以应用于马大杂种相思组培苗的大量生产。     

植物生长调节剂对黑木相思优树腋芽增殖及生根的影响

为建立黑木相思(Acacia melanoxylon)快繁技术体系,以含1个腋芽的无菌茎段为材料,研究了植物生长调节剂对其增殖和生根的影响。结果表明,6-BA 极易诱导黑木相思愈伤组织形成,但芽长势较差,不利于腋芽增殖体系的建立。而生长素既能诱导黑木相思生根,又能诱导腋芽增殖;将无菌茎段接入MS+IAA 0.5 mg L^-1+IBA 0.5 mg L^-1培养基中培养20 d的生根率为98.41%,培养40 d的腋芽增殖倍数为2.36,单株繁殖系数为6.57。这是首次成功建立高效、简便的生根和增殖同步发生的黑木相思直接器官发生途径的组培技术体系。     

BaP通过AhR抑制BMP2诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

该文主要研究苯并芘(benzoapyrene,Ba P)对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)介导的间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化的影响,并探究这种作用的调控机制。用腺病毒Ad-BMP2感染C3H10T1/2细胞,RT-PCR检测到BMP2的表达水平显著增高(P0.001),芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,Ah R)的表达则无显著差异。随后加入不同浓度Ba P处理,检测Ba P对BMP2诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化的影响,处理7天检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的染色和活性,14天检测茜素红S染色。结果显示,Ba P可以剂量依赖的方式抑制BMP2介导的ALP和钙盐沉积(P0.001);Western blot检测结果显示,Ba P可以剂量依赖的方式抑制BMP2诱导的p-Smad1/5/8(p-drosophila mothers against de-capentaplegic 1/5/8)及Runx2的表达(P0.01,P0.001)。应用Ah R拮抗剂CH223191后,测定结果显示,其可部分逆转Ba P对BMP2诱导的C3H10T1/2细胞早晚期成骨分化及BMP2/Smad信号通路的抑制作用(P0.05,P0.001)。该研究结果提示,Ba P可通过Ah R抑制BMP2介导的促进间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化,这一过程与BMP2/Smad信号通路受到抑制有关。     

颗粒蛋白前体抑制钙盐诱导主动脉瓣膜间质细胞成骨分化

该文主要研究颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)对猪主动脉瓣膜间质细胞(valve interstitial cells,VICs)成骨分化的影响及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的早期干预及治疗提供理论依据。采用免疫组化检测正常组和CAVD组中Runx2、OPN的表达,Western blot检测PGRN、纤维化指标α-SMA、钙化指标(Runx2、OPN)的表达以及AKT磷酸化水平。采用胶原酶连续消化法分离VICs,并用免疫荧光染色行表型鉴定。体外实验加入人PGRN重组蛋白,采用ALP染色、茜素红S染色、qPCR和Western blot检测细胞早期及晚期成骨分化能力以及AKT的磷酸化水平;并加入AKT的激活剂SC-79进行反向验证。结果表明,与正常组织相比,CAVD瓣膜组织中PGRN明显降低,α-SMA、Runx2、OPN和p-AKT在CAVD组中表达均明显高于正常组。成功分离出原代VICs,α-SMA和vimentin阳性,vWF阴性。PGRN可使VICs的ALP活性降低、钙盐沉积明显减少;PGRN可下调纤维化/钙化指标,且AKT的磷酸化水平降低;SC-79可减弱PGRN对纤维化/钙化指标的下调作用。提示PGRN能够抑制静止的VIC向肌纤维母细胞样的活化VIC乃至成骨样VIC进行转化,AKT信号通路可能在该过程中发挥重要作用。     

用FRET方法研究与Mps1蛋白有相互作用的CENP-E蛋白结构域

目的：探索与Mps1蛋白有相互作用的CENP-E蛋白结构域。方法：将重组质粒pEGFP-CENPE2（674~1085位氨基酸）、pEGFP-CENPE3（1200~2134位氨基酸）转染人胚肾293(HEK293)细胞,采用受体漂白荧光共振能量转移方法（FRET方法）,检测EGFP-CENPE2、EGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率(Ef), 进一步用免疫共沉淀方法验证FRET的实验结果。结果：重组质粒转染HEK293细胞后经激光共聚焦显微镜观察重组质粒表达的融合蛋白与Mps1都存在着共定位;FRET检测结果显示EGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率为［(12.63±0.48)%, n=30］,pEGFP-CENPE2和Mps1间的能量转移率为［(3.07±0.21)%, n=30］,与对照组［(2.96±0.27)%, n=30］比较pEGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率差异存在显著性（p<0.05）,免疫共沉淀实验结果显示EGFP-CENPE3与Mps1蛋白间存在相互作用。结论：FRET技术和免疫共沉淀实验证明了EGFP-CENPE3与Mps1间存在着相互作用。