微波法和超声波法提取绿穗苋多糖响应面优化研究

绿穗苋是一种药食兼用作物,其中多糖成份具有很高的药食价值。本研究以绿穗苋地上部分为材料,以微波和超声波两种方法对绿穗苋多糖进行提取,并通过响应面分析法对提取进行优化,确定最佳工艺,通过水提醇沉的方法得到绿穗苋粗多糖。综合比较两种提取工艺,提取效果最佳工艺为微波提取法。其条件为:提取时间41.42 min,提取功率211.65 W,料液比1:33.338 (g/mL),实际得率为13.25%。该研究结果促进绿穗苋资源的有效利用,为绿穗苋多糖的提取工艺及产品的开发利用提供理论依据。     

金龙胆草提取液体外抑菌活性分析

金龙胆草是传统道地中药材,但目前受到材料来源不足的限制,其应用和研究均受到很大限制,为更好地开发和应用该道地中药材,本研究以实验室野生金龙胆草和组培金龙胆草出发,分别采用热水浴和索式提取法对金龙胆草有效成份进行了提取和体外抑菌活性研究。结果表明,热水浴浸提法的抑菌效果优于索式提取法,均表现出对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌这类革兰氏阳性菌有很好的抑制效果,最小抑菌浓度分别达到12.5 mg/mL和50 mg/mL。野生型提取液和组培型的提取液体外抑菌比较实验显示,野生型金龙胆草的抑菌效果要显著优于组培型金龙胆草提取液。这将为金龙胆草作为中药抗菌药的合理利用提供一定的指导作用,同时为减少抗生素的滥用造成的环境污染作出一定的贡献。     

反胶束法萃取核桃胰蛋白酶抑制剂及其抗虫研究

植物胰蛋白酶抑制因子对植物本身具有保护作用,能调节植物蛋白质的合成和分解,并具有抗虫作用。为明确核桃蛋白酶抑制剂对小菜蛾的抗虫效果,该研究采用AOT/异辛烷反胶束法和亲和层析法萃取及纯化核桃胰蛋白酶抑制剂,命名为WTI,并对其抑制活性和生物活性进行测试。迪克森作图法测得纯化的核桃胰蛋白酶抑制剂的抑制常数为2.1×10-9mol/L。抗虫试验表明,小菜蛾自1龄起至化蛹前的整个幼虫阶段中,核桃胰蛋白酶抑制剂均对其产生了较强的毒杀作用。尤其是在1-3龄期,效果最佳。与对照组相比,WTI能延迟小菜蛾的化蛹时间,降低其化蛹率。核桃胰蛋白酶抑制剂对小菜蛾有明显的毒杀作用,但不表现出明显的生长抑制作用,且一定浓度的核桃胰蛋白酶抑制剂能将小菜蛾扼杀在其化蛹之前,从而能够控制其繁殖。     

产外切葡聚糖酶真菌的筛选鉴定及毕赤酵母中的表达

【目的】外切葡聚糖酶是纤维素酶组分中一类对结晶纤维素有降解作用的酶类,如何提高外切葡聚糖酶活力是研究的关键问题。【方法】从筛选鉴定得到的一株产外切葡聚糖酶酶活较高的黑曲霉Asp-524菌株出发,通过PCR技术克隆得到外切葡聚糖酶基因序列,生物学信息分析后,构建了毕赤酵母诱导型表达载体,实现了该基因在毕赤酵母中的成功表达。【结果】抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导5 d后,酶活达到4.74 U/mL。酶学性质分析显示重组外切葡聚糖酶最适pH为5.0,pH稳定性分析显示在pH为4.0-6.0范围内相对稳定,酶活能保持在最高酶活力的80%以上,最适反应温度为50°C,经60°C保温1 h后,酶活仍能保持80%以上。【结论】结果说明该外切葡聚糖酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,这一研究为纤维素酶的实际应用奠定了一定基础。     

酵母菌和乳酸菌复合发酵木瓜酵素生物活性分析

为了获得木瓜酵素生物活性的相关情况,本研究从木瓜酵素化学成分含量、功效酶活力和抗氧化活性3个方面进行探究.结果 显示,总糖、总酚、总黄酮和蛋白质的含量分别为(3090.00±193.25)、(161.67±4.62)、(55.00±1.00)、(134.67±1.15) mg/L;淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶和总超氧化歧化酶(T-SOD)活力分别为(0.09±0.026)、(7.11±1.08)、(0.64±0.127)、(67.68±2.244) U/mL.木瓜酵素对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的IC50值分别为6.70％、28.91％、42.30％,其总抗氧化能力为(30.12±0.167) U/mL.本研究旨在完善对木瓜酵素的认知,推进果蔬酵素产业的发展.     

