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磁性聚乙二醇载体固定化葡萄糖淀粉酶的研究 总被引:12,自引:3,他引:9
以磁性聚乙二醇为载体,通过吸附-交联法固定化糖化酶.研究了戊二醛浓度、pH值及加酶量对酶固定化的影响.并对固定化酶的最适温度、最适pH、米氏常数、热稳定性及操作稳定性等进行了探讨. 相似文献
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本研究首次发现Monodictyx asperospera(Cooke&Massee)Ellis具有较好的产漆酶能力.粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE-纤维素层析及丙烯葡聚糖凝胶S-300层析纯化,纯化倍数为8.1,回收率为5.7%.漆酶分子量约为77kD,最适反应温度为55℃,最适反应pH6.0,以丁香醛连氮为底物时Km为0.163mm0l/L,Vmax为0.194 mmol(L·min),含糖量为18.14%,Cu2+对漆酶有明显抑制作用. 相似文献
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用离子型多孔聚苯乙烯固定化了糖化酶。研究了制孔剂比例对载体孔径的影响。用麦芽糖做底物,三乙醇胺基聚苯乙烯载体使固定化糖化酶的最适pH向左移动约2个pH单位;磺酸基苯胺基聚苯乙烯载体使固定化糖化酶最适pH向右移动2个单位。固定化酶最适pH的移动值随缓冲液浓度的增加而减少。用可溶性淀粉为底物时固定化糖化酶的pH—活力曲线变宽。用dextrin作底物,天然糖化酶的Km为3.47×10~(-3)mol/L,固定化糖化酶的素质K_m为4.17×10~(-3)mol/L,表现K_m(app)为1.11×10~(-2)mol/L。延长重氮化反应时间,得到2000ug~(-1)干胶的高活力固定化糖化酶。 相似文献
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几种纤维素及无机吸附载体对青霉素酰化酶的吸附作用及其固定化 总被引:1,自引:0,他引:1
本文就几种纤维素和无机吸附载体对青霉素酰化酶的吸附作用及其固定化进行了研究,结果表明:DEAE-纤维素、EYI-纤维素、微晶纤维素、CM-纤维素、羟基磷灰石、中性氧化铝、硅藻土及粉末状膨润土对青霉素酰化酶都有很强的吸附能力,其固定化青霉素酰化酶的比活分别在1.47~19.43u/g之间,活力回收率为16.3%至84%,几种固定化酶的最适pH均较游离酶低,且其操作稳定性较好。 相似文献
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1.用甘蔗渣纤维素及对-β-硫酸酯乙砜基苯胺为原料,研究了ABSE-纤维素的制备条件,探讨了黑曲霉(Asp. Niger)粗制糖化酶共价键台到重氮化的ABsE一纤维素上的影响因子。获得ABSE-纤维素糖化酶合适的制备方法。
2.ABSE-纤维素糖化酶含3.7-6.4%蛋白量,酶活力约为10000单位/克,以淀粉为底物,与自然酶比较,相对活力为20—30%,满联时加入适量的硫酸铵能提高相对活力至43.9%。该水不溶酶最高活力是在pH4.5和65~70℃(对淀粉)。在55℃淀粉化液液中稳定性良好。
3.将ABSE-纤维素糖化酶(33912单位)装柱,在55℃,以25.4毫升/小时的流速通过pH 4.5的3l~34%的淀粉液化液进行连续糖化,218小时内得到DE值为93.9的葡萄糖液,326小时后不溶酶柱仍保持原活力的74.9%。而搅拌糖化在140小时后只保持64.8%原活力. 相似文献
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<正> 葡萄糖异构酶(GI)将糖化酶(GA)的水解淀粉产物葡萄糖转化为果糖。这二种酶是生产高果糖浆(HFCS)不可缺少的酶。我们根据离子型载体可以改变固定化酶最适PH的道理,将GA固定在磺酸型聚苯乙烯载体上,其最适pH由4.6移到了6.8。将GI固定在季胺多羟基聚苯乙烯载体上,其PH-活力曲线变宽,在pH7.0的活力由48%提高到66%。本文首次创建了使两种酶的最适PH相向移动的双酶共反应体系。其意义在于更加广泛地利用固定化多酶体系的动力学优势。 相似文献
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黑曲霉糖化酶的分离纯化及其性质 总被引:7,自引:0,他引:7
采用硫酸铵分级DEAE-纤维素离子交换层析、Sephadez G—150凝胶过滤等方法,从黑曲霉AS 3.4309变异株B-11的发酵液中分离出三种电泳均一的糖化酶(GI、Gill、GII)。其收率分别为0.8%、50%和18.6%。GI、Gill和GII的分子量分别为27000、67000和53000;等电点分别为3.38、3.52和3.59;含糖量分别为8.7%.13.6%和18.3%;最适pH分别为4.4、4.6和4.6;对可溶性淀粉的Km值分别为2.0、0.77和1.18g/L;二级结构中a-螺旋含量分别为18.4%、23.9%和28.9%;最适温度均为70℃。生淀粉可吸附Gill,吸附率达80%。此外还测定了三种同工酶的氨基酸组成及含量。GI、GII和GIII均由一条多肽链组成。 相似文献
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用硫酸铵分段盐析、超滤膜分级分离及DEAE-纤维素、Sephadex A-25和Sephadex G-50三种柱层析方法从双胸蚓组织的粗提取液中分离纯化出一种纤溶酶,分子量为29kD,由一条肽链组成。此晦具有强烈的溶解纤维蛋白的作用,对家兎实验性血凝块也具有明显的溶解作用。此酶的最适pH为8.0,在pH7.6~8.4之间活力相差不到2%;酶在PH4.7—11.0范围内稳定;酶作用的最适温度为57℃;此酶热稳定性较好,于25~50℃保温3小时,酶活力基本不变,60℃时,活力保留65%。金属离子Na~(+)、K~(+)、Mg~(2+)等可提高此酶的活力,而Hg~(2+)、Ca~(2+)等金属离子对此酶有不同程度的抑制作用。 相似文献