基于定点突变技术对苦荞麦胰蛋白酶抑制剂活性位点的研究

目的:为了研究胰蛋白酶抑制剂的活性位点,揭示Ft TI结构与功能的关系。将Ft TI和突变体aFtTI-R65L,aFtTI-D67V和aFtTI-R65L/D67V经IPTG诱导培养5h,收集菌液经过超声波破碎得到粗产物,经过纯化后的胰蛋白酶抑制剂对胰蛋白酶的摩尔抑制比分别为1∶1,1∶1.15,1∶1.3,1∶1.2;抑制常数Ki分别为1.62n M,1.69 n M,1.9 n M,1.8 n M(BAp NA作为底物)。结果:SDSPAGE分析表明突变前和突变后表达产物胰蛋白酶抑制剂的大小一致,均为9.5 k Da。对突变体aFtTI-R65L,aFtTI-D67V和aFtTI-R65L/D67V抑制反应温度研究表明,其最适反应温度均为40℃。在10~80℃保温30 min后,突变体对胰蛋白酶的抑制活性仍保留80%以上;在90℃保温30min,突变体的抑制活性开始显著下降,只保留其39%。具有较高的耐热性。将aFtTI在pH 3.0~10.0的不同缓冲溶液中放置30 min后,其抑制活性可保留90%左右,在pH 2.0条件下,aFtTI抑制活性丧失约31%;在pH 11.0条件下,aFtTI抑制活性丧失约43%。结论:对苦荞麦蛋白酶抑制剂Ft TI的定点突变并不会改变它是一种偏碱性的胰蛋白酶抑制剂的性质,突变前后均保持了耐碱性的特点。     

毕赤酵母中植酸酶和内切葡聚糖酶共表达菌株的构建及其高效表达(英文)

植酸酶和内切葡萄糖苷酶广泛应用于动物饲料添加剂中,能更有效地帮助饲料的利用,同时为动物的生命活动提供必需的重要物质。首先构建重组质粒pPICZα-EG,经过线性化后,电转化到含有植酸酶phyA基因的毕赤酵母感受态细胞中,构成含有植酸酶基因和内切葡萄糖苷酶基因的重组体菌株GS115-phyA-EG。经甲醇诱导后其活性分别达到出发菌株GS115-phyA和GS115-EG的39.4%和56.2%。酶学性质的分析显示,最适反应温度和最适反应的pH值分别为55℃和5.5,植酸酶和内切葡萄糖苷酶在温度为45℃~55℃,pH值为4.5~5.5时,酶活相对稳定,均能达到最高酶活的80%以上。结果表明这种在同一个系统种同时表达2种酶的方法能更好地节约时间和成本,使其在饲料工业的应用上有更广阔的前景。     

野生金龙胆草遗传多样性的RAPD分析及总黄酮成分在局群间的分布特征

探索来自18个采集地的金龙胆草RAPD遗传性分析及总黄酮成分在局群间的分布特征。采用筛选的10个随机引物,用NTSYSpc2.1软件计算材料间的Jaccard遗传相似系数(GS),并建立各种间的亲缘关系树形图,并利用紫外分光光度法测试各样品中总黄酮的含量。10个引物共扩出71个DNA片段,多态性DNA片段68个,占总扩增数的97.14%。18个金龙胆草种源可明显聚为2大类。总黄酮含量以攀枝花市范围的样品含量最高。不同种源金龙胆草间具有丰富的遗传多样性,总黄酮含量分布却与遗传聚类的分类有差异,提示今后在金龙胆草选育和道地药材研究上应该从多方面进行考虑。