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产糖化酶黑曲霉固定化方法比较的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
采用海藻酸钙凝胶电埋法、以沸石、多孔聚酯等材料为固定化载体的吸附法固定黑曲霉(Aspergillus niger AS3.4309)菌丝细胞,以游离菌丝体作为对照,进行发酵产糖化酶的比较,结果表明:以聚酯泡沫作为固定化载体吸附固定化菌丝细胞产糖化酶活力最高。在产糖化酶的发酵过程中,与游离菌丝体细胞相比,固定化黑曲霉持续产酶时间有一定程度的延长。 相似文献
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解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)发酵液经硫酸铵分级沉淀、HiPrep26/10 Desalting柱脱盐、HiPrepDEAE FF16/10阴离子交换柱、HiPrep 16/60 Sephacryl S-100凝胶柱、HiPrep 16/10 Source 30S阳离子交换柱等,最终纯化出单一组分的木葡聚糖酶,经过SDS-PAGE电泳分析,此木葡聚糖酶相对分子量约为39 kD。该菌所产木葡聚糖酶的最适反应温度是50℃,在60℃以下较稳定;最适反应pH是7.0,在pH5.0-10.0范围内酶活力较为稳定。酶的动力学研究显示Km为65 g/L,Vmax为6.49μmol/min,kcat=10.86 s-1。底物特异性研究表明对木葡聚糖具有较高比活力。酶蛋白经质谱分析,比对结果显示与来源于Paenibacillus pabuli的木葡聚糖酶有较高同源性。本研究为首次报道解木聚糖类芽孢杆菌(P.xylanilyticus)产木葡聚糖酶。 相似文献
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产外切葡聚糖酶真菌的筛选鉴定及毕赤酵母中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】外切葡聚糖酶是纤维素酶组分中一类对结晶纤维素有降解作用的酶类,如何提高外切葡聚糖酶活力是研究的关键问题。【方法】从筛选鉴定得到的一株产外切葡聚糖酶酶活较高的黑曲霉Asp-524菌株出发,通过PCR技术克隆得到外切葡聚糖酶基因序列,生物学信息分析后,构建了毕赤酵母诱导型表达载体,实现了该基因在毕赤酵母中的成功表达。【结果】抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导5 d后,酶活达到4.74 U/mL。酶学性质分析显示重组外切葡聚糖酶最适pH为5.0,pH稳定性分析显示在pH为4.0-6.0范围内相对稳定,酶活能保持在最高酶活力的80%以上,最适反应温度为50°C,经60°C保温1 h后,酶活仍能保持80%以上。【结论】结果说明该外切葡聚糖酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,这一研究为纤维素酶的实际应用奠定了一定基础。 相似文献
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酶固定化的新型载体──PF凝胶应用研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用对苯二酚和甲醛在酸催化下制得新一类凝胶,此凝胶价廉,易于制备,多孔、无毒、亲水性强;能选择性吸附多糖,而用于多糖与低聚糖及单糖的分离;可作为载体对多种酶及蛋白质给予固定,与蛋白质的最大结合量为558mg/g,固定糖化酶时的活力回收达84%;此固化酶对淀粉的转化率达93%,当加入一定量的间苯二酚,可得改性的PF凝胶,其性能又有提高,可见PF凝胶为新型的酶的固定化优良载体. 相似文献
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为了提高糖化酶的耐热性能,降低淀粉糖化发酵工艺的生产成本,构建了同源整合载体pEasy-glaAdir以及pEasyssg,将黑曲霉(Aspergillus niger)的糖化酶基因(glaA)灭活,并将硫磺矿硫化叶菌(Sulfolobus solfataricus)的嗜热糖化酶基因(ssg)插入到黑曲霉基因组中,筛选得到表达嗜热糖化酶的重组黑曲霉工程菌(A.nigerWW1)。重组菌的发酵结果显示,嗜热糖化酶在黑曲霉中得到了分泌表达,发酵液酶活达到3 030 U/mL。重组嗜热糖化酶的最适反应温度为90℃,最适pH为6.0,该酶具有较高的热稳定性,在80℃时的半衰期在60 min以上,具有良好的工业应用前景。 相似文献
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接枝淀粉载体固定化糖化酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
合成了淀粉接枝丙烯腈及丙烯酰胺的两亲性高分子化合物,并以此为载体,用物理吸附方法固定化了糖化酶。最适偶联条件研究表明:缓冲液的浓度,pH值及吸附时间和加酶量都对固定化酶活力,比活有一定的影响。在最适固定化条件下,固定化酶的活力为1500U/g干胶,蛋白载量为25mg/g干胶,比活为60U/mg蛋白,比天然酶的比活(8.0U/mg蛋白)提高6倍。最适反应温度比天然酶提高10℃(天然酶最适反应温度为50℃).无底物存在下,固定化酶在55℃的半衰期为24h,而天然酶只有1h;有底物存在下,固定化酶在55℃的半衰期为220h,45℃的操作半衰期由外推法算得为69天,而且该载体对糖化酶有一定的保护作用,当固定化酶在低于55℃热处理一段时间后,对酶活力有激活作用,酶活力最大可提高40%。该载体合成简单,固定化方法简单,步骤少,因而为工业上应用提供了一种新的可能性。 相似文献